( Hinweis: In der folgenden Beschreibung besteht das Format des Assays darin, den Liganden zu immobilisieren, um den freien Rezeptor in der Probe zu messen. Umgekehrt kann der Rezeptor immobilisiert werden, um den freien Liganden in der Probe zu messen, abhängig von den verwendeten Materialien.)
Die Messung des freien Rezeptors erfolgt durch kurzes Aussetzen der Probenmischung in eine feste Phase, an der der Liganden immobilisiert ist. Die Expositionszeit ist kritisch, da das Halten der Interaktionszeit der Probe mit der Festphase ziemlich kurz zu einer Situation führt, in der die einzige signifikante Bindung an die Festphase vom freien Rezeptor aus erfolgt. Der kinetische Ausschlussassay steht im Gegensatz zu einem Kompetitionsassay, bei dem die äquilibrierte Lösung lange genug mit der Festphase in Kontakt steht, damit der Festphasenligand um den Lösungsrezeptor konkurrieren kann.
Der Vorteil von KinExA besteht darin, dass das Signal des eingefangenen Rezeptors nur die Konzentration darstellt, die in der Lösung frei ist. Die Kenntnis der Gleichgewichtskonzentration des Rezeptors ermöglicht die Bestimmung der Bindungskonstanten, wie auf der Seite Reversible Bindung beschrieben.
Die im Handel erhältlichen Instrumente zur Durchführung von KinExA-Assays (KinExA 4000, 3200 und 3100 von Sapidyne) verwenden eine kleine Partikelsäule, durch die die Probe und andere Reagenzien geleitet werden. Die Kontaktzeit eines beliebigen Teils der Probe mit der Festphase ist dann die Laufzeit durch die Säule und kann durch die gewählte Flussrate gesteuert werden (von etwa 50 Millisekunden bis etwa einer Sekunde).
Systeme mit NM-Bereich Bindemittel oder fester befinden sich im kinetischen Ausschlussassay-Modus (KinExA-Modus). Schwächere Bindemittel können noch gemessen werden, erfordern jedoch möglicherweise zusätzliche Sorgfalt, um eine Störung der Probe durch die Messung zu vermeiden. KinExA eignet sich besonders gut zur Messung von Affinität und Kinetik und funktioniert auch als verbesserte Immunoassay-Plattform. Eine detailliertere Erklärung der KinExA-Messungen finden Sie unten.
