Lactobacillus fermentum TCUESC01: Uusi potentiaalinen Probioottikanta eristettynä Kaakaokäymisen aikana

Abstrakti

suoliston probioottibakteerien käyttö on hyvin yleistä elintarviketeollisuudessa, ja se on ollut pääosan tämän alan tutkimuksesta kohteena. Silti viime vuosina suoliston ulkopuolisten mikro-organismien tutkimus on lisääntynyt huomattavasti, koska niiden tiedetään olevan probiootteja. Niinpä tutkimme Lactobacillus fermentum (TCUESC01) – kantaa, joka on uutettu fermentoituvasta kaakaosta. Ensinnäkin tutkimme pH: n vaikutusta tämän kannan kasvuun ja tutkimme sen selviytymistä samanlaisissa olosuhteissa kuin ihmisen ruoansulatuskanavassa. L. fermentum TCUESC01 osoitti vastustuskykyä ihmisen mahaa ja suolistoa jäljitteleville olosuhteille ja kasvoi hyvin pH 5: n ja pH 7: n välillä. Seuraavaksi altistimme L. fermentum TCUESC01: n varastoitavaksi 4°C: ssa maitoliuoksessa ja huomasimme, että se säilyi hyvin 28 päivää. Lopuksi mittasimme tämän kannan alttiuden lukuisille antibiooteille ja sen taipumuksen autoaggregoitua. L. fermentum TCUESC01 osoitti merkittävää autoaggregaatiota sekä alttiutta suurimmalle osalle tutkituista antibiooteista. Kaiken kaikkiaan havaintomme tukevat tämän suolen ulkopuolisen bakteerin mahdollista käyttöä ravinnon probioottina.

1. Johdanto

uusien probioottien etsimistä motivoi tieto siitä, että jokaisella mikro-organismikannalla on erilaisia ominaisuuksia ja niillä voi olla ainutlaatuisia vaikutuksia ihmisten terveyteen. Historiallisesti uskottiin, että probioottituotteiden maitohappobakteerit oli hankittava ihmiseltä isännän spesifisyyden vuoksi . Fermentoiduista laktoosia sisältävistä elintarvikkeista tai fermentoiduista vihanneksista eristetyillä suoliston ulkopuolisilla mikro-organismeilla on kuitenkin myös lupaavia probioottisia vaikutuksia . Laboratoriomme alustavat todisteet osoittavat, että Lactobacillus-kannoilla, jotka on saatu korkealaatuisen kaakaon käymisestä, on probioottisia ominaisuuksia: ne vähentävät histologisia vaurioita, vähentävät tulehdussytokiinien systeemistä pitoisuutta ja lisäävät seerumin IgA-tasoja koliitin in vivo kokeellisessa mallissa . Näiden kantojen mahdollinen käyttö kaupallisissa tuotteissa riippuu kuitenkin kansainvälisten järjestöjen suosittelemista testisarjoista. Yhdistyneiden Kansakuntien elintarvike-ja maatalousjärjestön (FAO) ja Maailman terveysjärjestön (WHO) mukaan mahdolliset probioottikannat olisi arvioitava niiden toiminnallisten ja teknisten ominaisuuksien perusteella, mukaan lukien niiden vastustuskyky ruuansulatuskanavan kauttakuljetuksen aikana ja niiden säilyvyys varastoinnin aikana . Siksi arvioimme Lactobacillus fermentum-kannan tcuesc01 toiminnallisia ominaisuuksia ja turvallisuutta, joka eristettiin korkealaatuisen kaakaon käymisen aikana.

2. Materiaalit ja menetelmät

2.1. Mikro-organismit ja kasvuolosuhteet

Lactobacillus fermentum TCUESC01-kanta (liittymisnumero KU244478, GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/KU244478)) viljeltiin lactobacilli Mr-liemessä (1% peptonia, 0,8% lihauutetta, 0,4% hiivauutetta, 2% glykoosia, 0,5% natriumasetaattia, 0,2% dikaliumvetyfosfaattia, 0,02% magnesiumsulfaattiheptahydraattia, 0,02%.005% mangaanisulfaattitetrahydraattia ja 0, 02% sitruunahappotriammoniumsuolaa) (HIMEDIA®, Intia) 18 tunnin ajan 37°C: ssa ja varastoituna -80°C: ssa 10% maitoliuokseen (Molico®, Brasilia), joka sisältää 30% glyserolia.

