antimikrobiální, antioxidační a hojivé vlastnosti Kigelia africana (Lam.) Beneth. a Strophanthus hispidus DC.

Abstrakt

mikrobiální infekce různých typů ran jsou výzvou pro léčbu ran a hojení ran. Studie měla zkoumat antimikrobiální a antioxidační vlastnosti extraktů methanolových listů a kmenových kůry Kigelia africana a methanolových listů a kořenových extraktů Strophanthus hispidus a také stanovit vlastnosti hojení ran extraktů. Antimikrobiální aktivity methanolových extraktů byly stanoveny proti dvěma grampozitivním a dvěma gramnegativním bakteriím a houbě pomocí metod difúze agaru a mikroředění. Antioxidační aktivita byla stanovena metodou 1,1-difenyl-2-pikryl-hydrazyl (DPPH). Vliv extraktů na rychlost uzavření rány byl zkoumán pomocí modelu excizní rány a histopatologického vyšetření ošetřených a neošetřených tkání rány. Mic listového extraktu k. africana proti testovaným organismům byly 2,5-7,5 mg / mL a extrakt z kmenové kůry 2,25–7.5 mg / ml. Extrakt z listů s. hispidus měl mic rozmezí 2,5-7,5 mg / mL a 2,5–10 mg/mL pro kořenový extrakt. IC50 extraktů z listové a kmenové kůry k. africana byly 56,9 a 13,7 µg / mL a list a kořen s. hispidus byly 49,8 a 45,1 µg/ml. Extrakty k. africana (7,5% hmotnostních) vykazovaly významnou () kontrakci rány v den 7 se 72% uzavření rány whiles významné () kontrakce rány byly pozorovány v den 11 pro kmenovou kůru k. africana, extrakty listů a kořenů s. hispidus. Tkáně rány ošetřené extrakty vykazovaly lepší kolagenaci, reepiteliazici a rychlou tvorbu granulace ve srovnání s neošetřenými tkáněmi rány. Bylo zjištěno, že extrakty obsahují alkaloidy, saponiny, taniny, flavonoidy, sacharidy a sapogenetické glykosidy. Byly vyvinuty otisky prstů HPLC extraktů. List, kmenová kůra a kořenové extrakty k. africana a s. hispidus vykazovaly antimikrobiální, antioxidační a vylepšené vlastnosti při hojení ran, což může ospravedlnit léčebné použití rostlin pro léčbu mikrobiálních infekcí a ran.

1. Úvod

rána se nejčastěji používá, když se odkazuje na zranění kůže nebo podkladových tkání nebo orgánů úderem, řezem, raketou nebo bodnutím. Zranění také zahrnuje poranění kůže způsobené chemikáliemi, chladem, třením, teplem, tlakem a paprsky a projevem vnitřních stavů v kůži, například tlakových vředů a vředů . Rány mají obrovský dopad na ekonomiku hojení zdravotní péče. Chronické rány představují hlavní zdravotní zátěž a odčerpávají zdroje zdravotní péče na světě, včetně Ghany .

hlavním problémem ran je vysoké riziko infekce; pokud se tedy v procesu hojení použije činidlo aktivní proti těmto mikroorganismům způsobujícím infekci, pomůže to snížit riziko infekce a celková doba hojení ran může být výrazně snížena. Například je velmi snadné, aby bakterie pronikly rozbitou kůží a pronikly do zbytku těla. Bakterie kolonizují rány do 48 hodin po poranění a bakterie, jako je Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa a Streptococcus spp, mohou způsobit infekci, což může prodloužit zánětlivou fázi hojení ran . Proto lze vhodná antimikrobiální činidla použít lokálně nebo systematicky k prevenci infekce ran a urychlení procesu hojení ran.

proces zánětu obvykle vede k uvolnění biologicky aktivních mediátorů k přilákání neutrofilů, leukocytů a monocytů do oblasti rány a tyto napadají cizí trosky a mikroorganismy prostřednictvím fagocytózy. To pak vede k produkci kyslíkových volných radikálů, jako je peroxid vodíku, superoxidový anion a hydroxylový anion a přebytek těchto činidel způsobuje poškození tkáně u člověka nebo zvířete, pokud přemohou přírodní antioxidanty hostitele, jako je kataláza, superoxiddismutáza a glutathionperoxidáza. Proto antioxidanty zabraňují aktivitě volných radikálů a tím zabraňují poškození buněk a tkání, poskytují ochranu lidským a zvířecím subjektům a také zlepšují hojení infikovaných a neinfikovaných ran .

