a Lactobacillus fermentum Tcuesc01 funkcionális profiljának értékelése: egy új potenciális probiotikus törzs, amelyet kakaó fermentáció során izoláltak

absztrakt

a bél probiotikus baktériumok használata nagyon gyakori az élelmiszeriparban, és ezen a területen a legtöbb kutatás középpontjában áll. Az utóbbi években azonban az extraintesztinális mikroorganizmusok kutatása jelentősen megnőtt probiotikumként ismert potenciáljuk miatt. Így megvizsgáltuk a kakaó erjesztéséből kivont Lactobacillus fermentum (TCUESC01) törzsét. Először megvizsgáltuk a pH hatását a törzs növekedésére, és tanulmányoztuk a túlélését az emberi gyomor-bélrendszerhez hasonló körülmények között. Az L. fermentum TCUESC01 ellenállónak bizonyult az emberi gyomrot és beleket utánzó körülményekkel szemben, és jól nőtt a pH 5 és pH 7 között. Ezután az L. fermentum TCUESC01-et tejoldatban 4CC-n tároltuk, és megállapítottuk, hogy 28 napig jól fennmaradt. Végül megmértük ennek a törzsnek az érzékenységét számos antibiotikumra és az autoaggregációra való hajlamát. L. a fermentum TCUESC01 szignifikáns autoaggregációt mutatott, valamint érzékenységet mutatott a vizsgált antibiotikumok többségére. Összességében eredményeink alátámasztják ennek az extraintesztinális baktériumnak a potenciális alkalmazását étrendi probiotikumként.

1. Bevezetés

az új probiotikumok keresését az a tudás motiválja, hogy a mikroorganizmusok minden törzse különböző tulajdonságokkal rendelkezik, és egyedi hatással lehet az emberi egészségre. Történelmileg azt hitték, hogy a probiotikus termékekben lévő tejsavbaktériumokat a gazdaszervezet sajátosságai miatt emberekből kellett beszerezni . Az erjesztett laktóztartalmú élelmiszerekből vagy erjesztett zöldségekből izolált extraintesztinális mikroorganizmusok azonban ígéretes probiotikus hatásokat is mutatnak . Laboratóriumunk előzetes bizonyítékai azt mutatják, hogy a kiváló minőségű kakaó fermentációjából származó Lactobacillus törzsek probiotikus tulajdonságokkal rendelkeznek: csökkentik a szövettani károsodást, csökkentik a gyulladásos citokinek szisztémás koncentrációját, és növelik a szérum IgA szintjét a colitis in vivo kísérleti modelljében . Ezeknek a törzseknek a kereskedelmi termékekben való lehetséges felhasználása azonban a nemzetközi szervezetek által ajánlott tesztek sorozatától függ. Az ENSZ Élelmezési és Mezőgazdasági Szervezete (FAO) és az Egészségügyi Világszervezet (WHO) szerint a potenciális probiotikus törzseket funkcionális és technológiai jellemzőik alapján kell értékelni, beleértve a gyomor-bélrendszeri tranzit során fennálló rezisztenciájukat és a tárolás során fennálló stabilitásukat . Ezért értékeltük a kiváló minőségű kakaó erjesztése során izolált Lactobacillus fermentum tcuesc01 törzs funkcionális tulajdonságait és biztonságosságát.

2. Anyagok és módszerek

2.1. Mikroorganizmusok és növekedési feltételek

Lactobacillus fermentum TCUESC01 törzs (csatlakozási szám KU244478, GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/KU244478)) laktobacillus MRS húslevesben (1% pepton, 0,8% húskivonat, 0,4% élesztőkivonat, 2% glikóz, 0,5% nátrium-acetát, 0,2% dikálium-hidrogén-foszfát, 0,02% magnézium-szulfát-heptahidrát, 0.005% mangán-szulfát-tetrahidrát és 0,02% citromsav-triammónium-só) (HIMEDIA (HIMEDIA), India) 18 órán át 37 (67) C-on, és-80 (Molico) C-on tárolva 10% – os tejoldatban (Molico (Molico), Brazília), amely 30% glicerint tartalmaz.

2.2. A növekedés és életképesség analízise

változatos pH−érték mellett 2−es, 3-as, 4-es, 5-ös, 6-os, 7-es, 8-as és 9-es pH-értékű MRS táptalajoldatokat készítettünk 1 mól·l-1 sósav vagy 1 mól·L-1 nátrium-hidroxid hozzáadásával. A vizsgálat előtt az L. fermentum TCUESC01-et 18 órán át tenyésztettük, majd sóoldatban hígítottuk (0.85% – os nátrium-klorid) optikai sűrűségig (OD) 0,3, 600 nm-en mérve (OD600 = 0,3). A vizsgálatokat 96 lyukú mikrolemezeken végeztük (costar++), ahol minden pH-értéknél 180 ml Mrs-t oltottunk be 20 ml aktív tenyészettel vagy sóoldattal kontrollként. A mikrolemezt 37 600 nm-es hőmérsékleten inkubáltuk, az OD-t pedig 60 órán át óránként határoztuk meg spektrofotométerrel (molekuláris eszközök stb., Versamax hangolható mikrolemez olvasó). Ezzel párhuzamosan óránként mintákat vettünk minden pH-ból, Mrs-agar-ra bevonva, és anaerob körülmények között inkubáltuk 37 Kb C-on a sejtek életképességének tesztelésére.