2.2. Kasvua ja elinkelpoisuutta koskevat analyysit vaihtelevalla pH−arvolla

Mr−liemiliuokset, joiden pH on pH 2, pH 3, pH 4, pH 5, pH 6, pH 7, pH 8 ja pH 9, valmistettiin lisäämällä 1 mol·L-1 suolahappoa tai 1 mol·L-1 natriumhydroksidia. Ennen koetta L. fermentum TCUESC01: tä viljeltiin 18 tunnin ajan ja sen jälkeen laimennettiin suolaliuoksella (0.85% natriumkloridia) optiseen tiheyteen (OD) 0, 3 mitattuna 600 nm: ssä (OD600 = 0, 3). Kokeet tehtiin 96-kuoppaisilla mikromuoveilla (Costar®), joissa 180 µL MRS: ää kussakin pH: ssa inokuloitiin 20 µL aktiiviviljelyllä tai suolaliuoksella kontrollina. Mikrotiitterilevyä inkuboitiin 37°C: ssa ja OD 600 nm: ssä määritettiin tunneittain 10 tunnin ajan spektrofotometrillä (Molecular Devices®, Versamax tunable microplate reader). Samanaikaisesti näytteet otettiin tunnin välein kustakin pH: sta, pinnoitettiin rouva agarilla ja inkuboitiin anaerobisissa olosuhteissa 37°C: ssa solujen elinkelpoisuuden testaamiseksi.

2.3. In Vitro sietokyky ruoansulatuskanavan sairauksille

bakteereita viljeltiin 37°C: ssa yön yli 40 mL: ssa MRS-lientä, pestiin suolaliuoksessa ja inokuloitiin 20 mL: aan 10-prosenttista maitoliuosta. Maidon käymisen annettiin jatkua, kunnes pH oli 4,5, jolloin bakteerit laskettiin (PMY·mL−1) sarjalaimennuksella ja pinnoituksella MRS agarilla. Lisäksi tehtiin sarjalaimennos suolaliuoksessa (pH 2,5) pepsiinillä (3 g/L), minkä jälkeen inkuboitiin 37°C: ssa 1,5 tunnin ajan. Bakteerit pestiin kahdella sentrifugointijaksolla (5000 ×g/10 min) ja suspendoitiin suolaliuokseen, minkä jälkeen ne suspendoitiin uudelleen 20 mL: aan 1-prosenttista sian sapea (pH 8,0) (Merck®, Saksa) ja inkuboitiin 37°C: ssa 45 minuutin ajan. Bakteerimäärät (PMY * mL-1) määritettiin pinnoittamalla Mrs agarin bakteeriliuos anaerobisissa olosuhteissa 37°C: ssa 48 tunnin ajan jokaisen inkubaatiovaiheen jälkeen.

2.4. Säilyminen kylmäsäilytyksessä Hapatetussa maidossa

L. fermentum-kanta TCUESC01 viljeltiin Mrs-liemessä ja korjattiin sentrifugoimalla (5000 ×g/10 min). Tämän jälkeen bakteerit pestiin sekoittamalla ne uudelleen suolaliuokseen ja uudelleen sentrifugoimalla. Viljelmät inokuloitiin steriiliin liuokseen, jossa oli 10% rasvatonta maitoa, joka oli hapotettu maitohapolla pH 4, 5: een (Synth®, Brasilia). Maitohappoliuos jäähdytettiin 4°C: ssa ja pesäkkeitä muodostavat yksiköt (PMY·mL-1) laskettiin sarjalaimennuksella ja pinnoituksella MRS agarilla 0, 7, 14, 21 ja 28 vuorokauden välein. Kannan elinkelpoisuus määritettiin suhteessa nollahetkeen, jolla katsottiin olevan 100-prosenttinen eloonjäämisaste.

2.5.

