Allosterische Effektoren, die mit Hämoglobin interagieren, binden an die Hämoglobinmoleküle und regulieren so die Sauerstoffaufnahme und -freisetzung. Therapeutische Medikamente, die diese Reaktion hemmen, bergen ein erhebliches Missbrauchspotenzial, da eine erhöhte Sauerstoffversorgung des Gewebes die sportliche Leistung verbessert. Der neuartige allosterische Effektor Myo-Inositoltrispyrophosphat (ITPP) befindet sich derzeit in klinischen Phase-1-Studien für Anwendungen bei chronischer Herzinsuffizienz und Krebs (unter der Bezeichnung OXY111A). Diese Verbindung wurde bereits zur Leistungssteigerung in der Pferderennindustrie verwendet und ist online in Form von oralen Nahrungsergänzungsmitteln und sogar injizierbaren Lösungen leicht verfügbar. ITPP ist auf der verbotenen Liste der Substanzen der Welt-Anti-Doping-Agentur für menschliche Athleten enthalten; Es gibt jedoch noch keine Methode, um diese Substanz im menschlichen Urin nachzuweisen.
Aus diesem Grund haben Görgens et al. (2014) wollten ein einfaches, robustes Screening- und Bestätigungsprotokoll für ITPP im menschlichen Urin entwickeln.1 Da die Verbindung von Natur aus sehr polar und daher für die Reversed-Phase-Flüssigkeitschromatographie ungeeignet ist, wandte sich das Team für die Analyse von menschlichem Urin, der mit ITPP und internem Standard ITPP-d6 versetzt war, der Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography (HILIC) und Tandem-Massenspektrometrie (MS / MS) zu. Die Forscher verwendeten eine Quartärpumpe Accela 1250, einen PAL-Autosampler und ein Q Exactive Hybrid Quadrupol-Orbitrap-Massenspektrometer (alle Thermo Scientific), um die Vorläuferionen sowohl für ITPP als auch für den internen Standard (m / z 301.9065 und 304) nachzuweisen.9253), sowie die Diagnoseproduktnummer (m/z 78.9580, 158.9243 und 524.8550). Sie entwickelten auch ein Bestätigungsprotokoll für verdächtige Urinproben unter Verwendung einer Festphasenextraktionsmethode mit schwachem Anionenaustausch (WAX-SPE).
Das Team stellte fest, dass ihre Methode sowohl für das Screening als auch für die Bestätigung spezifisch ist, mit guter Präzision über einen Konzentrationsbereich von 50-500 ng / ml bzw. 5-125 ng / ml für das Screening und die Bestätigung. Sie schätzten die unteren Nachweisgrenzen auf 15 ng / ml bzw. 1 ng / ml für das Screening und die Bestätigung. Sie berichten auch keine signifikante Abnahme der ITPP-Konzentration innerhalb der Urinmatrix nach drei Monaten Lagerung, im Einklang mit der obligatorischen Dopingkontrolle Lagerzeit.
Görgens et al. präsentieren Sie ihre Methode als sensitives, zuverlässiges Protokoll zum Screening und zur Bestätigung des Vorhandenseins von ITPP im menschlichen Urin. Sie stellen fest, dass HILIC Separation ihre Screening-Methode schnell und zeiteffektiv macht, praktisch ohne Probenvorbereitung. Die zusätzliche Möglichkeit der Bestätigung durch Festphasenextraktion erhöht die Sensitivität und Vielseitigkeit des Gesamtprotokolls. Das Team postuliert weiter, dass die Flexibilität ihres Ansatzes es für andere Screening-Anwendungen geeignet machen könnte, insbesondere für solche mit hochpolaren Analyten.
Referenz
1. Görgens, C., et al. (2014, Juli) „Screening und Bestätigung von Myo-Inositoltrispyrophosphat (ITPP) im menschlichen Urin durch hydrophile Wechselwirkung Flüssigkeitschromatographie hochauflösende / hochgenaue Massenspektrometrie für Dopingkontrollzwecke“, Drogentests und -analyse, doi: 10.1002 / dta.1700.
Beitrag Autor: Melissa J. Mayer. Melissa ist eine freiberufliche Autorin, die sich auf Wissenschaftsjournalismus spezialisiert hat. Sie verfügt über Leidenschaft und Erfahrung in den Bereichen Proteomik, Zell- / Molekularbiologie, Mikrobiologie, Biochemie und Immunologie. Melissa ist auch zweisprachig (Spanisch) und hat ein Lehrzertifikat mit einer Biologie-Bestätigung.
