Kigelia africanan antimikrobiset, antioksidanttiset ja haavoja parantavat ominaisuudet (Lam.) Beneth. ja Strophanthus hispidus DC.

Abstrakti

erilaisten haavojen Mikrobitulehdukset ovat haaste haavojen hoidossa ja haavojen parantumisessa. Tutkimuksessa selvitettiin Kigelia africana-kasvin metanolin lehtien ja varren kuoriuutteiden sekä Strophanthus hispidus-kasvin metanolin lehti-ja juuriuutteiden antimikrobisia ja antioksidanttisia ominaisuuksia sekä selvitettiin uutteiden haavan paranemisominaisuuksia. Metanoliuutteiden antimikrobiset vaikutukset määritettiin kahta Grampositiivista ja kahta Gramnegatiivista bakteeria ja yhtä sientä vastaan agar-diffuusio-ja mikrolaimennusmenetelmillä. Antioksidanttiaktiivisuus määritettiin 1,1-difenyyli-2–pikryylihydratsyyli (DPPH) – menetelmällä. Uutteiden vaikutusta haavan sulkeutumisnopeuteen tutkittiin leikkaushaavan mallilla ja hoidettujen ja käsittelemättömien haavakudosten histopatologisella tutkimuksella. K. africanan lehtiuutteen MIC-arvot testiorganismeja vastaan olivat 2,5-7,5 mg / mL ja varren kuoriuutteen 2,25–7.5 mg/mL. S. hispiduksen lehtiuutteen MIC–vaihteluväli oli 2,5–7,5 mg/mL ja juuriuutteen 2,5-10 mg/mL. K. africanan lehtien ja varren kuoriuutteiden IC50-arvot olivat vastaavasti 56,9 ja 13,7 µg/mL ja S. hispiduksen lehtien ja juurten IC50-arvot olivat 49,8 ja 45,1 µg/mL. K. africana-uutteet (7,5% w/w) osoittivat merkittävää () haavan supistumista 7.päivänä ja 72% haavan sulkeutumisesta, kun taas merkittäviä () haavan supistumisia havaittiin 11. päivänä K. africana-kasvin varren kuoressa ja S. hispidus-kasvin lehti-ja juuriuutteissa. Uutteilla käsitellyt haavakudokset osoittivat parantunutta kollagenaatiota, uudelleen epiteliazitiota ja nopeaa granulaatiomuodostusta verrattuna käsittelemättömiin haavakudoksiin. Uutteiden havaittiin sisältävän alkaloideja, saponiineja, tanniineja, flavonoideja, hiilihydraatteja ja sapogeneettisiä glykosideja. Uutteiden HPLC-sormipainatus kehitettiin. K. africanan ja S. hispiduksen lehti -, varsi-ja juuriuutteilla oli antimikrobisia, antioksidanttisia ja parannettuja haavan paranemisominaisuuksia, ja nämä voivat oikeuttaa kasvien lääkinnälliset käyttötarkoitukset mikrobien infektioiden ja haavojen hoitoon.

1. Johdanto

haavaa käytetään yleisimmin viitattaessa iskun, viillon, ohjuksen tai Piston aiheuttamaan ihovaurioon tai sen taustalla oleviin kudoksiin tai elimiin. Haava sisältää myös kemikaalien, kylmyyden, kitkan, lämmön, paineen ja säteiden aiheuttamia vammoja iholle sekä sisäisten olosuhteiden, esimerkiksi painehaavojen ja haavaumien, ilmenemistä ihossa . Haavoilla on valtava vaikutus parantuvaan terveydenhuollon talouteen. Krooniset haavat ovat suuri terveystaakka ja kuluttavat terveydenhuollon resursseja maailmassa, myös Ghanassa .

haavojen suuri ongelma on suuri infektioriski; jos siis paranemisprosessissa käytetään infektiota aiheuttavia mikro-organismeja vastaan vaikuttavaa ainetta, se auttaa vähentämään infektioriskiä ja haavan paranemiseen kuluvaa aikaa voidaan lyhentää merkittävästi. Esimerkiksi bakteerien on hyvin helppo päästä rikkoutuneen ihon läpi ja tunkeutua muualle kehoon. Bakteerit kolonisoivat haavat 48 tunnin kuluessa vammasta ja bakteerit, kuten Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa ja Streptococcus spp, voivat aiheuttaa infektion ja tämä voi pidentää haavan tulehdusvaihetta . Siksi sopivia mikrobilääkkeitä voidaan käyttää joko paikallisesti tai järjestelmällisesti estämään haavojen tulehtumista ja nopeuttamaan haavan paranemisprosessia.

