Knockin-hiiri määrittelee eläinmallin, jossa kiinnostava geenisekvenssi muutetaan yksi yhdestä-substituutiolla transgeenin kanssa tai lisäämällä siihen geenisekvenssejä, joita ei löydy lokuksesta.
transgeenin lisääminen tapahtuu tyypillisesti tietyissä lokuksissa. Tämä ”kohdennettu” lähestymistapa aiheuttaa vähemmän häiriöitä transkriptio-aktiivinen geneettinen ympäristö.
Knockin-hiiret soveltuvat monenlaisiin käyttötarkoituksiin säätelyelementtien kuten promotorien tutkimisesta terapeuttisesti hyödyllisten Humanisoitujen vasta-aineiden tuottamiseen.
Knockin-hiirimalliratkaisumme
perinteisten Knockinien lisäksi, joissa endogeeniseen lokukseen lisätään kiinnostava geenisekvenssi, tarjoamme joukon yleisesti käytettyjä ratkaisuja:
- Quick Knockin™ (Rosa26 ja Hprt)
geeniekspression täysi hallinta kohdistamalla se parhaiten tutkituille salliville loci Rosa26: lle ja Hprt: lle.
- Pistemutaatio Knockin hiiri
vaikuttaa yhden tai useamman mutatoituneen nukleotidin tietyn proteiinin toimintaan (toiminnan lisääntyminen tai häviäminen)
- Reportterihiiri
seuraa geenitapahtumia, proteiinin toimintaa, lokalisointia ja solukauppaa
- Humanisoidut hiirimallit
korvaavat hiiren geenisekvenssin ihmisen vastaavalla
ehdollinen geeninsiirron tai substituutioiden aktivointi
kaikki Knockin mallit voivat kestää olosuhteet, jotka mahdollistavat geenin lisäyksen tai substituution aktivoitumisen: A) tietyissä solutyypeissä tietyssä kudoksessa, kun taas muissa solutyypeissä ja kudoksissa esiintyy muuntumaton, funktionaalinen geeniekspressio, ja/tai b) ajallisesti tiettynä ajankohtana alkio -, synnytyksen jälkeinen tai täysikasvuisissa eläimissä.
käytetään tyypillisesti kahta yleistä lähestymistapaa:
lox-STOP-lox
Cre-rekombinaasi tunnistaa rekombinaatioloxp: n lokuksen, joka aiheuttaa kahden loxP-alueen välisen STOP-sekvenssin poiston, jolloin voidaan transkriptioida kiinnostava mutaatiogeeni.
FLEx
sekä loxP että lox511 tunnistetaan Cre-rekombinaasilla, mutta lox511-alueet voivat rekombinoitua vain muiden lox511-alueiden kanssa, eivät loxP-alueiden.
kun DNA-sekvenssiä reunustavat vastakkaisissa orientaatioissa olevat lox-paikat, Cre kääntää sekvenssin paikkojen välillä. Jos DNA-sekvenssiä reunustavat samassa suunnassa olevat lox-paikat, Cre poistaa sekvenssin.
yhdistämällä lohkoalueiden tyyppi, lukumäärä ja suunta, jotka ympäröivät kiinnostavia geenejäsi, voidaan luoda tehokas FLEx-työkalu tieteellisiin erityistarpeisiisi.
kuten lox-STOP-lox-lähestymistavassa, Cre-rekombinaasin ilmentäminen tietyssä solutyypissä tai kudoksessa johtaa kudosspesifiseen mutatoituneeseen geeniekspressioon, ja induktoriaktivoidun Cre-rekombinaasin käyttö johtaa ajallisesti mutatoituneeseen geenin ekspressioon induktorin, kuten tamoksifeenin, läsnä ollessa.
