allosteriske effektorer, der interagerer med hæmoglobin, binder til hæmoglobinmolekylerne og derved regulerer iltoptagelse og frigivelse. Terapeutiske lægemidler, der ulovlige dette svar, har et betydeligt misbrugspotentiale, da øget iltning af vævene forbedrer atletisk præstation. Den nye allosteriske effektor myo – inositol trispyrophosphat (ITPP) er i øjeblikket i fase 1 kliniske forsøg med kronisk hjertesvigt og kræftapplikationer (under betegnelsen IL111A). Denne forbindelse er allerede blevet brugt til præstationsforbedring i hestevæddeløbsindustrien og er let tilgængelig online i form af orale kosttilskud og endda injicerbare opløsninger. ITPP er inkluderet på verdens Antidopingagenturs forbudte liste over stoffer til menneskelige atleter; der findes dog endnu ingen metode til at påvise dette stof i human urin.
af denne grund, g Kurrgens et al. (2014) satte sig for at udvikle en enkel, robust screenings-og bekræftelsesprotokol for ITPP i human urin.1 fordi forbindelsen er meget polær og derfor uegnet til omvendt fase væskekromatografi, vendte teamet sig til hydrofil interaktionsvæskekromatografi (HILIC) og tandem massespektrometri (MS/MS) til analyse af human urin spiked med ITPP og intern standard ITPP-D6. Forskerne brugte en Accela 1250 kvaternær pumpe, PAL autosampler og K krævende hybrid kvadrupol-Orbitrap massespektrometer (all Thermo Scientific) til at detektere forløberionerne for både ITPP og den interne standard (m/å 301.9065 og 304.9253), såvel som de diagnostiske produktioner (78.9580, 158.9243 og 524.8550). De udviklede også en bekræftelsesprotokol for mistænkelige urinprøver ved hjælp af en svag anionbyttefaseekstraktionsmetode (voks-SPE).
holdet fastslog, at deres metode er specifik for både screening og bekræftelse med god præcision over et koncentrationsområde på henholdsvis 50-500 ng/mL og 5-125 ng/mL til screening og bekræftelse. De vurderede de nedre detektionsgrænser til henholdsvis 15 ng/mL og 1 ng/mL til screening og bekræftelse. De rapporterer heller ikke noget signifikant fald i ITPP-koncentrationen i urinmatricen efter tre måneders opbevaring i overensstemmelse med den obligatoriske opbevaringsperiode for dopingkontrol.
g Ortrgens et al. præsentere deres metode som en følsom, pålidelig protokol til screening og bekræftelse af tilstedeværelsen af ITPP i human urin. De bemærker, at HILIC-adskillelse gør deres screeningsmetode hurtig og tidseffektiv, med næsten ingen prøveforberedelse. Den ekstra mulighed for bekræftelse via fastfaseekstraktion øger følsomheden og alsidigheden af den samlede protokol. Holdet hævder endvidere, at den fleksible karakter af deres tilgang kan gøre den velegnet til andre screeningsapplikationer, især dem med meget polære analytter.
Reference
1. G kurrgens, C., Et Al. (2014, Juli)” Screening og bekræftelse af myo-inositol trispyrophosphat (ITPP) i human urin ved hydrofil interaktion væskekromatografi høj opløsning / høj nøjagtighed massespektrometri til dopingkontrolformål, ” Drug Testing and Analysis, doi: 10.1002/DTA.1700.
Indlæg Forfatter: Melissa J. Mayer. Melissa er en freelance skribent, der specialiserer sig i videnskabsjournalistik. Hun har passion for og erfaring inden for proteomics, cellulær/molekylærbiologi, mikrobiologi, biokemi og immunologi. Melissa er også tosproget (spansk) og har et undervisningsbevis med en biologipåtegning.