tulehdusprosessi johtaa normaalisti biologisesti aktiivisten välittäjäaineiden vapautumiseen neutrofiilien, leukosyyttien ja monosyyttien houkuttelemiseksi haava-alueelle, ja nämä hyökkäävät fagosytoosin kautta vieraiden jätteiden ja mikro-organismien kimppuun. Tämä johtaa hapettomien radikaalien, kuten vetyperoksidin, superoksidianionin ja hydroksyylianionin tuotantoon ja näiden aineiden ylimäärä aiheuttaa kudosvaurioita ihmisessä tai eläimessä, jos ne hukuttavat isännän luonnolliset antioksidantit, kuten katalaasin, superoksididismutaasin ja glutationiperoksidaasin. Siksi antioksidantit estävät vapaiden radikaalien toimintaa ja siten estävät solujen ja kudosten vahingoittumisen, mikä suojaa ihmisiä ja eläimiä, ja myös parantavat tartunnan saaneiden ja infektoimattomien haavojen paranemista .

Kigelia africana (Lam.) Beneth. kuuluu Bignoniaceae-heimoon. Se tunnetaan nimellä” Nufutene ” paikallisessa Asante-Twissä Ghanassa. Se on laajalle levinnyt koko Afrikassa mukaan lukien Ghana, Sierra Leone, Gambia, Sudan, Ja Nigeria ja se löytyy märkä savanni ja lähellä jokivarsien jossa se esiintyy runsaasti . Sitä käytetään ihosairauksien, kuten sieni-infektioiden, paiseiden, psoriasiksen ja ekseeman, lepran, syfiliksen ja syövän hoitoon. Juurista, puusta ja lehdistä on löydetty kigelinonia, vernolihappoa, kigeliiniä, iridoideja, luteoliinia ja 6-hydroksyluteoliinia . Iridoideilla on antibakteerinen vaikutus .

Strophanthus hispidus DC. kuuluu Apocynaceae-heimoon ja sitä kutsutaan paikallisessa Asante-Twissä nimellä ”Maatwa”. Sitä tavataan kaikkialla Afrikassa ja savannimetsissä Ghanassa, Senegalissa, Sudanissa, Kongo DR: ssä, Ugandassa ja Tansaniassa. Sillä on monia lääkinnällisiä käyttötarkoituksia, kuten vastamyrkky mustakaulakobran myrkylle, kuppahaavojen, luisen kupan ja guineanmadon haavojen ja haavojen hoidossa . Kasvi sisältää amorfista glykosidia (pseudostrofantiini), jossa on raskasöljyä, kahta alkaloidia (trigonelliini ja koliini), hartsia, limalimaa ja ramnoosisokeria . Tutkimuksen tavoitteena on tutkia K. africanan metanolilehti-ja varsikuoriuutteiden sekä S. hispiduksen metanolilehti-ja juuriuutteiden antimikrobisia, antioksidanttisia ja haavoja parantavia ominaisuuksia.

2. Materiaalit ja menetelmät

2.1. Kasvimateriaalit ja kemikaalit

K. africanan varren kaarna ja lehdet sekä S. hispiduksen lehdet ja juuret kerättiin toukokuussa 2011 Krofromilta Atwima-Kwanwoman alueelta Ashantin alueelta, ja ne todensi Ghanan kasvitieteen laitoksen tohtori A. Asase. Kasvien Voucher-näytteet on talletettu Ghanan Herbariumiin, Ghanan yliopistoon, Ghanaan. Eri kasvinosia kuivattiin huoneenlämmössä (28-30°C) kaksi viikkoa. Kuivatuista kasvinosista jauhettiin sitten jauhemaista materiaalia. Ellei toisin mainita, kaikki kemikaalit ostettiin Sigmalta (Deisenhofen, Saksa).

2.2. Uutteiden valmistus

kaksikymmentä grammaa jauhettua K. africana-lehteä lisättiin 300 mL 70-prosenttista metanolia ja uutettiin Ultra-Turrax T 50: llä (Janke & Kunkel, Labortenik, Saksa) jääjäähdytyksessä nopeudella 24000 rpm 3-5 minuutin ajan. Tuloksena oleva seos suodatettiin Whatmann-suodatinpaperilla nro 10. Pyöröhaihduttimella konsentroitiin supernatantti Alle 40°C ja kylmäkuivattiin. Menettely toistettiin kaikille jäljelle jääneille jauhetuille kasviaineksille (K. africana varren kuori, S. hispidus lehdet ja juuret). K. africana-kasvin lehtiuutteen (KAL) ja varren kuoriuutteen (KASB) sekä S. hispidus-kasvin lehtiuutteen (SHL) ja juuriuutteen (SHR) saanto oli 4,3, 12,8, 13,0 ja 11,4 painoprosenttia (suhteessa kuivattuun ainekseen).