Kigelia africana (Lam.) Beneth. patří do rodiny Bignoniaceae. To je známé jako „Nufutene“ v místním Asante-Twi v Ghaně. Je rozšířen po celé Africe včetně Ghany, Sierra Leone, Gambie, Súdán, a Nigérie a Nachází se ve vlhké savaně a poblíž řek, kde se vyskytuje v hojnosti . Používá se k léčbě kožních onemocnění, včetně plísňových infekcí, vředů, psoriázy a ekzému, malomocenství, syfilisu a rakoviny. Bylo zjištěno, že kořeny, dřevo a listy obsahují kigelinon, kyselinu vernolovou, kigelin, iridoidy, luteolin a 6-hydroxyluteolin . Iridoidy mají antibakteriální účinek .

Strophanthus hispidus DC. patří do čeledi Apocynaceae a v místním Asante-Twi se nazývá „Maatwa“. Vyskytuje se po celé Africe a savanách v Ghaně, Senegalu, Súdánu, Kongu, Ugandě a Tanzanii. Má mnoho léčebných použití, jako je antidotum k jedu kobry černé, při léčbě vředů na syfilis, kostnatý syfilis, a vředy a rány morčete . Rostlina obsahuje amorfní glykosid (pseudo-strophanthin) s těžkým olejem, dva alkaloidy (trigonellin a cholin), pryskyřici, sliz a rhamnózový cukr . Cílem studie je prozkoumat antimikrobiální, antioxidační a hojivé vlastnosti methanolových listů a kmenových extraktů kůry k. africana a methanolových listů a kořenových extraktů s.hispidus.

2. Materiály a metody

2.1. Rostlinné materiály a chemikálie

kmenová kůra a listy k. africana a listy a kořeny s.hispidus byly shromážděny v květnu 2011 z Krofromu v okrese Atwima-Kwanwoma v regionu Ashanti a ověřeny Dr. A. Asase z Ghana Herbarium, Katedra botaniky, University of Ghana. Vzorky poukazů rostlin byly uloženy v Ghanském herbáři, University of Ghana, Ghana. Různé části rostlin byly sušeny při pokojové teplotě (28-30°C) po dobu dvou týdnů. Sušené části rostlin byly poté rozemleté na práškové materiály. Pokud není uvedeno jinak, všechny chemikálie byly zakoupeny od společnosti Sigma (Deisenhofen, Německo).

2.2. Příprava extraktů

dvacet gramů práškových listů k. africana bylo přidáno 300 mL 70% methanolu a extrahováno Ultra-Turrax T 50 (Janke & Kunkel, Labortenik, Německo)za chlazení ledem rychlostí 24000 ot / min po dobu 3-5 minut. Výsledná směs byla poté filtrována pomocí Whatmannova filtračního papíru č. 10. Rotační výparník se pak použil k koncentraci supernatantu pod 40°C a lyofilizoval. Postup byl opakován pro všechny zbývající práškové rostlinné materiály (kmenová kůra k. africana, listy a kořeny s.hispidus). Výnosy listového extraktu (kal) a extraktu kmenové kůry (KASB) k.africana a extraktu listů (SHL) a kořenového extraktu (SHR) s. hispidus byly 4,3, 12,8, 13,0 a 11,4% hmotnostních (vztaženo k sušenému materiálu).