L. fermentum TCUESC01-bakteeria viljeltiin 20 mL: ssa Mrs-lientä yön yli 37°C: ssa.bakteeriselletti kerättiin ja suspendoitiin suolaliuokseen, jolloin OD oli 0, 3 600 nm: ssä (OD600 = 0, 3). L. fermentum TCUESC01: n kapasiteetti autoaggregaatioon testattiin inkuboimalla suspensiota 37°C: ssa ja OD: tä valvottiin tunneittain 5 tunnin ajan. aggregaatioprosentti () laskettiin seuraavasti: missä on alkuperäinen optinen tiheys nollahetkellä ja on optinen tiheys mittaushetkellä. Tulokset olivat keskiarvot plus / miinus keskihajonnat kolmesta kokeesta.

2.6. Antibioottien herkkyyskoe

L. fermentum TCUESC01 kasvatettiin 18 tunnin ajan MRS-liemessä 37°C: ssa ja laimennettiin 0,5: een McFarland-asteikolla suolaliuoksessa. Antibioottikiekot asetettiin Mueller-Hinton agar-levyille, joihin sitten inokuloitiin 100 µL aktiivista bakteerisuspensiota. Tämän jälkeen levyjä inkuboitiin anaerobisissa olosuhteissa 24 tunnin ajan 37°C: ssa. Levyjen ympärillä olevat inhibitioalueet mitattiin ja bakteerit luokiteltiin resistenteiksi (), kohtalaisen herkiksi (MS) tai herkiksi () taulukossa 1 esitettyjen standardien perusteella. Herkkyystestissä käytetyt antibioottilevyt olivat amoksisilliini (AMO, LABORCLIN®, Brasilia, 10 µg), siprofloksasiini (CIP, LABORCLIN, Brasilia, 5 µg), amikasiini (AMI, CECON®, Brasilia, 30 µg), atsitromysiini (AZI, CECON, Brasilia, 15 µg), amoksisilliini ja klavulaanihappo (AMC, SENSIFAR®, Brasilia, 30 µg), norfloksasiini (NOR, LABORCLIN, Brasilia, 10 µg), sulfonamidi (SUL newprov®, Brasilia, 300 µg), vankomysiini (Van, sensifar, Brasilia, 30 µg), streptomysiini (est, LABORCLIN, Brasilia, 10 µg), erytromysiini (eri, CECON, Brasilia, 15 µg), tetrasykliini (TET, SENSIFAR, Brasilia, 30 µg), imipeneemi (IPM, CECON, Brasilia, 10 µg), kefalotiini (CFL, LABORKLIINI, Brasilia, 30 µg), gentamisiini (GEN, CECON, Brasilia, 10 µg), kefotaksiimi (CTX, SENSIFAR, Brasilia, 30 µg), kotrimoksatsoli (trimetopriimi ja sulfametoksatsoli) (SUT, SENSIFAR, Brasilia, 25 µg), kloramfenikoli (hyytymät, SENSIFAR, Brasilia, 30 µg), klindamysiini (CLI, CECON, Brasilia, 2 µg), g-penisilliini (pen10, cecon, Brasilia, 10 µg) ja Kefoksitiini (CFO, laborclin, Brasilia, 30 µg).

2.7. Tilastolliset analyysit

keskiarvojen ja keskihajonnojen laskelmat, varianssin analyysit, Tukeyn Monivertailutestit ja kaikki tilastolliset analyysit tehtiin GraphPad® Prism 5.0-ohjelmistolla. Kaikki graafit tuotettiin myös GraphPad Prism 5.0-ohjelmalla.

3. Tulokset

3.1. PH: n vaikutus L. fermentum TCUESC01: n kasvuun ja elinkelpoisuuteen

L. fermentum TCUESC01 kykeni kasvamaan väliaineessa pH 5, pH 6 ja pH 7 (kuva 1). Kasvua ei kuitenkaan havaittu tämän pH-alueen ulkopuolella (Kuva 1).

