KinExA Technology-Sapidyne

(Huomautus: seuraavassa kuvauksessa määritysmuoto on lamauttaa ligandi vapaan reseptorin mittaamiseksi näytteessä. Vastaavasti reseptori voidaan immobilisoida vapaan ligandin mittaamiseksi näytteessä käytetyistä materiaaleista riippuen.)
vapaan reseptorin mittaus suoritetaan altistamalla näyteseos hetkeksi kiinteälle faasille, jossa ligandi immobilisoituu. Altistusaika on kriittinen, koska kun näytteen vuorovaikutusaika kiinteään faasiin pidetään melko lyhyenä, tuloksena on tilanne, jossa ainoa merkittävä sitoutuminen kiinteään faasiin on vapaasta reseptorista. Kineettinen Poissulkemistesti on vastakohta kilpailumääritykselle, jossa tasapainotettu liuos on kosketuksissa kiinteään faasiin niin kauan, että kiinteä faasi ligandi kilpailee liuoksesta.
Kinexan etuna on se, että kaapatun reseptorin signaali edustaa vain sitä konsentraatiota, joka liuoksessa on vapaa. Reseptorin tasapainokonsentraation tunteminen mahdollistaa Sitoutumisvakioiden määrittämisen reversiibelillä Sitoutumissivulla kuvatulla tavalla.
kaupallisesti käytettävissä välineissä KinExA-määritysten suorittamiseen (Sapidynen KinExA 4000, 3200 ja 3100) käytetään pientä hiukkaspatsasta, jonka läpi näyte ja muut reagenssit johdetaan. Minkä tahansa näytteen osan kosketusaika kiinteän faasin kanssa on sitten läpikulku kolonnin läpi, ja sitä voidaan säädellä valitulla virtausnopeudella (noin 50 millisekunnista noin sekuntiin).

järjestelmät, joissa on nM-alueen sideaine tai tiukempi, ovat kineettisessä poissulkumääritystilassa (KinExA-tilassa). Heikompia sideaineita voidaan edelleen mitata, mutta ne voivat vaatia erityistä huolellisuutta, jotta näyte ei häiriintyisi mittauksesta. KinExA soveltuu erityisen hyvin affiniteetin ja kinetiikan mittaamiseen ja toimii myös parannettuna immunomääritysalustana. Alla on tarkempi selvitys KinExA-mittauksista.

Vastaa

Sähköpostiosoitettasi ei julkaista.