2.3. Předběžný fytochemický Screening

fytochemický screening byl proveden na extraktech methanolových listů a kmenových kůry k. africana a listů a kořenů s. hispidus pro zjištění přítomnosti škrobu, tříslovin, glykosidů (sapogenetických, antracenových a kyanogenetických), flavonoidů, steroidů a alkaloidů . Obsah taninů byl stanoven podle metod Glasl a za použití pyrogallolu (Merck, Darmstadt, Německo, čistota 99,5%, HPLC) jako referenční sloučeniny.

2.4. HPLC Finger-tisk extraktů

HPLC finger-tisk extraktů (kal, KASB, SHL a SHR) byl proveden na Thermo Finnigan HPLC systému pomocí Hypersil Gold C18, reverzní fáze kolony (mm). Koncentrace extraktů byla 10 mg / ml. HPLC optimální podmínky: vstřikovací objem: 10 µL, detekční vlnová délka: 254 nm, mobilní fáze: methanol: voda / 50: 50( izokratický stav), teplota: 22°C, tlak čerpadla: 28 MPa, Průtok: 1 mL / min a doba chodu: 10 min.

2.5. Stanovení antimikrobiální aktivity extraktů

2.5.1. Test antimikrobiální citlivosti

antimikrobiální aktivity extraktů (KAL, KASB, SHL a SHR) a referenčních léčiv (chloramfenikol a klotrimazol (Sigma, Deisenhofen, Německo) byly stanoveny podle metody popsané Agyare a jeho kolegy . Živný agar (Oxoid Limited, Spojené království) a média sabouraud agar (Oxoid Limited, Spojené království) byly použity pro stanovení antibakteriálních a antimykotických účinků. Sto mikrolitrů (106 cfu/mL) testovaných organismů (Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Bacillus subtilis NCTC 10073 a klinické plísňové činidlo Candida albicans)bylo použito k osetí živných agarů a sabouraudových agarových destiček. V každé z těchto desek byly vyříznuty čtyři (4) stejně vzdálené jamky o průměru 8 mm pomocí sterilního korkového vrtáku a Jamek naplněných různými koncentracemi extraktů a referenčních léčiv rozpuštěných v dimethylsulfoxidu (DMSO) a ponechány difundovat při pokojové teplotě (28-30°C) po dobu 1 hodiny. Zóny inhibice růstu byly měřeny po 24 hodinách inkubace při 37°C (pro bakterie) a 3 dny při 30°C (pro houbu). Byla stanovena aktivita DMSO a bylo zjištěno, že nevykazuje žádnou aktivitu proti testovaným organismům.

2.5.2. Mikrodiluční metoda

Mic extraktů (KAL, KASB, SHL a SHR) proti testovaným bakteriím byly stanoveny pomocí modifikované mikrodiluční techniky popsané Agyare et al. a Eloffa . Zkušební roztoky (100 mg/mL) extraktů byly připraveny DMSO a zkušební roztok (25-100 µL) byl sériově zředěn na 100 µg/mL a 100 µL (106 cfu/mL) testovaných bakterií pěstovaných v živném vývaru (Oxoid Limited, Spojené království) přidán do každé jamky v mikrodestičkách. Kryté mikrodestičky byly inkubovány při 37°C po dobu 24 hodin. pro indikaci růstu se do jamek mikrodestiček přidalo 30 µL 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazoliumbromidu rozpuštěného ve vodě a inkubovalo se při 37°C po dobu 30 minut. Testovací houbová látka (C. albicans) byl kultivován v sabouraud dextrózovém vývaru (Oxoid Limited, Spojené království) a poté inkubován po dobu 3 dnů při teplotě 30°C. Mic extraktů kal, KASB, SHL a SHR proti testované houbě byly stanoveny podle pokynů popsaných v Národním výboru pro klinické laboratorní standardy pro vláknité houby. Minimální inhibiční koncentrace extraktů proti testovaným organismům byly zjištěny jako minimální koncentrace extraktů, které nevykazovaly mikrobiální růst po přidání MTT do média a inkubaci při 37°C po dobu 20 minut . Výše uvedené experimenty byly opakovány třikrát.