(a)

(b)

(c)

(d)

(in)

(f)

(Fi)

(h)

(ja)

(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
(h)
(i)

Kuva 1

Lactobacillus fermentum TCUESC01: n kasvu 0-10 tunnin viljelmillä 37°C: n lämpötilassa eri pH: ssa: a) MRS: n kasvu ilman pH: n muuttamista (pH 6.52); b) MRS: n kasvu pH: n kanssa (pH 2); c) MRS: n kasvu pH: n kanssa (pH 3); d) MRS: n kasvu pH: n kanssa (pH 4); e) MRS: n kasvu pH: n kanssa (pH 5); f) MRS: n kasvu pH: n kanssa (pH 6); g) MRS-arvon kasvu pH 7: llä; h) Mrs-arvon kasvu pH 8: lla; i) Mrs-arvon kasvu pH 9: llä. Graafin jokainen piste kuvaa keskiarvoa ja keskihajontaa kolmesta kokeesta.

3.2. L. fermentum TCUESC01: n toleranssi ruoansulatuskanavaan in Vitro

L. fermentum TCUESC01: n toleranssi ruoansulatuskanavaan arvioitiin olosuhteissa, jotka oli suunniteltu jäljittelemään ihmisen ruoansulatuskanavaa (kuva 2). Bakteeriliuos kasvatettiin 10−prosenttisessa maitoliuoksessa pitoisuudeksi 8,7 × 108 pmy·mL-1. Annettuamme bakteerit liuokselle, joka sisälsi pepsiiniä pH 2,5: ssä 1,5 tunnin ajan mahanesteen simuloimiseksi, havaitsimme bakteeripitoisuuden tilastollisesti merkitsevän alenemisen () tasolle 1,23 × 108 PMY·mL−1. Kun bakteerit oli pesty suolaliuoksella, niille annettiin 45 minuutin ajan liuosta, jossa oli 1% sian sapea pH: ssa 8,0, suolistoympäristön simuloimiseksi. Tämän hoidon jälkeen havaitsimme noin 1 login vähenemisen bakteerimäärässä (3,6 × 107 PMY·mL−1). Bakteerimäärien väheneminen simuloidussa suolistomehussa inkubaation aikana ei ollut tilastollisesti merkityksetöntä.

kuva 2

Lactobacillus fermentum TCUESC01-bakteerin eloonjääminen simuloidun ruoansulatuskanavan läpi kulkemisen aikana. ”Fermentoitu maito ”maidon käymisen jälkeen;” simuloitu mahamehu ”sen jälkeen, kun se on siirretty suolaliuoksessa pH 2,5 + pepsiini;” simuloitu suolimehu ” härän sapessa 1%: n jälkeen. Jokainen piste kuvaajassa edustaa kolmen kokeen keskiarvoa ja standardipoikkeamaa. Tilastollisesti merkitsevä vähennys () suhteessa ” fermentoituun maitoon.”

3.3. L. fermentum TCUESC01-bakteerin eloonjääminen kaupallisissa säilytysolosuhteissa

niiden säilymisen arvioimiseksi varastoinnin aikana L. fermentum-bakteereita jäähdytettiin 4°C: ssa 28 päivän ajan muutoin steriilissä 10-prosenttisessa rasittamattomassa maidossa, joka happamoitiin maitohapolla pH 4.5: een (kuva 3). Bakteerikannan pitoisuus oli aluksi 3,6 × 109 PMY·mL−1, mutta 7 päivän varastoinnin jälkeen havaitsimme tilastollisesti merkittävän vähenemisen noin 1 log bakteerimäärässä. Päivästä 7 päivään 21 kasvu oli odottamatonta 4, 3 × 108 PMY·mL−1: stä 9, 0 × 108 PMY·mL−1: een. Päivään 28 mennessä bakteeripitoisuus oli laskenut 2,83 × 108 PMY·mL−1: een.

kuva 3

Lactobacillus fermentum TCUESC01-bakteerin eloonjääminen käyneessä maidossa 0-28 päivää 4°C: ssa.jokainen piste kuvaa kolmen kokeen keskiarvoa ja keskihajontaa. ”a”: tilastollisesti merkitsevä ero suhteessa päivään nolla ();” b”: tilastollisesti merkitsevä ero suhteessa päivään 14;”c”: tilastollisesti merkitsevä ero suhteessa päivään 21.

3.4. L. fermentum TCUESC01

bakteerit aggregoituivat enenevässä määrin vasta in vitro-viljelyn viidennen tunnin aikana, jolloin havaittiin enintään 70, 19 ± 1, 78% aggregaatiota (Kuva 4). Prosentuaalisen aggregaation tuntikorotukset olivat kuitenkin tilastollisesti merkittäviä vasta kokeen kolmanteen tuntiin () asti.

