Resumen
Lavermectina tiene una potente actividad sistémica contra numerosas especies de nematodos y artrópodos, pero hay algunas especies importantes en estos dos grupos, como la pulga de gato, Ctenocephalides felis (Bouché), que parecen ser refractarios a él. En un esfuerzo por determinar si la falta de actividad sistémica contra C. felis es específico de lavermectina, o si se trata de un fenómeno de clase amplia, se probaron 20 derivados de la avermectina en un sistema de alimentación de pulgas de membrana artificial a concentraciones de 20, 10 y 1 µg/ml. Los resultados mostraron que lavermectina tenía valores de LC90 y LC50 frente a pulgas de 19,1 y 9,9 µg / ml, respectivamente. Solo cuatro de los otros 19 compuestos evaluados poseían valores de LC90 y LC50 más potentes que lavermectina e incluso entonces la ventaja era modesta. Entre esos cuatro compuestos se observó un aumento de la potencia de dos veces en relación con lavermectina cuando se consideraron los valores de LC90 (rango, 9.2–10.3 µg / ml) y un aumento de dos a ocho veces cuando se examinaron los valores de CL50 (rango, 1,23 – 5,26 µg/ml). Ni la posesión ni el número de azúcares oleandrosílicos en la columna vertebral macrocíclica fueron relevantes para la actividad adicional de pulgas porque entre estos cuatro compuestos había dos disacáridos, un monosacárido y una aglicona. Además, la disposición de enlaces entre C-22 y 23 no contribuyó al aumento de la actividad porque estas moléculas comprenden miembros con enlaces simples o dobles. Uno de estos análogos de la avermectina se amplió y se probó por vía subcutánea en un perro a >100 veces la dosis comercial de avermectina y se observó una eficacia cero contra la pulga. Concluimos que incluso la mejor avermectina in vitro no tiene el potencial in vivo de convertirse en un tratamiento comercial para pulgas por vía oral o subcutánea para animales de compañía.
La clase de endectocidas de avermectina tiene una potente actividad sistémica contra numerosas especies de nematodos y artrópodos (Egerton et al. 1979, 1980). Particularmente llamativas, por ejemplo, son las casi absolutas eficacias contra helmintos como la dirofilaria inmadura, Dirofilaria immitis, en perros a 6,0 µg/kg (Campbell 1989) y contra insectos como las larvas de la larva de ganado común, Hypoderma lineatum (Villers), en ganado a 0,2 µg/kg (Drummond 1984). Sin embargo, a pesar de esta enorme potencia, hay otros organismos dentro de estos grupos que parecen ser refractario a la ivermectina. La pulga para gatos, Ctenocephalides felis (Bouché), es un ejemplo clínicamente relevante. Lavermectina se administró semanalmente por vía oral a 0,5 mg/kg o diariamente a 0.05 mg / kg y se ha observado que es inactivo frente a este parásito en perros (Blair et al. 1984). Banks et al. (2000) y Shoop et al. (2001) corroboraron de forma independiente esos resultados al mostrar que lavermectina tiene una actividad sistémica débil contra la pulga de gato en ensayos de alimentación de pulgas de membrana artificial.
En un esfuerzo por determinar si la falta de actividad sistémica contra pulgas es específica de lavermectina, o si es un fenómeno de toda la clase, se probaron 20 avermectinas en un sistema de alimentación de pulgas de membrana artificial. La serie estratégicamente seleccionada de avermectinas probadas contenía representantes de la mayoría de los sitios químicamente accesibles que se han explotado alrededor del macrociclo. El grupo comprende todas las avermectinas de origen natural, así como miembros semisintéticos de las series de agliconas, monosacáridos y disacáridos de importancia biológica. También se incluyeron los compuestos comercializados abamectina ,vermectina, milbemicina D y selamectina. En este artículo presentamos las potencias relativas de estos miembros de la familia de la avermectina contra pulgas a través de pruebas en un sistema de membrana artificial y mostramos los resultados de eficacia in vivo de un perro dosificado subcutáneamente con una de las avermectinas más potentes probadas.
Materiales y Métodos
El Galgo.
El sistema de alimentación de pulgas con membrana artificial que utilizamos es una modificación del» perro artificial » fabricado por Jay R. Georgi (FleaData, Freeville, NY). Este sistema de membrana artificial fue diseñado para atrapar pulgas, pero también se sugirió que podría probar los efectos de los insecticidas sistémicos (Wade y Georgi 1988 y Pullen y Meola 1996) y se ha utilizado para descubrir el nuevo indol terpeno, ácido nodulispórico A (Shoop et al. 2001). En colaboración con Jay R. Georgi, modificamos el perro artificial. Este nuevo sistema (Fig. 1) se le dio la designación de «Galgo» porque fue diseñado para ser más eficiente, más fácil de configurar y permitió que un mayor número de compuestos se probaran simultáneamente. A diferencia del perro artificial, que contiene solo 25 jaulas de 5 cm suspendidas individualmente debajo de un recinto de plexiglás calentado, el nuevo sistema contiene un colector extraíble de 59 x 38 cm que sostiene jaulas de 104 cm de 2,5 cm. También reemplazamos los manguitos de alimentación no desechables de aluminio por manguitos CVC de plástico (Costar, Cambridge, MA). Las mangas de plástico se desecharon después de cada uso para minimizar la probabilidad de contaminación por drogas.
Sistema de alimentación por membrana artificial utilizado para probar la eficacia sistémica de las pulgas.
Sistema de alimentación por membrana artificial utilizado para probar la eficacia sistémica de las pulgas.
Cría de pulgas.
Nuestra colonia de pulgas se mantuvo en gatos alojados de acuerdo con nuestro Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales. Los huevos recolectados de gatos se incubaron a 28 ° C y 85% de HR en un medio compuesto de ocho partes de arena y una parte de sangre de bovino liofilizada (California Spray Dry Company, Stockton, CA). Las pulgas utilizadas en este estudio habían emergido de su puparia en 48 h.
Preparación compuesta.
Se probaron avermectinas en concentraciones de 20, 10 y 1 µg / ml. Se probaron dos repeticiones de cada compuesto en cada nivel en una comparación lado a lado utilizando dos de nuestros sistemas de alimentación. El vehículo utilizado fue polietilenglicol 400 y sulfóxido de dimetilo (2:1). Se utilizaron diez microlitros de vehículo por mililitro de sangre de bovino heparinizada. Todos los compuestos fueron fermentados o modificados sintéticamente por los químicos de Merck, excepto la selamectina.
La purificación preliminar de la selamectina se realizó de la siguiente manera. Seis ampollas de Revolution (240 mg cada una) se diluyeron en volúmenes mínimos de CH2Cl2 y se cargaron en una almohadilla de gel de sílice (4 pulgadas de alto). Gradiente de elución ,
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. (en prensa).
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