2.6. Stanovení aktivity zachytávání volných radikálů

aktivity zachytávání volných radikálů extraktů byly stanoveny podle metody Chizzola a jeho kolegů za použití 1, 1-difenyl-2-pikryl-hydrazyl (DPPH). Byl připraven roztok (0,1 mM) DPPH v methanolu a 10 µL tohoto roztoku bylo přidáno ke 100 µL methanolových extraktů spolu s α-tokoferolem v různých koncentracích v 96jamkových mikrotitrových deskách. Desky byly protřepávány po dobu 30 sekund a po 30 minutách byla absorbance měřena při 517 nm. Procento inhibice ( % ) zachycování radikálů bylo vypočteno pomocí následující rovnice. Inhibice, kde je absorbance kontroly, je absorbance vzorku při 517 nm a inhibiční koncentrace, IC50 je množství (µg / mL), které snižuje absorbanci o 50%.

2.7. Hodnocení vlastností hojení ran (Model excize rány)

2.7.1. Pokusná zvířata

třicet pět (samice Sprague Dawley) potkanů bylo umístěno v klecích z nerezové oceli a krmeno normální komerční dietou potkanů (GAFCO, Tema, Ghana), podána voda ad libitum a udržována v laboratorních podmínkách (teplota 28-30°C, Relativní vlhkost 60-70% a normální cyklus světlo-tma). Den před experimentem byly krysy přivedeny do laboratoře a zvyklé na manipulaci s experimentátorem a přístrojem, aby se minimalizoval účinek stresu a novosti. Všechny postupy a techniky použité v těchto studiích byly v souladu s pokyny Národního institutu zdraví pro péči a používání laboratorních zvířat (NIH, publikace Ministerstva zdravotnických služeb č. 83-23, revidovaná 1985). Protokoly ke studii byly schváleny etickou komisí oddělení.

2.7.2. Model excizní rány

zvířata (samice potkanů Sprague Dawley) o hmotnosti 115-120 g byla anestetizována ketaminem v dávce 120 mg/kg tělesné hmotnosti subkutánně před vytvořením ran. Hřbetní srst zvířat byla oholena na kruhový průměr asi 40 mm pomocí žiletek a předpokládaná oblast rány, která má být vytvořena, byla načrtnuta na oholené kůži. Oblasti byly vyčištěny 70% ethanolem před vytvořením excizních ran podle modifikované metody Bhakta et al. . Kožní rány byly vytvořeny podél značek pomocí ozubených kleští, chirurgických nožů a špičatých nůžek. Celé rány byly ponechány otevřené a zvířata byla rozdělena do sedmi (7) skupin po pěti zvířatech. První skupina byla lokálně léčena 1% hmotnostních sulfadiazinu stříbrného (Arytons Drugs, Ghana) jako referenční léčivo . Druhá skupina byla ošetřena vodným krémem (vehikulem samotným). Třetí skupina byla ponechána neléčená a umožněna normální hojení ran. Poslední čtyři skupiny byly ošetřeny 7,5% hmotnostních extraktových krémů (KAL, KASB, SHL a SHR). Léčba rány byla zahájena 2. den po vytvoření rány. Extrakty a referenční léky byly lokálně aplikovány na rány 24 hodin po dobu 24 dnů. V průběhu léčby byly pořízeny zmenšené fotografie oblastí rány (pomocí digitálního fotoaparátu s vysokým rozlišením) spolu s měřením milimetrové stupnice každých 48 hodin počínaje prvním dnem ošetření rány. Oblasti rány byly stanoveny každé dva dny až do 24. dne.