2.3. Alustava Fytokemiallinen seulonta

Fytokemiallinen seulonta suoritettiin K. africanan metanolin lehti-ja varsikuoriuutteille sekä S. hispidus selvittää läsnäolo tärkkelys, tanniinit, glykosidit (sapogenetic, antraseeni, ja syanogenetic), flavonoideja, steroideja, ja alkaloideja . Tanniinipitoisuus määritettiin Glasl – menetelmällä ja referenssiyhdisteenä käytettiin pyrogallolia (Merck, Darmstadt, Saksa, puhtaus 99,5%, HPLC).

2.4. HPLC otteiden Sormipaino

otteiden HPLC-sormipaino (KAL, KASB, SHL ja SHR) tehtiin Thermo Finnigan HPLC-järjestelmällä käyttäen Hypersil Gold C18-käänteisfaasikolonnia ( mm). Uutteiden pitoisuus oli 10 mg / mL. HPLC optimiolosuhteet: injektiotilavuus: 10 µL, Detektioaallonpituus: 254 nm, liikkuva faasi: metanoli: vesi / 50: 50 (isokraattinen tila), lämpötila: 22°C, pumpun paine: 28 MPa, Virtausnopeus: 1 mL/min ja käyttöaika: 10 min.

2.5. Antimicrobial Activity of Extracts

2.5.1. Mikrobilääkeherkkyystesti

uutteiden (KAL, KASB, SHL ja SHR) ja vertailulääkkeiden (kloramfenikoli ja klotrimatsoli (Sigma, Deisenhofen, Saksa) antimikrobiset vaikutukset määritettiin Agyaren ja hänen kollegoidensa kuvaamalla menetelmällä . Nutrient agar (Oxoid Limited, Yhdistynyt kuningaskunta) ja sabouraud agar (Oxoid Limited, Yhdistynyt kuningaskunta) – aineita käytettiin sekä antibakteeristen että antifungaalisten vaikutusten määrittämiseen. Sata mikrolitraa (106 pmy/mL) testiorganismeista (Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Bacillus subtilis NCTC 10073 ja kliininen sienilääke Candida albicans) käytettiin ravinteiden agar-levyjen siementämiseen. Jokaisesta levystä leikattiin neljä (4) yhtä kaukana olevaa, halkaisijaltaan 8 mm: n kuoppaa steriilillä korkkiporaajalla ja kaivot täytettiin erilaisilla dimetyylisulfoksidiin (DMSO) liuotetuilla uutteilla ja vertailulääkkeillä, joiden annettiin diffundoitua huoneenlämmössä (28-30°C) 1 tunnin ajan. Kasvun estovyöhykkeet mitattiin 24 tunnin inkubaation jälkeen 37°C: ssa (bakteereilla) ja 3 päivän kuluttua 30°C: ssa (sienillä). DMSO: n aktiivisuus määritettiin, eikä sillä todettu olevan vaikutusta testattaviin organismeihin.

2.5.2. Mikrodiluutiomenetelmä

uutteiden (KAL, KASB, SHL ja SHR) mikit testibakteereja vastaan määritettiin käyttäen agyare et al: n kuvaamaa muunnettua mikrodiluutiomenetelmää. ja Eloffin . Testiliuokset (100 mg/mL) uutteista valmistettiin DMSO: lla ja testiliuos (25-100 µL) laimennettiin sarjalaimennoksella 100 µg/mL ja 100 µL (106 pmy/mL) ravinneliemessä (Oxoid Limited, Yhdistynyt kuningaskunta) kasvatettuja testibakteereja lisättiin kuhunkin mikromuovikuoppaan. Peitettyjä mikromuoveja inkuboitiin 37°C: ssa 24 tunnin ajan. kasvun osoittamiseksi mikromuovikaivoihin lisättiin 30 µL veteen liuotettua 3-(4,5-dimetyylitiatsol-2-yyli)-2,5-difenyylitetratsoliumbromidia ja inkuboitiin 37°C: ssa 30 minuutin ajan. Testisieniaine (C. albicans) viljeltiin sabouraud dekstrose-liemessä (Oxoid Limited, Yhdistynyt kuningaskunta) ja inkuboitiin 3 päivän ajan 30°C: ssa.Kal -, KASB -, SHL-ja SHR-uutteiden MIC-arvot testisientä vastaan määritettiin National Committee for Clinical Laboratory Standards for filamentous funges-järjestön ohjeiden mukaisesti. Uutteiden vähimmäispitoisuudet testiorganismeja vastaan havaittiin niiden uutteiden vähimmäispitoisuuksina, joissa ei esiintynyt mikrobikasvua sen jälkeen, kun MTT lisättiin väliaineeseen ja inkuboitiin 37°C: ssa 20 minuutin ajan . Edellä mainitut kokeet toistettiin kolme kertaa.

