hemoglobiinin kanssa vuorovaikutuksessa olevat allosteeriset efektorit sitoutuvat hemoglobiinimolekyyleihin ja säätelevät siten hapenottokykyä ja vapautumista. Terapeuttiset lääkkeet, jotka laittavat tämän vasteen, sisältävät merkittävän väärinkäytön mahdollisuuden, koska kudosten lisääntynyt hapetus parantaa urheilusuoritusta. Uusi allosteerinen efektori myo-inositolitrispyrofosfaatti (ITPP) on tällä hetkellä vaiheen 1 kliinisissä tutkimuksissa kroonisen sydämen vajaatoiminnan ja syövän sovelluksissa (oxy111a-nimityksellä). Tätä yhdistettä on jo käytetty suorituskyvyn parantamiseen hevoskilpailuissa ja se on helposti saatavilla verkossa suun kautta annettavien ravintolisien ja jopa injektoitavien ratkaisujen muodossa. ITPP kuuluu maailman antidopingtoimiston ihmisurheilijoiden kiellettyjen aineiden listalle, mutta vielä ei ole olemassa menetelmää, jolla kyseinen aine voitaisiin havaita ihmisen virtsasta.
tästä syystä, Görgens et al. (2014) lähti kehittämään yksinkertaista, vankkaa seulonta-ja vahvistusprotokollaa itpp: lle ihmisen virtsassa.1 koska yhdiste on luonteeltaan erittäin polaarinen ja siksi ei sovellu käänteisfaasinestekromatografiaan, ryhmä kääntyi hydrofiiliseen vuorovaikutukseen NESTEKROMATOGRAFIAAN (HILIC) ja tandem-massaspektrometriaan (MS/MS) ihmisen virtsan analysoimiseksi, johon on lisätty itpp ja sisäinen standardi ITPP-d6. Tutkijat käyttivät ACCA 1250-kvaternääripumppua, pal autosampleria ja Q Exactive hybrid quadrupole-Orbitrap-massaspektrometriä (kaikki Thermo Scientific) sekä itpp: n että sisäisen standardin (m/z 301.9065 ja 304.9253, vastaavasti) sekä diagnostinen tuote ionit (m/z 78.9580, 158.9243, ja 524.8550). He kehittivät myös vahvistusprotokollan epäilyttäville virtsanäytteille käyttäen heikkoa anioninvaihtoon perustuvaa kiinteäfaasiuuttomenetelmää (WAX-SPE).
tutkimusryhmä totesi, että heidän menetelmänsä soveltuu sekä seulontaan että varmistukseen hyvin tarkasti pitoisuusalueella 50-500 ng/mL ja varmistukseen pitoisuusalueella 5-125 ng/mL. He arvioivat seulonnan ja varmistuksen alarajaksi 15 ng/mL ja 1 ng/mL. He raportoivat myös, ettei ITPP-pitoisuus virtsamatriisissa ole laskenut merkittävästi kolmen kuukauden varastoinnin jälkeen, mikä on yhdenmukaista pakollisen dopingvalvonnan säilytysajan kanssa.
Görgens ym. esitä menetelmänsä herkkänä ja luotettavana protokollana, jolla seulotaan ja vahvistetaan ITPP: n esiintyminen ihmisen virtsassa. He toteavat, että HILIC-erottelu tekee seulontamenetelmästä nopean ja aikatehokkaan, eikä näytteiden valmistusta käytännössä tapahdu. Lisävaihtoehto vahvistuksen kautta kiinteä-faasi louhinta lisää herkkyyttä ja monipuolisuutta koko protokolla. Lisäksi ryhmä arvioi, että heidän lähestymistapansa joustavuuden vuoksi se voi soveltua muihin seulontasovelluksiin, erityisesti sellaisiin, joissa on erittäin polaarisia analyyttejä.
viite
1. Görgens, C., et al. (2014, heinäkuu)” Screening and confirmation of myo-inositol trispyrofosphate (ITPP) in human urine by hydrofiilic interaction liquid chromatography high resolution / high accuracy mass spectrometry for doping control purposes, ” Drug Testing and Analysis, doi: 10.1002/DTA.1700.
Post Author: Melissa J. Mayer. Melissa on freelance-kirjailija, joka on erikoistunut tiedejournalismiin. Hänellä on intohimoa ja kokemusta proteomiikan, solu – /molekyylibiologian, mikrobiologian, biokemian ja immunologian aloilta. Melissa on myös Kaksikielinen (Espanja) ja hänellä on biologian hyväksymismerkinnällä varustettu opetustodistus.
