La méthode de Knott modifiée est utilisée pour la concentration et l’identification des microfilaires, en particulier le ver du cœur Dirofilaria immitis. Il doit être différencié des microfilaires non pathogènes de Dipetalonema reconditum (« Dipet » en abrégé).
Un frottis sanguin direct peut être effectué en même temps. C’est un test rapide et sans concentration pour les microfilaires. Dirofilaria et Dipet se différencient par leur motif de motilité.
Ces tests doivent toujours être effectués chaque fois qu’un patient teste l’antigène du ver du cœur positif, ou qu’il y a une raison de soupçonner que le chien a actuellement ou a déjà eu une maladie du ver du cœur dans le passé. La présence de Dirofilaria aura un impact sur l’évolution et / ou le choix du traitement.
Le test de Knott peut être fait sans faire de frottis direct, mais ne jamais faire de frottis direct sans faire de test de Knott. Le test de Knott est un test plus sensible car il concentre les microfilaires de sorte qu’ils sont moins susceptibles d’être manqués lors de l’examen microscopique.
Procédure de frottis direct:
Simple. Placez une goutte de sang, de préférence à partir d’un tube EDTA ou d’une seringue héparinisée, au centre d’une lame. Déposez un couvercle sur le dessus et examinez au microscope sur une puissance 10x. Les dirofilaires auront un mouvement stationnaire et tordu; les dipétalonèmes présenteront un mouvement plus rapide et directionnel et tireront souvent directement hors du terrain.
Procédure pour la technique de Knott modifiée:
Assurez-vous de porter des gants pour vous protéger. À l’aide d’un tube à centrifuger de 15 ml, ajoutez environ 10 ml de formol à 2% (ce qui peut être acheté dans le commerce) à 1 ml de sang anticoagulé. Placez votre pouce sur le dessus du tube coiffé et inversez plusieurs fois pour bien mélanger. Centrifuger pendant 5 minutes à 1000 à 1500 tr/min.
Vous devriez pouvoir visualiser un bouchon blanchâtre au fond du tube après avoir tourné. Jeter le surnageant dans le contenant de déchets dangereux approprié.
À l’aide d’une longue pipette en verre ou en plastique, ajouter une goutte de nouvelle teinture au bleu de méthylène
Utiliser la pipette pour mélanger la tache avec le sédiment
Ajouter une goutte de ce mélange au centre d’une lame. Déposez une housse sur le dessus. Examinez au microscope sous une puissance 10x.
Contrairement au frottis direct, les microfilaires se présenteront comme stationnaires. La dirofilaire doit être distinguée du dipétalonème en fonction de la taille et de la forme. Utilisez le tableau suivant pour vous aider à différencier:
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Paramètre |
D. immitus |
D. reconditum |
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Longueur (microns) |
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Largeur (microns) |
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Forme (extrémité antérieure) |
Coniques |
blunt |
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Forme (corps) |
Droit |
courbé |
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Forme (queue) |
Droit |
Crochet à bouton |
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Nombre présent |
Peu à beaucoup |
peu |
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Mouvement |
Stationnaire |
Se déplace à travers la diapositive |
( Université Cornell)
Un autre test froid pour les microfilaires
Remplissez un tube de microhématocrite et faites tourner comme si vous faisiez un pcv.
Posez le tube sur une lame et placez-le sur la scène du microscope. Concentrez-vous sur le manteau buffy avec une puissance 10x – si un chien est positif au ver du cœur et a des microfilaires en circulation, vous pouvez voir les microfilaires se tortiller dans le manteau buffy!
