qui interagissent avec l’hémoglobine se lient aux molécules d’hémoglobine, régulant ainsi l’absorption et la libération d’oxygène. Les médicaments thérapeutiques qui illicites cette réponse ont un potentiel d’abus important, car une oxygénation accrue des tissus améliore les performances sportives. Le nouvel effecteur allostérique myo-inositol trispyrophosphate (ITPP) est actuellement en essais cliniques de phase 1 pour des applications d’insuffisance cardiaque chronique et de cancer (sous la désignation OXY111A). Ce composé a déjà été utilisé pour améliorer les performances dans l’industrie des courses de chevaux et est facilement disponible en ligne sous forme de suppléments nutritionnels oraux et même de solutions injectables. L’ITPP figure sur la liste des substances interdites par l’Agence mondiale antidopage pour les athlètes humains; cependant, aucune méthode n’existe encore pour détecter cette substance dans l’urine humaine.
Pour cette raison, Görgens et al. (2014) ont entrepris de développer un protocole de dépistage et de confirmation simple et robuste du PPTI dans l’urine humaine.1 Comme le composé est de nature hautement polaire et ne convient donc pas à la chromatographie liquide en phase inversée, l’équipe s’est tournée vers la chromatographie liquide à interaction hydrophile (HILIC) et la spectrométrie de masse en tandem (MS/ MS) pour l’analyse de l’urine humaine dopée à l’ITPP et au standard interne ITPP-d6. Les chercheurs ont utilisé une pompe quaternaire Accela 1250, un échantillonneur automatique PAL et un spectromètre de masse quadripôle-Orbitrap hybride Q Exactive (tous Thermo Scientific) pour détecter les ions précurseurs pour l’ITPP et l’étalon interne (m/z 301.9065 et 304.9253, respectivement), ainsi que les ions du produit de diagnostic (m / z 78,9580, 158,9243 et 524,8550). Ils ont également développé un protocole de confirmation pour les échantillons d’urine suspects, en utilisant une méthode d’extraction en phase solide à échange d’anions faible (WAX-SPE).
L’équipe a déterminé que sa méthode est spécifique à la fois pour le dépistage et la confirmation, avec une bonne précision sur une plage de concentration de 50 à 500 ng / mL et de 5 à 125 ng / mL pour le dépistage et la confirmation, respectivement. Ils ont estimé les limites inférieures de détection à 15 ng / mL et 1 ng / mL, respectivement, pour le dépistage et la confirmation. Ils ne signalent également aucune diminution significative de la concentration d’ITPP dans la matrice urinaire après trois mois de stockage, conformément à la période de stockage obligatoire du contrôle antidopage.
Görgens et al. présenter leur méthode comme un protocole sensible et fiable pour le dépistage et la confirmation de la présence d’ITPP dans l’urine humaine. Ils notent que la séparation HILIQUE rend leur méthode de criblage rapide et rapide, avec pratiquement aucune préparation d’échantillon. L’option supplémentaire de confirmation par extraction en phase solide augmente la sensibilité et la polyvalence du protocole total. L’équipe postule en outre que la nature flexible de leur approche peut la rendre appropriée pour d’autres applications de criblage, en particulier celles avec des analytes hautement polaires.
Référence
1. Görgens, C., et coll. (2014, juillet) « Dépistage et confirmation du trispyrophosphate de myo-inositol (ITPP) dans l’urine humaine par chromatographie liquide à interaction hydrophile spectrométrie de masse haute résolution / haute précision à des fins de contrôle du dopage », Tests et analyses de drogues, doi: 10.1002 / dta.1700.
Auteur du message: Melissa J. Mayer. Melissa est une rédactrice indépendante spécialisée dans le journalisme scientifique. Elle possède une passion et une expérience dans les domaines de la protéomique, de la biologie cellulaire/ moléculaire, de la microbiologie, de la biochimie et de l’immunologie. Melissa est également bilingue (espagnol) et détient un certificat d’enseignement avec une approbation en biologie.
