Los efectores alostéricos que interactúan con la hemoglobina se unen a las moléculas de hemoglobina, regulando así la absorción y liberación de oxígeno. Los fármacos terapéuticos que ilicitan esta respuesta conllevan un potencial de abuso significativo, ya que el aumento de la oxigenación de los tejidos mejora el rendimiento deportivo. El nuevo efector alostérico mioinositol trispirofosfato (ITPP) se encuentra actualmente en ensayos clínicos de fase 1 para aplicaciones de insuficiencia cardíaca crónica y cáncer (bajo la designación de OXY111A). Este compuesto ya se ha utilizado para mejorar el rendimiento en la industria de las carreras de caballos y está disponible en línea en forma de suplementos nutricionales orales e incluso soluciones inyectables. ITPP está incluido en la lista de sustancias prohibidas de la Agencia Mundial Antidopaje para atletas humanos; sin embargo, aún no existe ningún método para detectar esta sustancia en la orina humana.
Por esta razón, Görgens et al. (2014) se propusieron desarrollar un protocolo de detección y confirmación simple y sólido para el PTIP en orina humana.1 Debido a que el compuesto es de naturaleza altamente polar y, por lo tanto, inadecuado para la cromatografía líquida de fase inversa, el equipo recurrió a la cromatografía líquida de interacción hidrófila (HILIC) y la espectrometría de masas en tándem (MS/MS) para el análisis de orina humana enriquecida con ITPP y el estándar interno ITPP-d6. Los investigadores utilizaron una bomba cuaternaria Accela 1250, un muestreador automático PAL y un espectrómetro de masas híbrido cuadrupolar-orbital Q Exactive (todos ellos Thermo Scientific) para detectar los iones precursores tanto para ITPP como para el estándar interno (m/z 301.9065 y 304.9253, respectivamente), así como los iones del producto de diagnóstico (m/z 78.9580, 158.9243 y 524.8550). También desarrollaron un protocolo de confirmación para muestras de orina sospechosas, utilizando un método de extracción en fase sólida de intercambio de aniones débiles (WAX-SPE).
El equipo determinó que su método es específico tanto para el cribado como para la confirmación, con buena precisión en un rango de concentración de 50-500 ng/mL y 5-125 ng/mL para el cribado y la confirmación, respectivamente. Estimaron que los límites inferiores de detección eran de 15 ng/ml y 1 ng / mL, respectivamente, para el cribado y la confirmación. Tampoco informan de una disminución significativa de la concentración de PTIP dentro de la matriz urinaria después de tres meses de almacenamiento, en consonancia con el período de almacenamiento de control de dopaje obligatorio.
Görgens et al. presentar su método como un protocolo sensible y confiable para la detección y confirmación de la presencia de ITPP en la orina humana. Señalan que la separación hiliana hace que su método de cribado sea rápido y eficaz en el tiempo, prácticamente sin preparación de muestras. La opción adicional de confirmación a través de extracción en fase sólida aumenta la sensibilidad y versatilidad del protocolo total. El equipo postula además que la naturaleza flexible de su enfoque puede hacerlo adecuado para otras aplicaciones de cribado, en particular aquellas con analitos altamente polares.
Referencia
1. Görgens, C., et al. (2014, julio)» Screening and confirmation of mio-inositol trispirofosfato (ITPP) en orina humana por cromatografía líquida de interacción hidrófila espectrometría de masas de alta resolución / alta precisión para fines de control de dopaje», Drug Testing and Analysis, doi: 10.1002/dta.1700.
Autor del mensaje: Melissa J. Mayer. Melissa es una escritora independiente que se especializa en periodismo científico. Posee pasión y experiencia en los campos de la proteómica, biología celular/molecular, microbiología, bioquímica e inmunología. Melissa también es bilingüe (español) y tiene un certificado de enseñanza con un endoso de biología.