2.6. Vapaiden radikaalien Raadonsaantiaktiivisuuden määrittäminen

uutteiden vapaiden radikaalien raadonsaantiaktiivisuus määritettiin Chizzolan ja hänen kollegoidensa menetelmällä käyttäen 1, 1-difenyyli-2-pikryylihydratsyyliä (DPPH). Valmistettiin DPPH-liuosta (0,1 mM) metanolissa ja 10 µL tätä liuosta lisättiin 100 µL metanoliuutteisiin yhdessä α-tokoferolin kanssa eri pitoisuuksina 96-kuoppaisissa mikrotiitterilevyissä. Levyjä ravistettiin 30 sekunnin ajan ja 30 minuutin kuluttua absorbanssiksi mitattiin 517 nm. Radikaalin haaskauksen estoprosentti ( % ) laskettiin seuraavan yhtälön avulla. Inhibitio, jossa on kontrollin absorbanssi, on näytteen absorbanssi 517 nm: ssä ja inhibitorinen pitoisuus, IC50 on määrä (µg/mL), joka vähentää absorbanssia 50%.

2.7. Evaluation of Wound Healing Properties (Excision Wound Model)

2. 7. 1. Koe-eläimiä

kolmekymmentäviisi (Sprague Dawley-naarasrotat) pidettiin ruostumattomasta teräksestä valmistetuissa häkeissä, ja niitä ruokittiin tavanomaisella kaupallisilla rotilla (gafco, Tema, Ghana), joille annettiin vettä Ad libitum ja joita pidettiin laboratorio-olosuhteissa (lämpötila 28-30°C, suhteellinen kosteus 60-70% ja normaali valon ja pimeyden kierto). Päivää ennen koetta rotat tuotiin laboratorioon ja totutettiin kokeelliseen käsittelyyn ja laitteeseen stressin ja uutuuden vaikutusten minimoimiseksi. Kaikki näissä tutkimuksissa käytetyt menetelmät ja tekniikat olivat National Institute of Health Guidelines for the Care and Use of Laboratory Animals-julkaisun (NIH, Department of Health Services publication No. 83-23, revised 1985) mukaisia. Tutkimuksen pöytäkirjat hyväksyi osaston eettinen komitea.

2.7.2. Poistohaava malli

Eläimet (Sprague Dawley-naarasrotat), joiden paino oli 115-120 g, nukutettiin ketamiinilla annoksella 120 mg painokiloa kohti ihon alle ennen haavojen syntymistä. Eläinten selkäturkki ajeltiin partakoneenterien avulla halkaisijaltaan noin 40 mm: n pyöreäksi ja ajellulle iholle hahmoteltiin odotettavissa oleva haavan alue. Alueet puhdistettiin 70-prosenttisella etanolilla ennen leikkaushaavojen syntymistä Bhakta et al: n muunnellun menetelmän mukaisesti. . Ihohaavoja luotiin pitkin merkintöjä käyttäen hammastettuja pihtejä, kirurgisia teriä ja teräväkärkisiä saksia. Kaikki haavat jätettiin auki ja eläimet jaettiin seitsemään (7) viiden eläimen ryhmään. Ensimmäistä ryhmää hoidettiin paikallisesti 1%: n hopeasulfadiatsiinivoiteella (Arytons Drugs, Ghana) viitelääkkeenä . Toinen ryhmä hoidettiin vesipitoisella voiteella (pelkkä kantaja-aine). Kolmas ryhmä jätettiin hoitamatta ja annettiin normaalin haavan paranemisen tapahtua. Neljä viimeistä ryhmää hoidettiin 7,5% W / w-uutevoiteilla (KAL, KASB, SHL ja SHR). Haavan hoito aloitettiin 2. päivänä haavan luomisen jälkeen. Uutteet ja vertailulääkkeet levitettiin haavoihin paikallisesti 24 tunnin ajan 24 päivän ajan. Hoidon aikana haava-alueista otettiin skaalattuja valokuvia (korkearesoluutioisella digitaalikameralla) millimetrin mittakaavan mittauksen rinnalla 48 tunnin välein haavan ensimmäisestä hoitopäivästä alkaen. Haava-alueet määritettiin joka toinen päivä 24.päivään asti.