2.8. Histopatologické studie

vzorky tkáně rány od neošetřených a léčených zvířat byly odebrány během procesu hojení 14. den. Na konci experimentu byla shromážděna jizva rány v plné tloušťce průřezu asi 6 mm z každé skupiny, aby se vyhodnotily histopatologické změny . Vzorky byly fixovány v 10% pufrovaném formalinu po dobu 24 hodin a dehydratovány sekvencí roztoků ethanol-xylen, zpracovány a blokovány parafinem při 40-60°C a poté rozděleny do sekcí o tloušťce 5-6 µm. Sekce byly obarveny hematoxylinovou a eosinovou skvrnou, van Giesonovou skvrnou a toluidinovou modrou skvrnou. Sekce obarvené hematoxylinem a eosinem a Van Giesonovy obarvené sekce byly zkontrolovány na depozici kolagenu. Toluidinová modře obarvená část byla použita k barvení žírných buněk .

2.9. Statistická analýza

GraphPad Prism verze 5.0 pro Windows (GraphPad Software, San Diego, CA, USA) byla použita pro všechny statistické analýzy. Data jsou prezentována jako mean SEM () a analyzována jednosměrnou anovou následovanou testem Dunnetova vícenásobného srovnání. * , * * a * * * byly ve všech analýzách považovány za statisticky významné. Grafy byly vyneseny pomocí Sigma Plot pro Windows verze 11.0 (Systat Software Inc., Německo).

3. Výsledky

3.1. Předběžný fytochemický Screening

bylo zjištěno, že listová i kmenová kůra k.africana a s. hispidus obsahuje taniny (s různým množstvím), steroidy, saponiny, sapogenetické glykosidy a uhlohydráty, zatímco listy obou rostlin obsahují flavonoidy. Alkaloidy byly přítomny v listech i kořenech s.hispidus (Tabulka 1).

3.2. HPLC Finger-Printing of Extracts

HPLC finger-printing of the extracts (KAL, KASB, SHL, and SHR) was determined to identify the major peaks (compounds) in the various extracts for the purposes of identification and quality control (obr. 1, 2, 3, and 4).

Obrázek 1

HPLC chromatogram (otisky prstů) extraktu z listů methanolu (KAL) k. africana při 254 nm.

Figure 2

HPLC chromatogram (finger-printing) of methanol stem bark extract (KASB) of K. africana at 254 nm.

Figure 3

HPLC chromatogram (finger-printing) of methanol leaf extract (SHL) of S. hispidus at 254 nm.

obrázek 4

HPLC chromatogram (otisky prstů) extraktu methanolu kořene (SHR) s.hispidus při 254 nm.

3.3. Antimikrobiální aktivita

bylo zjištěno, že methanolové extrakty (kal, KASB, SHL a SHR) jsou účinné proti testovaným organismům (E.coli, P. aeruginosa, s. aureus, B. subtilis a C. albicans) s různými středními zónami inhibice a bylo zjištěno, že P. aeruginosa je méně citlivá na extrakty. Minimální inhibiční koncentrace se pohybuje v rozmezí k. africana extrakty (kal a KASB) proti testovaným organismům byly od 2,25 do 7,5 mg / mL a extrakty s. hispidus (SHL a SHR) byly 2,5 až 10 mg / mL (Tabulka 2). Pokud jde o metodu difúze agaru, všechny extrakty (KAL, KASB, SHL a SHR) s koncentracemi 20 a 50 mg/mL vykazují vyšší zóny inhibice proti testovaným organismům než koncentrace 10 mg / mL (Tabulka 3).

3.4. Antioxidační aktivita

všechny extrakty vykazovaly určitou úroveň antioxidačních vlastností, přičemž KASB měl nejnižší IC50 a KAL s NEJNIŽŠÍ volnou Úklidovou aktivitou (Tabulka 4 a obrázek 5).

obrázek 5

činnosti při odstraňování volných radikálů z extraktu listů methanolu (KAL) a extraktu z kmenové kůry (KASB) z k. africana a extrakt z listů (SHL), extrakt z kořenů (SHR) z S. hispidus a -tokoferol (referenční antioxidant) stanoveno metodou DPPH.

