Abstrakt
ivermektin má silnou systémovou aktivitu proti mnoha druhům hlístic a členovců, ale v těchto dvou skupinách jsou některé důležité druhy, jako je například blecha kočičí, Ctenocephalides felis (Siphonaptera: Pulicidae). bouché), které se zdají být refrakterní. Ve snaze zjistit, zda nedostatek systémové aktivity proti C. felis je specifický pro ivermektin, nebo pokud se jedná o fenomén v celé třídě, bylo testováno 20 derivátů avermektinu v umělém membránovém systému krmení blechami v koncentracích 20, 10 a 1 µg / ml. Výsledky ukázaly, že ivermektin měl hodnoty LC90 a LC50 proti blechám 19, 1 a 9, 9 µg / ml. Pouze čtyři z dalších 19 hodnocených sloučenin měly hodnoty LC90 i LC50 silnější než ivermektin a i tehdy byla výhoda skromná. Mezi těmito čtyřmi sloučeninami bylo dvojnásobné zvýšení účinnosti ve srovnání s ivermektinem, když byly zváženy hodnoty LC90 (rozmezí 9,2–10.3 µg / ml) a dvojnásobné až osminásobné zvýšení při vyšetření hodnot LC50 (rozmezí 1,23–5,26 µg/ml). Ani držení ani počet oleandrosylových cukrů na makrocyklické páteři nebyly relevantní pro další aktivitu blech, protože mezi těmito čtyřmi sloučeninami byly dva disacharidy, monosacharid a aglykon. Také dispozice vazeb mezi C-22 a 23 nepřispěla ke zvýšení aktivity, protože tyto molekuly obsahují členy s jednoduchými nebo dvojnými vazbami. Jeden z těchto analogů avermektinu byl zvětšen a testován subkutánně u psa při >100násobku komerční dávky ivermektinu a byla pozorována nulová účinnost proti blechám. Došli jsme k závěru, že ani nejlepší avermektin in vitro nemá potenciál in vivo stát se komerčním perorálním nebo subkutánním ošetřením blech pro společenská zvířata.
třída avermektinů endektocidů má silnou systémovou aktivitu proti mnoha druhům hlístic a členovců (Egerton et al . 1979, 1980). Zvláště nápadné jsou například téměř absolutní účinnost proti helmintům, jako je nezralá Dirofilaria immitis, u psů při 6, 0 µg / kg (Campbell 1989) a proti hmyzu, jako jsou larvy běžného skotu grub, Hypoderma lineatum (Villers), u skotu při 0, 2 µg/kg (Drummond 1984). Nicméně i přes tuto obrovskou sílu existují v těchto skupinách další organismy, které se zdají být refrakterní vůči ivermektinu. Kočičí blecha, Ctenocephalides felis (Bouché), je klinicky relevantním příkladem. Ivermektin byl podáván perorálně jednou týdně v dávce 0,5 mg / kg nebo denně v dávce 0.05 mg / kg a bylo pozorováno, že je neaktivní proti tomuto parazitovi na psech (Blair et al . 1984). Banks et al. (2000) a Shoop et al. (2001) nezávisle tyto výsledky potvrdily tím, že ukázaly, že ivermektin má slabou systémovou aktivitu proti blechám koček v testech krmení blechami z umělé membrány.
ve snaze zjistit, zda je nedostatek systémové aktivity proti blechám specifický pro ivermektin, nebo zda se jedná o fenomén celé třídy, bylo testováno 20 avermektinů v systému krmení blech umělou membránou. Strategicky vybraná série testovaných avermektinů obsahovala zástupce většiny chemicky přístupných míst, která byla v okolí makrocyklu využívána. Skupina zahrnuje všechny přirozeně se vyskytující avermektiny, stejně jako polosyntetické členy biologicky důležité aglykonové, monosacharidové a disacharidové řady. Zahrnuty byly také komercializované sloučeniny abamektin, ivermektin, milbemycin D a selamektin. V tomto článku prezentujeme relativní účinnost těchto členů rodiny avermektinů proti blechám prostřednictvím testování v systému umělé membrány a ukazujeme výsledky účinnosti in vivo od psa podávaného subkutánně jedním z nejúčinnějších testovaných avermektinů.
materiály a metody
Greyhound.
umělý membránový systém krmení blech, který jsme použili, je modifikací „umělého psa“ vyrobeného Jayem R. Georgi (FleaData, Freeville, NY). Tento umělý membránový systém byl navržen tak, aby zadní blechy, ale to bylo také navrhl, že by to mohlo testovat účinky systémových insekticidů (Wade a Georgi 1988 a Pullen a Meola 1996) a to bylo používáno objevit nový indol terpen, nodulisporic kyselina A (Shoop et al. 2001). Ve spolupráci s Jayem R. Georgi jsme upravili umělého psa. Tento nový systém (obr. 1) dostal označení „Greyhound“, protože byl navržen tak, aby byl efektivnější, jednodušší nastavení a umožnil současně testovat větší množství sloučenin. Na rozdíl od umělého psa, který obsahuje pouze 25, 5 cm klece zavěšené jednotlivě pod vyhřívaným krytem z plexiskla, nový systém obsahuje odnímatelný rozdělovač 59 x 38 cm, který drží klece 104, 2,5 cm. Také jsme nahradili hliníkové nedisponovatelné podávací rukávy plastovými CVC rukávy (Costar, Cambridge, MA). Plastové rukávy byly po každém použití zlikvidovány, aby se minimalizovala pravděpodobnost kontaminace léky.
systém podávání umělé membrány používaný k testování systémové účinnosti blech.
systém podávání umělé membrány používaný k testování systémové účinnosti blech.
Chov Blech.
naše bleší kolonie byla udržována na kočkách chovaných podle našeho institucionálního Výboru pro péči o zvířata a použití. Vejce odebraná od koček byla inkubována při 28°C a 85% RH v médiu sestávajícím z osmi dílů písku a jedné části lyofilizované hovězí krve (California Spray Dry Company, Stockton, CA). Blechy použité v této studii se objevily z jejich pupárie během 48 hodin.
složený přípravek.
avermektiny byly testovány v koncentracích 20, 10 a 1 µg / ml. Dvě replikace každé sloučeniny na každé úrovni byly testovány v porovnání vedle sebe pomocí dvou našich krmných systémů. Použitým vehikulem byl polyethylenglykol 400 a dimethylsulfoxid (2: 1). Bylo použito deset mikrolitrů vehikula na mililitr heparinizované hovězí krve. Všechny sloučeniny byly fermentovány nebo synteticky modifikovány chemiky Merck s výjimkou selamektinu.
předběžné čištění selamektinu probíhalo následovně. Šest ampulí revoluce (každá 240 mg) bylo zředěno v minimálních objemech CH2Cl2 a naloženo na podložku silikagelu (4 palce vysoká). Gradientní eluce,
.
,
.
.
.
:
–
.
.
.
.
:
–
.
.
.
.
:
–
.
.
.
.
:
–
.
.
.
.
:
–
.
.
.
.
. (v tisku).
.
.
.
:
–
.
.
.
.
:
–
.
.
.
.
(v tisku).
.
.
.
:
–
.