2.8. Histopatologiset tutkimukset

hoitamattomien ja hoidettujen eläinten Haavakudosnäytteet otettiin parantumisprosessin aikana 14.päivänä. Poikkileikkauksen kokopaksuinen haavaarpi, jossa oli noin 6 mm paksuja pätkiä kustakin ryhmästä, kerättiin kokeen lopussa histopatologisten muutosten arvioimiseksi . Näytteet kiinnitettiin 10-prosenttiseen puskuroituun formaliiniin 24 tunnin ajan ja dehydratoitiin etanoli-ksyleeni-sarjan liuoksilla, käsiteltiin ja blokattiin parafiinilla 40-60°C: ssa ja sen jälkeen jaettiin 5-6 µm: n paksuisiin osiin. Kohdat värjättiin hematoksyliini-ja eosiinitahralla, Van Giesonin tahralla ja toluidiininsinitahralla. Hematoksyliinin ja eosin värjäämät kohdat ja Van Giesonin värjäämät kohdat tarkastettiin kollageenin laskeuman varalta. Toluidiininsinisiä värjättyjä osia käytettiin syöttösolujen värjäämiseen .

2.9. Tilastoanalyysiä

GraphPad Prism versiota 5.0 Windowsille (GraphPad Software, San Diego, CA, USA) käytettiin kaikissa tilastoanalyyseissä. Tiedot esitetään keskiarvona SEM () ja analysoidaan yksisuuntaisella ANOVALLA, jota seuraa dunnetin monivertailutesti. * , * * ja *** katsottiin tilastollisesti merkitseviksi kaikissa analyyseissä. Kaaviot piirrettiin käyttäen Sigma-juonta Windows-versiolle 11.0 (Systat Software Inc., Saksa).

3. Tulokset

3.1. Alustavassa Fytokemikaaliseulonnassa

sekä K. africanan että S. hispiduksen lehti-ja varsikuoressa havaittiin tanniineja (vaihtelevia määriä), steroideja, saponiineja, sapogeneettisiä glykosideja ja hiilihydraatteja, kun taas näiden kahden kasvin lehdet sisältävät flavonoideja. Alkaloideja oli sekä S. hispiduksen lehdissä että juurissa (Taulukko 1).

3.2. Uutteiden HPLC-Sormipainatus

uutteiden (KAL, KASB, SHL ja SHR) HPLC-sormipainatus määritettiin eri uutteiden suurimpien piikkien (yhdisteiden) tunnistamista ja laadunvalvontaa varten (Kuvat 1, 2, 3 ja 4).

Kuva 1

K. africanan metanolilehtiuutteen (KAL) HPLC-kromatogrammi (sormipainatus) 254 nm: ssä.

Figure 2

HPLC chromatogram (finger-printing) of methanol stem bark extract (KASB) of K. africana at 254 nm.

Figure 3

HPLC chromatogram (finger-printing) of methanol leaf extract (SHL) of S. hispidus at 254 nm.

Kuva 4

S. hispiduksen metanolijuuriuutteen (SHR) HPLC-kromatogrammi (sormipainatus) 254 nm: ssä.

3.3. Antimikrobinen aktiivisuus

metanoliuutteiden (KAL, KASB, SHL ja SHR) todettiin tehoavan testattaviin organismeihin (E. coli, P. aeruginosa, S. aureus, B. subtilis ja C. albicans), joiden keskimääräiset inhibitioalueet vaihtelivat, ja P. aeruginosan todettiin olevan vähemmän herkkä uutteille. K: n pienimmät inhibitoriset pitoisuusalueet. africana-uutteet (KAL ja KASB) testiorganismeja vastaan olivat 2,25-7,5 mg/mL ja S. hispidus-uutteet (SHL ja SHR) 2,5-10 mg/mL (Taulukko 2). Agar-diffuusiomenetelmässä kaikilla uutteilla (KAL, KASB, SHL ja SHR), joiden pitoisuudet ovat 20 ja 50 mg/mL, on suurempi inhibitioalue testattaviin organismeihin verrattuna kuin pitoisuus 10 mg/mL (Taulukko 3).

3.4. Antioksidanttiaktiivisuus

kaikissa uutteissa oli jonkin verran antioksidanttisia ominaisuuksia, sillä KASB: n IC50 oli alhaisin ja KAL: n vapaa huuhteluaktiivisuus alhaisin (Taulukko 4 ja kuva 5).

kuva 5

K. africanan metanolilehtiuutteen (KAL) ja varren kuoriuutteen (KASB) sekä S. africanan lehtiuutteen (SHL) ja juuriuutteen (SHR) vapaiden radikaalien keräämisaktiivisuus hispidus ja-tokoferoli (viite antioksidanttina) määritettynä DPPH-menetelmällä.