Kuva 4

Lactobacillus fermentum TCUESC01: n autoaggregaation prosenttiosuus arvioituna 1 .-5. viljelytunnilla Mrs-liemessä 37°C: ssa. ”a”: tilastollisesti merkitsevä ero suhteessa 1. koontituntiin; ”b”: tilastollisesti merkitsevä ero suhteessa 2. koontituntiin. Jokainen piste edustaa 3 kokeen keskiarvoa ja keskihajontaa.

3.5. L. fermentum TCUESC01-bakteerin herkkyys antibiooteille

tämän L. fermentum showed susceptibility to the majority of antibiotics tested (Table 2). The few exceptions were the fluoroquinolones norfloxacin and ciprofloxacin, the nucleic acid synthesis inhibitors sulfonamide and cotrimoxazole (sulfamethoxazole and trimethoprim), the cell wall synthesis inhibiting glycopeptide antibiotic vancomycin, and the cell wall synthesis inhibiting β-lactam cefoxitin. L. fermentum TCUESC01 oli herkkä amoksisilliinille, amoksisilliinille ja klavulaanihapolle, g-penisilliinille, β-laktaameille kefotaksiimille ja kefalotiinille, aminoglykosideille amikasiinille ja gentamysiinille, linkosamidiklindamysiinille, karbapeneemille, imipeneemille, makrolideille atsitromysiinille ja erytromysiinille, fenikolikloramfenikolille ja tetrasykliinille. Kanta oli myös kohtalaisen herkkä streptomysiinille.

4. Keskustelu

FAO: n laatimat ohjeet, joissa vahvistetaan tarve analysoida bakteerien toiminnallisia ominaisuuksia ja turvallisuutta ennen kuin ehdotetaan bakteerien käyttöä elintarvikematriisissa . Alun perin arvioimme tämän Lactobacillus-lajin kykyä kasvaa ja selviytyä eri pH: ssa, ja vaikka se kasvoi vain pH 5: stä pH 7: ään, se pysyi elinkelpoisena 10 tunnin inkubaatioissa kaikilla arvioiduilla pH-tasoilla pH 2: ta lukuun ottamatta. Tutkimukset ovat osoittaneet suurta vaihtelua mahalaukun pH: ssa , kun mahalaukku on tyhjä, keskiarvojen ollessa alle pH 4 . Suolistoympäristö on vakaampi ja vaihtelee PH 6: n ja pH 8: n välillä riippuen arvioidusta suolen alueesta . Vaikka tämän maitohappobakteerin ei ole osoitettu kykenevän lisääntymään tai selviämään alle pH 2,5: n, se pysyy elinkelpoisena suoliston pH-alueella ja voi siksi toimia kyseisessä ympäristössä. Balkanin niemimaalta peräisin olevasta yleisesti kulutetusta käyneestä juomasta (Boza) eristetyt Lactobacillus plantarum (ST194BZ, ST414BZ ja ST664BZ), Lactobacillus rhamnosus (ST461BZ, ST462BZ) ja Lactobacillus paracasei (ST242BZ, ST284BZ) kasvoivat hyvin 10 tunnin inkubaation aikana pH 5: n ja pH 7: n välillä . L plantarum 423 eristetty durrajuomasta, L. plantarum 241, eristetty sian sykkyräsuolesta, L. curvatus DF38, eristetty salamista, ja Lactococcus lactis ssp. myös ihmisen emätineritteestä eristetty lactis HV219 osoitti vastaavissa kokeissa kasvua pH 5: n ja pH 6,5: n välillä . Kaiken kaikkiaan tuloksemme osoittavat, että L. fermentum TCUESC01: llä on kasvu-ja pH-resistenssi, joka on samanlainen kuin muilla mahdollisilla suoliston ulkopuolisilla probioottibakteereilla. Lisäksi kannan herkkyys alle 2,5: n pH-tasolle voidaan voittaa käyttämällä bakteereita suojaavia menetelmiä, kuten mikrokapselointia . Tuloksemme tukevat tämän kannan mahdollista käyttöä probioottisena lisäaineena elintarvikkeissa, joilla on selvästi happamia ominaisuuksia, esimerkiksi juustoissa, mehuissa ja fermentoidussa maidossa.