3.5. Aktivita hojení ran (Rychlost uzavření rány)

všechny skupiny léčené extrakty (KAL, KASB, SHL a SHR) vykazovaly významné aktivity na míře uzavření rány ve srovnání s neošetřeným a samotným vozidlem s KAL a SHL, které mají významné vlivy (resp. 6 a 8, tabulka 5) a KASB a SHR vykazující významné podobné účinky na hojení ran od 10. do 18. dne po ošetření (obrázky 7 a 9, Tabulka 5).

3.6. Histopatologické studie

histologické studie odhalily bohatou proliferaci fibroblastů s různým stupněm fibrózy. Vzorky vykazovaly 70 až 80% hustou a zahuštěnou fibrózu pro rány ošetřené extrakty, zatímco 1% hmotnostní sulfadiazinová mast stříbrná (pozitivní kontrola) vykazovala 60 až 70% fibrózu. Fibroblastové buňky a kolagenová vlákna byly prominentně přítomny v referenčních a extraktech ošetřených skupinách ve srovnání s neošetřenou kontrolou. Došlo k bohaté angiogenezi, zvýšené kolagenaci a reepitelizaci, což je důkaz výrazných léčebných odpovědí uprostřed přetrvávajícího zánětu s tkáněmi rány ošetřenými extrakty ve srovnání s neošetřenými tkáněmi rány (obrázek 10).

(v)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)

obrázek 10

histopatologické vyšetření tkání rány ošetřených vehikulem, extrakty a neošetřenými tkáněmi. Reprezentativní obrazy obarvené hematoxylinovou a eosinovou skvrnou, van Giesonovou skvrnou a toluidinovou modrou skvrnou ošetřené denně 7,5% hmotnostních krémy extraktu z listů methanolu (KAL) z k. africana (a), extrakt z kmenové kůry methanolu (KASB) z k.africana (b), krém z methanolových listů (SHL) z S. hispidus (c) a extrakt z kořenů methanolu (SHR) krém s. hispidus (d) a neošetřené tkáně rány (e) po dobu 14 dnů. (a) KAL: bohatá angiogeneze, zvýšená kolagenace a reepitelizace, patrné z výrazných léčebných odpovědí uprostřed přetrvávajícího zánětu. b) KASB: znatelná angiogeneze a tvorba granulační tkáně s důkazem apoptózy po tkáňové nekróze s méně intenzivní kolagenací a reepitelizací. c) SHL: se znatelnou intenzivní kolagenací a reepitelizací. (d) SHR: se znatelnou tvorbou granulační tkáně projevující se jako doplňování tkáně. Kolagenace a reepitelizace byly také vážně ve srovnání s neošetřenou tkání rány. e) neošetřené tkáně rány s přetrvávajícím zánětem s neúplnou oblastí rány; důkaz špatné tvorby granulační tkáně, kolagenace a reepitelizace, ale bohatá angiogeneze. (f) ošetřené tkáně rány 1% hmotnostních sulfadiazinu stříbrného vykazovaly rychlou tvorbu granulační tkáně, kolagenaci, evidentní zvýšené hojení ran a nerovnoměrnou keratinózní povrch rány evidentní reepitelizaci. Legenda: AG: angiogeneze, CO: kolagenace, DS: mrtvý prostor po nekróze, GR: granulační tkáň po apoptóze, IC: neúplná oblast rány, IF: zanícená tkáň, KE: keratinózní epitel, ND: nekrotické zbytky přetrvávajícího zánětu. RE: reepitelizace.