3.5. Haavan Paranemisaktiivisuus (haavan Sulkeutumisaste)

kaikki käsitellyt uutteet ( KAL, KASB, SHL ja SHR) vaikuttivat merkittävästi haavan sulkeutumisnopeuteen verrattuna käsittelemättömään ja pelkästään kantaja-aineeseen, jossa KAL: lla ja SHL: llä oli merkittäviä vaikutuksia (ja resp.) haavan sulkeutumisnopeudesta 7.-15. päivänä hoidon jälkeen (kuvat 6 ja 8, taulukko 5) ja KASB: stä ja SHR: stä, joilla on merkittäviä samankaltaisia vaikutuksia haavan paranemiseen 10. -18. päivänä hoidon jälkeen (kuvat 7 ja 9, taulukko 5).

3.6. Histopatologiset tutkimukset

histologiset tutkimukset osoittivat fibroblastien runsasta proliferaatiota, johon liittyi vaihtelevaa fibroosia. Näytteissä oli 70-80% tiheää ja paksuuntunutta fibroosia uutteilla hoidetuissa haavoissa, kun taas 1% w/w hopeasulfadiatsiinivoiteessa (positiivinen kontrolli) oli 60-70% fibroosia. Fibroblastisoluja ja kollageenisäikeitä oli näkyvästi vertailuryhmissä ja uutteissa verrattuna käsittelemättömään kontrolliin. Oli runsaasti angiogeneesiä, tehostettua kollagenaatiota ja reepithelialisaatiota, todisteita merkittävistä hoitovasteista uutteilla hoidettujen haavakudosten jatkuvan tulehduksen keskellä verrattuna käsittelemättömiin haavakudoksiin (Kuva 10).

(a)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)

Kuva 10

kantaja-aineella käsiteltyjen haavakudosten, uutteiden ja käsittelemättömien kudosten histopatologinen tutkimus. Edustavat kuvat värjätty hematoksyliini ja Eosin tahra, Van Gieson tahra ja toluidiininsininen tahra käsitelty päivittäin 7,5% W/w voiteet metanol leaf extract (KAL) of K. africana (a), metanol stem bark extract (KASB) of K. africana (b), metanol leaf extract (SHL) cream of S. hispidus (c) ja metanol root extract (SHR) cream of S. hispidus (d) ja käsittelemätön haava kudosten (e) 14 päivän ajan. (a) KAL: runsas angiogeneesi, tehostettu kollagenaatio ja reepithelialization, joka ilmenee merkittävistä hoitovasteista jatkuvan tulehduksen keskellä. B) KASB: tuntuva angiogeneesi ja granulaatiokudoksen muodostuminen, jossa on merkkejä apoptoosista kudoskuolion jälkeen, jossa on vähemmän voimakasta kollagenaatiota ja reepithelialisaatiota. (C) SHL: tuntuvasti voimakas kollagenation ja reepithelialization. (D) SHR: jossa on huomattava granulaatiokudoksen muodostuminen, joka ilmenee kudoksen täyttönä. Myös kollageenointi ja ihosolujen uudelleensyntyminen olivat vakavia verrattuna käsittelemättömään haavakudokseen. (e) käsittelemättömät haavakudokset, joissa on jatkuva tulehdus ja epätäydellinen haava-alue; todisteita huonosta granulaatiokudoksen muodostuksesta, kollageenoinnista ja reepithelialisaatiosta, mutta runsaasta angiogeneesistä. (F) hoidetuilla haavakudoksilla, joissa oli 1% w/w hopeasulfadiatsiinia, todettiin nopea granulaatiokudoksen muodostuminen, kollagenaatio, ilmeinen haavan paranemisen tehostuminen ja epätasainen keratiininen haavan pinta ilmeinen reepithelialisaatio. Legend: AG: angiogenesis, CO: collagenation, DS: dead space following necrosis, GR: granulaatiokudos following apoptosis, IC: epätäydellinen haava-alue, IF: tulehtunut kudos, KE: keratiiniepiteeli, ND: nekroottinen roskia jatkuva tulehdus. RE: reepithelialisaatio.