ruuansulatuskanavan ympäristö voi olla vihamielinen monille bakteereille; erilaiset stressitekijät, kuten happamuus, ruoansulatusentsyymit ja sappisuolat, voivat vaikuttaa negatiivisesti niiden selviytymiseen suolistoon siirtymisen aikana . Tässä tutkimuksessa Lactobacillus osoitti diskreetin kvantitatiivisen vähenemisen, mutta pysyi elinkelpoisena maha-ja suolisto-olosuhteissa ja vastusti sappipitoisuutta kolme kertaa enemmän kuin ihmisen suolistossa (0, 3%) . Samanlaisia tietoja, Kaushik et al. havaittu, että Lactobacillus plantarum Lp9 laski noin 0, 5 log alkuperäisestä pitoisuudestaan, kun se altistettiin vatsaa jäljitteleville olosuhteille (pH 2) ja 1 log, kun se altistettiin suolistoa jäljitteleville olosuhteille. Eräässä toisessa tutkimuksessa L. juustosta eristetty rhamnosus VT1 / 1 pieneni noin 2 log pitoisuudessa alhaisessa pH: ssa (pH 3) ja 1 log pitoisuudessa, kun sitä inkuboitiin pH 7: ssä 2%: n sappisuolojen läsnä ollessa . Tuloksemme viittaavat siihen, että L. fermentum voisi liikkua ruoansulatuskanavan läpi ja säilyä yli 107 PMY·g−1 (tai PMY·mL−1) – pitoisuuksina, mikä aiempien tutkimusten mukaan riittäisi vuorovaikutukseen ja/tai haittaamaan isäntäympäristöä .

elintarvikematriisi vaikuttaa myös mikro-organismien elinkelpoisuuteen niiden varastoinnin aikana . Testatessamme L. fermentum TCUESC01: n pitkän aikavälin selviytymistä hapatetussa maidossa havaitsimme bakteerimäärien vähenemisen, jota seurasi lievä nousu päivästä 7 päivään 21. Kasvu selittyy maitohappoliuoksen bakteeriaineenvaihdunnan jatkumisella, joskin alhaisesta lämpötilasta johtuvalla hidastumisella. Donkor ym. myös probioottibakteerien, erityisesti Lactobacillus delbrueckii ssp: n, kvantitatiivinen vaihtelu havaittiin säilytyksen aikana 4°C: ssa. bulgaricus Lb1466, jossa esiintyi 1 lokin kasvua kylmävarastoinnin päivästä 7 päivään 14. Toisessa tutkimuksessa fermentoituun maitoon varastoitu L. plantarum vähensi solukonpitoisuuttaan merkittävästi 1 log: lla noin 28 vuorokauden varastoinnin aikana 4°C: ssa . Vaikka L. fermentumin pitoisuus oli pienentynyt 1 log alkuperäisestä pitoisuudestaan viimeiseen varastointipäivään mennessä, sen pitoisuus oli keskimääräistä suurempi maitohappoliuoksen viimeinen käyttöpäivä . Samoin kansallisen Terveysvalvontaviraston (ANVISA) suositusten perusteella L. fermentum TCUESC01 voidaan lisätä käyneen maidon kaltaisiin elintarvikematriiseihin ja säilyä riittävinä pitoisuuksina tuotteen viimeiseen käyttöpäivään saakka .

mikro-organismit, joilla on kyky autoaggregoitua, pysyvät suolistossa pidempään ja niillä on siten paremmat yhteisvaikutukset epiteelisolujen ja isäntäimmuniteettijärjestelmän kanssa . L. fermentum TCUESC01-kanta osoitti kohonneen kyvyn autoaggregaatioon 5-h-kokeessamme. Tämä tulos on suurempi kuin beganović et al. , joka osoitti, että L. fermentum A8: n arvo oli 60,9 ± 3.91-prosenttinen autoaggregaatio 5 tunnin inkubaation jälkeen tai Bao et al. , joka osoitti, että 10 L. fermentum-kannalla on alle 28% autoaggregaatiota 20 tunnin inkubaation jälkeen. Tulosten perusteella L. fermentum aggregoituu hyvin ja nieltynä se todennäköisesti pystyy säilymään ihmisen suolistoympäristössä pitkiä aikoja.