4. Diskuse

toto šetření popisuje některé biologické aktivity včetně antimikrobiálních a hojivých vlastností listů, kmenové kůry a kořenů extraktů z tropických rostlin k.africana a s. hispidus. Rostlinné produkty jsou potenciálními činidly pro hojení ran a jsou do značné míry preferovány kvůli jejich rozšířené dostupnosti, menším nebo žádným vedlejším účinkům a účinnosti jako surové přípravky . Fytochemický screening sušených listů a kořenů s. hispidus odhalil přítomnost tříslovin, alkaloidů, saponinů, steroidů, sacharidů a sapogenetických glykosidů a flavonoidů v listech. Alkaloidy chyběly v sušených listech a kmenové kůře k. africana a saponiny, steroidy, sacharidy, a sapogenetické glykosidy byly přítomny v obou rostlinných materiálech. Flavonoidy byly také nalezeny v listech k. africana (Tabulka 1). HPLC finger-tisk extraktů (kal, KASB, SHL a SHR) byl také vyvinut pro účely identifikace a kontroly kvality (Obrázky 1, 2, 3 a 4).

fytochemické složky rostliny často určují fyziologický účinek na lidské tělo. Antioxidanty jsou látky, které chrání buňky před poškozením způsobeným molekulami známými jako volné radikály. Antioxidační aktivity extraktů jsou způsobeny hlavně přítomností fenolických sloučenin, jako jsou flavonoidy, fenolové kyseliny, taniny a fenolové diterpeny . Proto složky extraktů, jako jsou taniny a flavonoidy, hrají hlavní roli při hojení ran tím, že zabraňují a chrání oxidační poškození před volnými radikály .

antimikrobiální aktivita methanolových extraktů listů a kmenové kůry k.africana a listů a kořenů s. hispidus byla stanovena proti čtyřem bakteriím, dvěma grampozitivním bakteriím (s. aureus a B. subtilis), dvěma gramnegativním bakteriím (E. coli a P. aeruginosa) a jedné houbě (C. albicans), za použití metody difúze agaru pohárkové desky. Methanolové extrakty obou rostlin byly účinné proti všem testovaným organismům (Tabulka 2). Minimální inhibiční koncentrace (MIC) byla stanovena jako nejnižší koncentrace surového extraktu, při které nebyl mikrobiální růst a Mic KAL proti S.aureus, B. subtilis, E. coli, P. aeruginosa a C. albicans byly 5, 2,5, 5,5, 7,5 A 2,5 mg/mL a KASB 5, 5, 5, 25, 7, 5 a 2, 25 mg/ml. Extrakty SHL a SHR také vykazovaly podobnou antimikrobiální aktivitu a jejich Mic byly ve stejném rozmezí jako extrakty k. africana (tabulky 2 a 3). Antibakteriální a protiplísňové aktivity extraktů (kal, KASB, SHL a SHR) byly podobné aktivitě vystavené extrakty listů Kigelia pinnata (Jacq.) ŘADIČ. jak uvádí Binutu et al. . Antimikrobiální účinek extraktů může být přičítán adstringentní povaze fenolických složek včetně taninů a dalších polyfenolů přítomných v extraktech .

obydlí patogenních bakterií, jako jsou stafylokoky, streptokoky a Pseudomonas, v ranách obvykle může vést k infekci ran, což může vést k tvorbě chronických ran . Z této studie bylo zjištěno, že extrakty k. africana a s. hispidus vykazovaly silnou a širokospektrální antimikrobiální aktivitu proti těmto patogenům. Vzhledem k tomu, že většina Mic extraktů proti testovaným organismům byla nižší než 8 mg / mL, lze odvodit, že extrakty vykazovaly silnou antimikrobiální aktivitu podle Fabryho a jeho kolegů . Lokální aplikace antimikrobiálních látek nebo extraktů je účinnou terapeutickou metodou ničení mikrobiálních populací z důvodu dostupnosti účinných látek v místě rány, což vede ke zvýšené aktivitě hojení ran .

hodnoty IC50 extraktů (kal, KASB, SHL a SHR) byly 1,5, 56,9, 13,7, 49,8 a 45,1 µg/mL (Tabulka 4). Tyto výsledky naznačují, že tyto extrakty mají antioxidační vlastnosti s výjimkou extraktů s. hispidus, což by mohlo usnadnit hojení ran . To může znamenat, že tradiční použití s. hispidus jako prostředek pro hojení ran nemusí být nutně způsoben jeho antioxidační aktivitou, ale spíše založen na jiných biologických účincích. Hodnoty IC50 listů a kmenové kůry k. africana byly podobné nálezům Gathirwy a jeho kolegů .