4. Keskustelu

tässä tutkimuksessa kuvataan joitakin trooppisten kasvien K. africana ja S. hispidus lehtien, varren kuoren ja juuriuutteiden biologisia ominaisuuksia, kuten antimikrobisia ja haavoja parantavia ominaisuuksia. Kasvituotteet ovat potentiaalisia haavanparannusaineita ja suurelta osin edullisia, koska ne ovat laajalti saatavilla, vähemmän tai ei lainkaan sivuvaikutuksia ja tehokkuutta raakavalmisteina . S: N kuivattujen lehtien ja juuren fytokemiallinen seulonta. hispidus paljasti, että lehdissä oli tanniineja, alkaloideja, saponiineja, steroideja, hiilihydraatteja ja sapogeneettisiä glykosideja sekä flavonoideja. K. africanan kuivatuista lehdistä ja varren kuoresta puuttui alkaloideja ja molemmissa kasviaineksissa oli saponiineja, steroideja, hiilihydraatteja ja sapogeneettisiä glykosideja. Flavonoideja löytyi myös K. africanan lehdistä (Taulukko 1). Uutteiden (KAL, KASB, SHL ja SHR) HPLC-sormipainatus kehitettiin myös tunnistamista ja laadunvalvontaa varten (Kuvat 1, 2, 3 ja 4).

kasvin fytokemikaalit määrittävät usein ihmisen kehon fysiologisen vaikutuksen. Antioksidantit ovat aineita, jotka suojaavat soluja vapaina radikaaleina tunnettujen molekyylien aiheuttamilta vaurioilta. Uutteiden antioksidanttiaktiivisuus johtuu pääasiassa fenoliyhdisteiden, kuten flavonoidien, fenolihappojen, tanniinien ja fenoliditerpeenien läsnäolosta . Siksi uutteiden ainesosat, kuten tanniinit ja flavonoidit, ovat suuressa roolissa haavan paranemisessa estämällä ja suojaamalla oksidatiivisia vaurioita vapailta radikaaleilta .

K. africanan lehtien ja varren kuoren sekä S. hispiduksen lehtien ja juurten metanoliuutteiden antimikrobinen vaikutus määritettiin mukilevyagaridiffuusiomenetelmällä neljästä bakteerista, kahdesta Grampositiivisesta bakteerista (S. aureus ja B. subtilis), kahdesta Gramnegatiivisesta bakteerista (E. coli ja P. aeruginosa) ja yhdestä sienestä (C. albicans). Näiden kahden kasvin metanoliuutteet olivat aktiivisia kaikkia testattuja organismeja vastaan (Taulukko 2). Pienin inhiboiva pitoisuus (MIC) määritettiin raakauutteen pienimpänä pitoisuutena, jossa Kal: n mikrobikasvua ja mikrofoneja S. aureus -, B. subtilis -, E. coli -, P. aeruginosa-ja C. albicans-bakteereita vastaan ei ollut 5, 2, 5, 5, 7, 5 ja 2, 5 mg/mL ja KASB: n pitoisuus oli 5, 5, 5, 5, 7, 5 ja 2, 25 mg/mL. Myös SHL-ja SHR-uutteilla oli samanlainen antimikrobinen vaikutus, ja niiden Mikrofonit olivat samaa luokkaa kuin K. africana-uutteilla (taulukot 2 ja 3). Otteiden (KAL, KASB, SHL ja SHR) antibakteerinen ja antifungaalinen vaikutus oli samanlainen kuin Kigelia pinnatan (Jacq) lehtiuutteiden osoittama aktiivisuus.) DC. raportoinut Binutu et al. . Uutteiden antimikrobisen vaikutuksen voidaan katsoa johtuvan fenolisten ainesosien, kuten tanniinien ja muiden polyfenolien, supistavasta luonteesta .

patogeenisten bakteerien, kuten Staphylococcus -, Streptococcus-ja Pseudomonas-bakteerien, asuttaminen haavoissa voi normaalisti johtaa haavojen tulehdukseen, joka voi johtaa kroonisten haavojen muodostumiseen . Tästä tutkimuksesta selvisi, että K. africana-ja S. hispidus-uutteilla oli voimakas ja laajakirjoinen antimikrobinen vaikutus näitä taudinaiheuttajia vastaan. Koska suurin osa testiorganismeihin kohdistuvista uutteiden mikrofoneista oli alle 8 mg/mL, voitiin Fabryn ja hänen kollegoidensa mukaan päätellä, että uutteilla oli voimakas antimikrobinen vaikutus . Mikrobilääkkeiden tai uutteiden paikallinen käyttö on tehokas hoitomenetelmä mikrobipopulaatioiden tuhoamiseksi, koska aktiiviset aineet ovat käytettävissä haavakohdassa, mikä johtaa haavan paranemiseen .

uutteiden (KAL, KASB, SHL ja SHR) IC50-arvot olivat vastaavasti 1,5, 56,9, 13,7, 49,8 ja 45,1 µg/mL (Taulukko 4). Nämä tulokset viittaavat siihen, että näillä uutteilla on antioksidanttisia ominaisuuksia S. hispidus-uutteita lukuun ottamatta, ja tämä voisi helpottaa haavojen paranemista . Tämä saattaa viitata siihen, että S. hispidus haavaa parantavana aineena ei välttämättä johdu sen antioksidanttiaktiivisuudesta, vaan se perustuu muihin biologisiin vaikutuksiin. K. africanan lehtien ja varren kaarnan IC50-arvot muistuttivat gathirwan ja hänen kollegoidensa havaintoja .