lopuksi arvioimme tcuesc01: n herkkyyttä erilaisille antibiooteille. Tieto antibioottiherkkyydestä on äärimmäisen tärkeää, kun tarkastellaan kolmea tärkeää tekijää: Lactobacillus-bakteerin harvinainen tartuntamahdollisuus, resistenssigeenien horisontaalisen siirtymisen riski kotoperäisiin mikrobeihin sekä probioottisten bakteerien ja antibioottihoidon yhteys. L. fermentum TCUESC01: llä oli herkkyys suurimmalle osalle antibiooteista, lukuun ottamatta nukleiinihapposynteesin estäjiä (norfloksasiini, siprofloksasiini, sulfonamidi ja kotrimoksatsoli) ja kahden soluseinän synteesin estäjiä (vankomysiini ja kefoksiini). Nämä tulokset tukevat kirtzalidoun ym.julkaisemia tietoja. Lactobacillus ssp: n 74 kannasta. eristetty ihmisen ulosteesta, joita on 94.5% kannoista oli resistenttejä amikasiinille, kaikki olivat resistenttejä kanamysiinille ja siprofloksasiinille, 84, 7% kannoista oli resistenttejä vankomysiinille, 1, 6% kannoista oli resistenttejä kefalotiinille ja 8, 5% kannoista oli resistenttejä bacitrasiinille. Yleensä laktobasillit osoittavat luontaista resistenssiä kinoloneille, trimetopriimille, sulfonamideille, vankomysiinille ja suurimmalle osalle nukleiinihapon estäjistä, mutta ovat herkkiä proteiinisynteesin estäjille aminoglykosideja lukuun ottamatta . On syytä huomata, että tässä havaittu antibioottiresistenssi on sukuun luontaista, kuten julkaistuista tutkimuksista ilmenee, ja horisontaalinen geeninsiirto on siksi harvinaista. Yhteenvetona voidaan todeta, että L. fermentum TCUESC01: n resistenssiprofiili tukee mahdollisuutta käyttää yhdessä nukleiinihapposynteesiä estävien antibioottien kanssa.

5. Päätelmät

huolimatta siitä, että L. fermentum TCUESC01 on kaakaokäymisen aikana eristetty ruoansulatuskanavan ulkopuolinen kanta, sillä on vahva potentiaali probioottina käytettäväksi elintarvikkeissa. Se säilyy elinkelpoisena laajalla pH-spektrillä, minkä vuoksi se soveltuu käytettäväksi erityyppisissä elintarvikkeissa. Kun se säilytetään kylmässä maitotuotteessa, se säilyttää elinkelpoisuutensa yli tunnustettujen kansallisten ja kansainvälisten järjestöjen suosittelemien tasojen tuotteen viimeiseen käyttöpäivään asti. Olosuhteissa, jotka jäljittelevät ruoansulatuskanavan kauttakulkua, se säilyy myös probioottipotentiaalin ylläpitämiseen riittävissä määrin. Mitä sen ennustettu käyttäytymistä suolistossa, L. fermentum TCUESC01 osoittaa voimakas taipumus autoaggregate. Lopuksi tällä kannalla on antibioottiherkkyys-ja resistenssiprofiilit, jotka mahdollistavat sen käytön lääkehoitojen rinnalla. Yhdessä nämä ominaisuudet viittaavat siihen, että L. fermentum TCUESC01: llä on suuri potentiaali turvallisena probioottisena elintarvikelisäaineena.

eturistiriidat

kirjoittajat ilmoittavat, ettei heillä ole eturistiriitoja.

kiitokset

tätä tutkimusta tuettiin Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado da Bahian (FAPESB) myöntämällä apurahalla. Conselho de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) ja Coordinação de Aperfeiçoamento De personnels de niveau Superior (CAPES) tarjosivat tuottavuusapurahoja ja tutkijanapurahoja joillekin kirjailijoille.