fluorescenční technologie jsou preferovanou metodou pro detekci, analytické snímání, lékařskou diagnostiku, biotechnologii, zobrazování a expresi genů po mnoho let. Fluorescence se stává nezbytnou pro studium molekulárních procesů s vysokou specificitou a citlivostí prostřednictvím různých biologických procesů. Významným problémem pro praktické fluorescenční aplikace je zjevná nelinearita intenzity fluorescence vyplývající z účinků vnitřního filtru, rozptyl vzorku, a absorpce vnitřních složek biologických vzorků. Absorpce vzorku může vést k primárnímu efektu vnitřního filtru (efekt vnitřního filtru typu I) a je prvním faktorem, který je třeba vzít v úvahu. Jedná se o relativně jednoduchý faktor, který má být kontrolován v jakémkoli fluorescenčním experimentu. Mnoho předchozích přístupů však poskytlo pouze přibližné experimentální metody pro korekci odchylky od očekávaných výsledků. V této části diskutujeme původ primárního vnitřního filtračního efektu a představujeme univerzální přístup pro korekci signálu intenzity fluorescence v plném absorpčním rozsahu. Důležité je, že předkládáme přímé experimentální výsledky toho, jak korekce funguje. Jeden zvažuje problémy vyplývající z různé absorpce napříč jeho absorpčním spektrem pro všechny fluorofory. Používáme Rhodamin 800 a demonstrujeme, jak správně korigovat excitační spektra v širokém rozsahu vlnových délek. Druhým je účinek inertního absorbéru, který zeslabuje intenzitu budicího paprsku při jeho pohybu kyvetou, což vede k významné odchylce pozorovaných výsledků. Jako příklad uvádíme fluorescenční kalení analogu tryptofanu, NATA, akrylamidem a ukážeme, jak správně korigované výsledky se porovnávají s počátečními chybnými výsledky. Postup je obecný a vztahuje se na mnoho dalších aplikací, jako je stanovení kvantového výtěžku, absorpce tkáně/krve nebo absorpce akceptoru v experimentech pražců.
