a fluoreszcencia technológiák évek óta az előnyben részesített módszer a kimutatáshoz, az analitikai érzékeléshez, az orvosi diagnosztikához, a biotechnológiához, a képalkotáshoz és a génexpresszióhoz. A fluoreszcencia elengedhetetlenné válik a nagy specifitású és érzékenységű molekuláris folyamatok tanulmányozásához különböző biológiai folyamatokon keresztül. A gyakorlati fluoreszcencia alkalmazások jelentős problémája a fluoreszcencia intenzitásának látszólagos nemlinearitása, amely a belső szűrőhatásokból, a minta szórásából és a biológiai minták belső komponenseinek abszorpciójából ered. A minta abszorpciója az elsődleges belső szűrőhatáshoz vezethet (I. típusú belső szűrőhatás), és ez az első tényező, amelyet figyelembe kell venni. Ez egy viszonylag egyszerű tényező, amelyet bármilyen fluoreszcencia kísérlet során ellenőrizni kell. Számos korábbi megközelítés azonban csak hozzávetőleges kísérleti módszereket adott a várt eredményektől való eltérés korrigálására. Ebben a részben az elsődleges belső szűrőhatás eredetét tárgyaljuk, és egy univerzális megközelítést mutatunk be a fluoreszcencia intenzitás jel korrigálására a teljes abszorpciós tartományban. Fontos, hogy közvetlen kísérleti eredményeket mutatunk be a korrekció működéséről. Az egyik figyelembe veszi az összes fluorofor abszorpciós spektrumának változó abszorpciójából adódó problémákat. Rhodamine 800-at használunk, és bemutatjuk, hogyan kell megfelelően korrigálni a gerjesztési spektrumokat széles hullámhossztartományban. A második egy inert abszorber hatása, amely csillapítja a gerjesztő sugár intenzitását, miközben áthalad a küvettán, ami a megfigyelt eredmények jelentős eltéréséhez vezet. Példaként bemutatjuk egy triptofán analóg, a NATA fluoreszcens kioltását akrilamiddal, és megmutatjuk, hogy a megfelelően korrigált eredmények mennyire hasonlítanak a kezdeti hibás eredményekhez. Az eljárás általános és sok más alkalmazásra vonatkozik, mint például a kvantum hozam meghatározása, a szövet/vér felszívódása vagy az akceptor abszorpciója a FRET kísérletekben.