uutteilla (KAL, KASB, SHL ja SHR) oli merkittävä vaikutus haavan sulkeutumisnopeuteen perustuen haavojen eri hoitopäiviin uutteilla verrattuna käsittelemättömiin. SHL-uutteella oli merkittävä tehostettu vaikutus haavan paranemisprosessiin 11. päivänä (), jossa haavan prosentuaalinen sulkeminen oli 90.13 (Kuva 8) verrattuna hoitamattomiin haavoihin. SHL: n vaikutus haavoihin oli samanlainen kuin SHR-uutteella, jossa haavan supistumisnopeus lisääntyi merkittävästi päivänä 11 () ja haavan sulkeutumisaste oli 91,72% (Kuva 9). KASB-uutteen vaikutus (kuva 7) oli samanlainen kuin SHL-ja SHR-uutteiden. KAL-uute kuitenkin paransi haavan supistumista merkittävästi päivästä 7 (), jolloin haavan sulkeutumisaste oli 85,1% (kuva 6) 17.päivään. Haavakudosten histopatologisessa tutkimuksessa havaittiin runsas angiogeneesi, lisääntynyt kollagenaatio ja reepitelialisaatio verrattuna hoitamattomiin haavoihin (Kuva 10). Nämä uutteiden biologiset toiminnot voivat johtua fibroblastien ja keratinosyyttien lisääntymisestä ja patogeenisten bakteerien onnistuneesta vähentämisestä uutteilla, ja nämä voivat johtua uutteiden fytokemikaalisista ainesosista.

vaikutukset, joita havaittiin vain kermalla hoidetuissa haavoissa ja hoitamattomissa haavoissa, eivät olleet tilastollisesti merkitseviä verrattuna uutteisiin tai hopeasulfadiatsiinilla (viite) hoidettuihin haavoihin. Tämä voi myös viitata siihen, että vesipitoisen voiteen komponentit eivät häirinneet uutteiden toimintaa, minkä vuoksi uutteiden tehostuneet vaikutukset voivat johtua yksinomaan näissä uutteissa esiintyvistä bioaktiivisista periaatteista. Uutteiden haavan paranemisvaikutukset voivat johtua niissä esiintyvistä erilaisista fytokemikaalisista ainesosista. Tanniinit kuten proantosyanidiinit ja muut tanniinit kuten parkkihappo, geraniini ja furosiini tiedetään helpottavan haavan paranemista . Uutteiden todettiin sisältävän flavonoideja ja saponiineja, ja näiden sekundaarimetaboliittien on todettu parantavan haavan paranemista ja siten uutteiden parantuneet haavan paranemisvaikutukset voivat johtua niiden fytokemikaalisista ainesosista.

edellä esitetyt havainnot voivat tukea väitteitä, joiden mukaan kasviuutteilla käsitellyt haavat paranevat nopeammin ja paremmin kuin käsittelemättömät haavat, ja näiden kasvien käyttöä mikrobitulehdusten hoidossa. Näistä farmakologisista ominaisuuksista vastaavien bioaktiivisten yhdisteiden eristäminen ja karakterisointi on kuitenkin suoritettava.

5. Päätelmä

K. africanan metanolilehti ja varren kuori ja S. hispiduksen metanolilehti ja juuriuutteet näytteillä oleva antioksidantti, mikrobilääkereseptorit, joiden MIC-arvot ovat 2, 25-7, 5 mg/mL ja 2, 5-10 mg/mL, testiorganismeja vastaan, parantuneet haavan paranemisominaisuudet ja nämä farmakologiset ominaisuudet voivat oikeuttaa näiden kasvien lääkinnällisen käytön mikrobiologisten infektioiden ja haavojen hoidossa. Bioaktiivisuus ohjattu fraktiointi ja biologisista toiminnoista vastaavien bioaktiivisten yhdisteiden eristäminen tehtäisiin.

eturistiriidat

kirjoittajat ilmoittavat, ettei heillä ole eturistiriitoja.

kiitokset

kirjoittajat haluavat kiittää Thomas Ansahia Ghanan Knustin farmakologian laitokselta teknisestä avusta ja Nana Yaw Atefahia kasvien keräämisestä. He myöskin tunnustivat Toht. Paul Ossei patologian laitokselta, Komfo Anokye Teaching Hospital, Kumasi, Ghana hänen panoksestaan haavakudosten patologiseen arviointiin.