( Remarque: Dans la description suivante, le format du test consiste à immobiliser le ligand pour mesurer le récepteur libre dans l’échantillon. Inversement, le récepteur peut être immobilisé pour mesurer le ligand libre dans l’échantillon, en fonction des matériaux utilisés.)
La mesure du récepteur libre est réalisée en exposant brièvement le mélange d’échantillons à une phase solide sur laquelle le ligand est immobilisé. Le temps d’exposition est critique car le fait de maintenir assez court le temps d’interaction de l’échantillon avec la phase solide entraîne une situation où la seule liaison significative à la phase solide provient du récepteur libre. Le test d’exclusion cinétique contraste avec un test de compétition dans lequel la solution équilibrée est en contact avec la phase solide suffisamment longtemps pour que le ligand en phase solide soit en compétition pour le récepteur de la solution.
L’avantage de KinExA est que le signal du récepteur capturé ne représente que la concentration libre dans la solution. La connaissance de la concentration d’équilibre du récepteur permet de déterminer les constantes de liaison comme décrit sur la page de Liaison réversible.
Les instruments disponibles dans le commerce pour effectuer des dosages de KinExA (Kinexa 4000, 3200 et 3100 de Sapidyne) utilisent une petite colonne de particules à travers laquelle l’échantillon et d’autres réactifs sont passés. Le temps de contact de toute partie de l’échantillon avec la phase solide est alors le temps de transit dans la colonne et peut être contrôlé par le débit choisi (de l’ordre de 50 millisecondes à environ une seconde).
Les systèmes avec des liants de gamme nM ou plus serrés seront en mode de test d’exclusion cinétique (mode KinExA). Des liants plus faibles peuvent encore être mesurés mais peuvent nécessiter des précautions supplémentaires pour éviter la perturbation de l’échantillon par la mesure. KinExA est particulièrement bien adapté pour mesurer l’affinité et la cinétique et fonctionne également comme une plate-forme d’immunoessai améliorée. Une explication plus détaillée des mesures de KinExA est incluse ci-dessous.