extrakty (kal, KASB, SHL a SHR) měly významný vliv na rychlost uzavření rány na základě různých dnů ošetření ran extrakty ve srovnání s neošetřenými. Extrakt SHL vykazoval významný zvýšený účinek na proces hojení ran v den 11 () s procentním uzavřením rány 90.13 (Obrázek 8) ve srovnání s neošetřenými ranami. Vliv SHL na rány byl podobný jako u extraktu SHR s významnou zvýšenou rychlostí kontrakce rány v den 11 () a uzavření rány 91,72% (obrázek 9). Vliv extraktu KASB (Obrázek 7) byl podobný extraktům SHL a SHR. Extrakt KAL však významně zlepšil kontrakci rány od 7. dne () s uzavřením rány 85,1% (obrázek 6) do 17. dne. Histopatologické vyšetření tkání rány odhalilo bohatou angiogenezi, zvýšenou kolagenaci a reepitelizaci ve srovnání s neošetřenými ranami (obrázek 10). Tyto biologické aktivity extraktů mohou být způsobeny zvýšenou proliferací fibroblastů a keratinocytů a úspěšnou redukcí patogenních bakterií extrakty a tyto mohou být přičítány fytochemickým složkám extraktů.

účinky pozorované pouze u ošetřených krémů a neošetřených ran nebyly statisticky významné ve srovnání s extrakty nebo sulfadiazinem stříbrným (referenční) ošetřené rány. To může také znamenat, že složky vodného krému neinterferovaly s aktivitou extraktů, a proto zvýšené účinky extraktů mohou být způsobeny pouze bioaktivními principy přítomnými v těchto extraktech. Účinky extraktů na hojení ran mohou být způsobeny různými fytochemickými složkami přítomnými v nich. Je známo, že taniny, jako jsou proanthokyanidiny a další taniny včetně kyseliny tříslové, geraniinu a furosinu, usnadňují hojení ran . Bylo zjištěno, že extrakty obsahují flavonoidy a saponiny a bylo zjištěno, že tyto sekundární metabolity zvyšují hojení ran, a proto mohou být zvýšené účinky extraktů na hojení ran přičítány jejich fytochemickým složkám.

výše uvedená zjištění mohou podporovat tvrzení, že rány ošetřené rostlinnými extrakty se hojí rychleji a lépe než neošetřené rány a použití těchto rostlin k léčbě mikrobiálních infekcí. Je však třeba provést izolaci a charakterizaci bioaktivních sloučenin odpovědných za tyto farmakologické vlastnosti.

5. Závěr

methanolový list a kmenová kůra k. africana a methanolový list a kořenové extrakty s. hispidus vykazovaly proti testovaným organismům antioxidační, antimikrobiální účinky s rozsahem MIC 2,25 až 7,5 mg/mL a 2,5 až 10 mg/mL, zvýšené hojivé vlastnosti ran a tyto farmakologické vlastnosti mohou ospravedlnit léčebné použití těchto rostlin k léčbě mikrobiálních infekcí a ran. Byla by provedena frakcionace vedená bioaktivitou a izolace bioaktivních sloučenin odpovědných za biologické aktivity.

střet zájmů

autoři prohlašují, že žádný střet zájmů nemají.

poděkování

autoři chtějí vyjádřit svou vděčnost panu Thomasovi Ansahovi z farmakologického oddělení KNUST, Kumasi, Ghana za jeho technickou pomoc a Nana Yaw Atefah za sběr rostlin. Uznali také Dr .. Paul Ossei z oddělení patologie, Fakultní nemocnice Konfo Anokye, Kumasi, Ghana za jeho příspěvek k patologickému hodnocení tkání rány.