Fluorescensteknologier har været den foretrukne metode til påvisning, analytisk sensing, medicinsk diagnostik, bioteknologi, billeddannelse og genekspression i mange år. Fluorescens bliver afgørende for at studere molekylære processer med høj specificitet og følsomhed gennem en række biologiske processer. Et væsentligt problem for praktiske fluorescensapplikationer er den tilsyneladende ikke-linearitet af fluorescensintensiteten som følge af indre filtereffekter, prøvespredning og absorption af iboende komponenter i biologiske prøver. Prøveabsorption kan føre til den primære indre filtereffekt (type i indre filtereffekt) og er den første faktor, der skal overvejes. Dette er en relativt simpel faktor, der skal kontrolleres i ethvert fluorescenseksperiment. Imidlertid har mange tidligere tilgange kun givet omtrentlige eksperimentelle metoder til at korrigere afvigelsen fra forventede resultater. I denne del diskuterer vi oprindelsen af den primære indre filtereffekt og præsenterer en universel tilgang til korrigering af fluorescensintensitetssignalet i det fulde absorptionsområde. Det er vigtigt, at vi præsenterer direkte eksperimentelle resultater af, hvordan korrektionen fungerer. Man overvejer problemer, der opstår ved varierende absorption på tværs af dets absorptionsspektrum for alle fluoroforer. Vi bruger Rhodamine 800 og demonstrerer, hvordan man korrekt korrigerer eksitationsspektre i et bredt bølgelængdeområde. For det andet er effekten af en inert absorber, der dæmper intensiteten af eksitationsstrålen, når den bevæger sig gennem kuvetten, hvilket fører til en signifikant afvigelse af observerede resultater. Som et eksempel præsenterer vi fluorescensblødning af en tryptophan-analog, NATA, af acrylamid, og vi viser, hvordan korrekt korrigerede resultater sammenlignes med de oprindelige fejlagtige resultater. Proceduren er generisk og gælder for mange andre applikationer som bestemmelse af kvanteudbytte, væv/blodabsorption eller acceptorabsorption i FRET-eksperimenter.
