El método de Knott modificado se utiliza para la concentración e identificación de microfilarias, específicamente la Dirofilaria immitis. Debe diferenciarse de la microfilaria no patógena de Dipetalonema reconditum («Dipeto» para abreviar).
Se puede hacer un frotis de sangre directo al mismo tiempo. Es una prueba rápida y sin concentración para microfilaria. La dirofilaria y el dipeto se diferencian por su patrón de motilidad.
Estas pruebas siempre se deben hacer siempre que un paciente pruebe el antígeno del gusano del corazón positivo, o haya alguna razón para sospechar que el perro actualmente tiene o ha tenido la enfermedad del gusano del corazón en el pasado. La presencia de Dirofilaria afectará el curso y/o la elección del tratamiento.
La prueba de Knott se puede hacer sin hacer un frotis directo, pero nunca haga un frotis directo sin hacer una prueba de Knott. La prueba de Knott es más sensible porque concentra la microfilaria para que sea menos probable que se pierda durante el examen microscópico.
Procedimiento para frotis directo:
Simple. Coloque una gota de sangre, preferiblemente de un tubo de EDTA o una jeringa heparinizada, en el centro de un portaobjetos. Coloque una tapa sobre la parte superior y examine bajo el microscopio con una potencia de 10 veces. La dirofilaria tendrá un movimiento estacionario y retorcido; el Dipetalonema exhibirá un movimiento direccional más rápido y a menudo disparará directamente desde el campo.
Procedimiento para la técnica de Knott modificada:
Asegúrese de usar guantes para protegerse. Usando un tubo centrífugo de 15 ml, agregue aproximadamente 10 ml de formalina al 2% (esto se puede comprar comercialmente) a 1 ml de sangre anticoagulada. Coloque el pulgar sobre la parte superior del tubo con tapa e invierta varias veces para mezclar bien. Centrifugar durante 5 minutos a 1000 a 1500 rpm.
Debería poder visualizar un tapón blanquecino en la parte inferior del tubo después de girar. Deseche el sobrenadante en el contenedor de desechos peligrosos adecuado.
Usando una pipeta larga de vidrio o plástico, agregue una gota de nueva mancha azul de metileno
Use la pipeta para mezclar la mancha con el sedimento
Agregue una gota de esta mezcla al centro de un portaobjetos. Coloque un resbalón de cubierta en la parte superior. Examine en el microscopio con una potencia de 10 veces.
A diferencia del frotis directo, la microfilaria se presentará estacionaria. La dirofilaria debe distinguirse de la dipetalonema en función del tamaño y la forma. Utilice la siguiente tabla para ayudarle a diferenciar:
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Parámetro |
D. imitus |
D. reconditum |
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Longitud (en micras) |
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Ancho (en micras) |
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Forma (extremo anterior) |
Cónico |
romo |
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Forma (cuerpo) |
Recta |
curva |
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la Forma de la cola) |
Recta |
el gancho de Botón |
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Número actual |
Pocos y muchos |
pocos |
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Movimiento |
Estacionaria |
se Mueve a través de diapositivas |
(la Universidad de Cornell)
Otra buena prueba para microfilarias
Rellenar un microhematocritos tubo y girar hacia abajo como si de un pcv.
Coloque el tubo en un portaobjetos y colóquelo en el escenario del microscopio. Concéntrese en el abrigo buffy con 10 veces de potencia – si un perro es positivo para el gusano del corazón y tiene microfilaria circulante, ¡puede ver la microfilaria retorciéndose en el abrigo buffy!
