Die modifizierte Knotts Methode wird zur Konzentration und Identifizierung von Mikrofilarien, insbesondere des Herzwurms Dirofilaria immitis, verwendet. Es muss von den nicht pathogenen Mikrofilarien von Dipetalonema reconditum (kurz „Dipet“) unterschieden werden.
Ein direkter Blutausstrich kann gleichzeitig durchgeführt werden. Es ist ein schneller, Nicht-Konzentrationstest für Mikrofilarien. Dirofilaria und Dipet unterscheiden sich durch ihr Motilitätsmuster.
Diese Tests sollten immer dann durchgeführt werden, wenn ein Patient Herzwurmantigen-positiv testet oder Grund zu der Annahme besteht, dass der Hund derzeit eine Herzwurmerkrankung hat oder in der Vergangenheit hatte. Das Vorhandensein von Dirofilaria beeinflusst den Verlauf und / oder die Wahl der Behandlung.
Der Knott-Test kann ohne direkten Abstrich durchgeführt werden, aber niemals ohne einen Knott-Test. Der Knott’s ist ein empfindlicherer Test, da er die Mikrofilarien konzentriert, so dass sie bei der mikroskopischen Untersuchung weniger übersehen werden.
Verfahren zum direkten Abstrich:
Einfach. Legen Sie einen Tropfen Blut, vorzugsweise aus einem EDTA-Röhrchen oder einer heparinisierten Spritze, in die Mitte eines Objektträgers. Lassen Sie einen Überzug über die Oberseite fallen und untersuchen Sie ihn unter dem Mikroskop mit 10-facher Leistung. Dirofilaria hat eine stationäre, sich windende Bewegung; Dipetalonema zeigt eine schnellere, gerichtete Bewegung und schießt oft direkt vom Feld.
Verfahren für die modifizierte Knotts Technik:
Stellen Sie sicher, dass Sie zum Schutz Handschuhe tragen. Fügen Sie mit einem 15-ml-Zentrifugenröhrchen ungefähr 10 ml 2% iges Formalin (das im Handel erhältlich ist) zu 1 ml antikoaguliertem Blut hinzu. Legen Sie Ihren Daumen über die Oberseite des verschlossenen Röhrchens und drehen Sie ihn mehrmals um, um gründlich zu mischen. 5 Minuten bei 1000 bis 1500 U/min zentrifugieren.
Sie sollten in der Lage sein, einen weißlichen Stopfen am Boden der Röhre nach dem Drehen zu visualisieren. Entsorgen Sie den Überstand im geeigneten Behälter für gefährliche Abfälle.
Fügen Sie mit einer langen Glas- oder Plastikpipette einen Tropfen neuen Methylenblau-Fleck hinzu
Mischen Sie den Fleck mit der Pipette mit dem Sediment
Geben Sie einen Tropfen dieser Mischung in die Mitte eines Objektträgers. Lassen Sie einen Deckzettel darauf fallen. Untersuchen Sie am Mikroskop unter 10x Leistung.
Im Gegensatz zum direkten Abstrich präsentieren sich die Mikrofilarien als stationär. Dirofilaria muss nach Größe und Form von Dipetalonema unterschieden werden. Verwenden Sie die folgende Tabelle zur Unterscheidung:
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Parameter |
D. immitus |
D. reconditum |
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Länge (Mikrometer) |
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Breite (Mikrometer) |
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Form (vorderes Ende) |
Konisch |
blunt |
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Form (Körper) |
Gerade |
gekrümmt |
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Form (Schwanz) |
Gerade |
Knopf Haken |
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Anzahl vorhanden |
Wenige zu viele |
wenige |
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Bewegung |
Stationär |
Bewegt sich über Folie |
( Cornell University)
Ein weiterer cooler Test für Mikrofilarien
Füllen Sie ein Mikrohämatokritröhrchen und drehen Sie es nach unten, als würden Sie eine PCV durchführen.
Legen Sie das Röhrchen auf einen Objektträger und stellen Sie es auf den Mikroskoptisch. Konzentriere dich auf den Buffy Coat mit 10-facher Leistung – wenn ein Hund herzwurmpositiv ist und zirkulierende Mikrofilarien hat, Sie können sehen, wie sich die Mikrofilarien im Buffy Coat winden!
