alosterické efektory, které interagují s hemoglobinem, se vážou na molekuly hemoglobinu, čímž regulují příjem a uvolňování kyslíku. Terapeutické léky, které nedovolují tuto reakci, mají významný potenciál zneužívání, protože zvýšené okysličení tkání zlepšuje sportovní výkon. Nový alosterický efektor myo-inositol trispyrofosfát (ITPP) je v současné době ve fázi 1 klinické studie pro chronické srdeční selhání a aplikace rakoviny (pod označením OXY111A). Tato sloučenina již byla použita pro zvýšení výkonu v dostihovém průmyslu a je snadno dostupná online ve formě perorálních doplňků výživy a dokonce i injekčních roztoků. ITPP je zařazen na seznam zakázaných látek Světové antidopingové agentury pro lidské sportovce; dosud však neexistuje žádná metoda k detekci této látky v lidské moči.
z tohoto důvodu Görgens et al. (2014) se rozhodl vyvinout jednoduchý, robustní screeningový a potvrzovací protokol pro ITPP v lidské moči.1 protože sloučenina je vysoce polární povahy, a proto není vhodná pro kapalinovou chromatografii s obrácenou fází, tým se obrátil na hydrofilní interakční kapalinovou chromatografii (HILIC) a tandemovou hmotnostní spektrometrii (MS/MS) pro analýzu lidské moči špičaté ITPP a interním standardem ITPP-d6. Vědci použili kvartérní pumpu Accela 1250, pal autosampler a Q Exactive hybrid quadrupole-Orbitrap hmotnostní spektrometr (all Thermo Scientific) k detekci prekurzorových iontů jak pro ITPP ,tak pro vnitřní standard (m / z 301.9065 a 304.9253, respektive), stejně jako ionty diagnostického produktu (m/z 78.9580, 158.9243 a 524.8550). Vyvinuli také potvrzovací protokol pro podezřelé vzorky moči pomocí metody extrakce slabé aniontové výměny v pevné fázi (WAX-SPE).
tým určil, že jejich metoda je specifická jak pro screening, tak pro potvrzení, s dobrou přesností v rozmezí koncentrací 50-500 ng/mL a 5-125 ng/mL pro screening a potvrzení. Odhadli spodní hranice detekce na 15 ng / mL a 1 ng/mL pro screening a potvrzení. Rovněž nehlásí žádné významné snížení koncentrace ITPP v matrici moči po třech měsících skladování, což je v souladu s povinnou dobou skladování dopingové kontroly.
Görgens et al. prezentujte svou metodu jako citlivý a spolehlivý protokol pro screening a potvrzení přítomnosti ITPP v lidské moči. Poznamenávají, že HILOVÁ separace činí jejich screeningovou metodu rychlou a časově účinnou, prakticky bez přípravy vzorku. Další možnost potvrzení pomocí extrakce v pevné fázi zvyšuje citlivost a všestrannost celkového protokolu. Tým dále předpokládá, že díky flexibilní povaze jejich přístupu může být vhodný pro jiné screeningové aplikace, zejména pro aplikace s vysoce polárními analyty.
referenční
1. Görgens, C., et al. (2014, červenec) „Screening a potvrzení myo-inositol trispyrofosfátu (ITPP)v lidské moči hydrofilní interakcí kapalinová chromatografie s vysokým rozlišením / vysokou přesností hmotnostní spektrometrie pro účely dopingové kontroly“, testování a analýza drog, doi: 10.1002 / dta. 1700.
Autor Příspěvku: Melissa J. Mayer. Melissa je spisovatelka na volné noze, která se specializuje na vědeckou žurnalistiku. Má vášeň a zkušenosti v oblastech proteomiky, buněčné / molekulární biologie, mikrobiologie, biochemie a imunologie. Melissa je také dvojjazyčná (španělsky) a je držitelem osvědčení o výuce s podporou biologie.
