Los reactivos Kastle Meyer y Hemastix son pruebas presuntivas comúnmente utilizadas en estudios forenses para la detección de sangre, y su idoneidad ha sido revisada en numerosas publicaciones. Sin embargo, los estudios hasta la fecha se han centrado en la validación de estas pruebas en sangre humana sola, y ningún trabajo publicado ha analizado la sensibilidad, especificidad y efecto en el análisis de ADN cuando se utilizan estos reactivos para probar presuntamente sangre animal. El objetivo de este estudio fue validar los dos reactivos para su uso con sangre de animales y comparar su desempeño para elegir la mejor prueba en función de las circunstancias en la investigación de delitos contra la vida silvestre.
La sensibilidad, especificidad, estabilidad y robustez de los métodos se evaluaron mediante experimentos con diluciones de sangre animal (de 1:4 a 1:65536) utilizando pruebas directas e indirectas (frot), sustancias potencialmente interferentes, fuentes de sangre de diferentes especies y sangre envejecida. También se investigaron los efectos de los dos reactivos en el análisis de ADN posterior.
Durante las pruebas directas, Kastle Meyer mostró una mayor sensibilidad, detectando sangre hasta una dilución de 1:16.384, un orden de magnitud menor que Hemastix. Sin embargo, durante la prueba de frotación, Hemastix mostró una mayor sensibilidad, detectando sangre hasta una dilución de 1:64 en materiales porosos, mientras que Kastle Meyer fue positivo solo hasta una dilución de 1:16. Además, al usar el mismo hisopo para pruebas presuntivas y extracción de ADN, las pruebas de Hemastix permitieron la amplificación de una cantidad suficiente de ADN para la identificación de especies en su límite de sensibilidad en materiales porosos (1:64), mientras que Kastle Meyer inhibió la mayoría de la amplificación de ADN en su límite menos sensible de dilución de 1:16. Por otro lado, Hemastix mostró una especificidad mucho menor, produciendo resultados falsos positivos cuando se expuso al tomate, la papa, la roya, el ácido úrico aviar, la lejía y la pudrición del fregadero, mientras que Kastle Meyer solo produjo una débil reacción positiva de la papa. Ambas pruebas se realizaron igualmente bien detectando sangre fresca de diferentes especies animales. La prueba de estabilidad dio resultados comparables entre las pruebas, excepto para las manchas de sangre de peces envejecidos, donde la prueba de Kastle Meyer tuvo un mal desempeño.
Debido a su facilidad de uso, mayor sensibilidad y falta de interferencia con el análisis de ADN posterior, y a pesar de su especificidad reducida en comparación con Kastle Meyer, el método Hemastix es más apropiado para su uso en investigaciones de delitos contra la vida silvestre. Los resultados positivos siempre se confirmarían con el análisis de ADN y la baja interferencia del reactivo permitirá el uso de un solo hisopo para pruebas presuntivas y muestreo de ADN.