2.3. In Vitro tolerancia gastrointestinalis állapotokra

a baktériumokat 37 6CC-on egy éjszakán át 40 mL MRS-húslevesben tenyésztettük, sóoldatban mostuk, és 20 mL 10% – os tejoldatba oltottuk. A tej fermentációját 4,5-es pH-érték eléréséig hagytuk folytatni, ekkor a baktériumokat (CFU·mL−1) sorozathígítással és MRS agar-ra való bevonással megszámoltuk. Ezenkívül sorozatos hígítást végeztünk sóoldatban (pH 2,5) pepszinnel (3 g/L), majd inkubálást végeztünk 37 6CC-on 1,5 órán keresztül. A baktériumokat két Centrifugálási ciklussal (5000 g/10 perc) megmossuk, majd sóoldatban reszuszpendáljuk, mielőtt 20 mL 1% – os sertés epébe reszuszpendáljuk 8,0 pH-n (Merck 6, Németország), és 37 6c-n inkubáljuk 45 percig. A baktériumszámot·CFU * mL−1) úgy határoztuk meg, hogy a baktériumoldatot MRS agar-ban anaerob körülmények között 37 Kb-on 48 órán át minden inkubációs fázis után.

2.4. Túlélés a savanyított tejben történő hideg tárolás során

az L. fermentum tcuesc01 törzset MRS húslevesben tenyésztettük, majd centrifugálással betakarítottuk (5000 g/10 perc). A baktériumokat ezután sóoldatban reszuszpendálással mossuk, majd centrifugálással ismét pelletáljuk. A tenyészeteket 10% – os zsírmentes tej steril oldatába oltottuk be, amelyet tejsavval 4,5 pH-ra savanyítottak (szintetizátor, Brazília). A tejsavoldatot hűtőben 4 6CC-on tartottuk, és a kolóniaképző egységeket (CFU·mL-1) 0, 7, 14, 21 és 28 napon belül MRS agar−ra történő sorozatos hígítással és bevonattal számoltuk. A törzs életképességét a nulla időponthoz viszonyítva határoztuk meg, amelyet 100% – os túlélésnek tekintettünk.

2.5. Autoaggregáció analízise

az L. fermentum TCUESC01-et 20 mL MRS-táptalajban tenyésztettük egy éjszakán át, 37 600 nm-en (OD600 = 0,3). Az L. fermentum tcuesc01 autoaggregációs kapacitását úgy vizsgáltuk, hogy a szuszpenziót inkubáltuk 37cc-n, és az OD-t óránként 5 órán keresztül monitoroztuk. a százalékos aggregációt () a következőképpen számítottuk ki: hol van a kezdeti optikai sűrűség a nulla időpontban, és az optikai sűrűség a mérés idején. A bemutatott eredmények az átlagok plusz / mínusz a szórások három kísérletből.

2.6. Antibiotikum-érzékenységi vizsgálat

az L. fermentum TCUESC01-et 18 órán át tenyésztettük MRS-húslevesben 37CC-n, majd a McFarland-skálán 0,5-re hígítottuk sóoldatban. Antibiotikum korongokat helyeztünk a Mueller-Hinton agar lemezekre, amelyeket ezután beoltottunk 100 db aktív baktériumszuszpenzióval. A lemezeket ezután anaerob körülmények között inkubáltuk 24 h nál nél 37 C. A lemezek körüli gátlási zónákat mértük, és a baktériumokat az 1.táblázatban ismertetett standardok alapján rezisztens (), mérsékelten érzékeny (MS) vagy érzékeny () kategóriába soroltuk. Az antibiotikum lemezeket használják az érzékenységi teszt volt amoxicillin (AMO, LABORCLIN®, Brazília, 10 µg), ciprofloxacint (CIP, LABORCLIN, Brazília, 5 µg), amikacin (AMI, CECON®, Brazília, 30 µg), az azitromicin (AZI, CECON, Brazília, 15 µg), amoxicillin and klavulánsav (AMC, SENSIFAR®, Brazília, 30 µg), norfloxacin (SEM, LABORCLIN, Brazília, 10 µg), szulfonamid (SUL, NEWPROV®, Brazília, 300 µg), vankomicin (VAN, SENSIFAR, Brazília, 30 µg), sztreptomicin (EST, LABORCLIN, Brazília, 10 µg), eritromicin (ERI, CECON, Brazília, 15 µg), tetraciklin (TET, SENSIFAR, Brazília, 30 µg), imipenem (IPM, CECON, Brazília, 10 µg), cefalotin (CFL, LABORCLIN, Brazília, 30 µg), gentamicin (GEN, CECON, Brazília, 10 µg), cefotaxime (CTX, SENSIFAR, Brazília, 30 µg), cotrimoxazole (ez szulfametoxazol) (SUT, SENSIFAR, Brazília, 25 µg), klóramfenikol (VÉRRÖGÖK, SENSIFAR, Brazília, 30 µg), clindamycin (CLI, CECON, Brazília, 2 µg), penicillin G (PEN10, CECON, Brazília, 10 µg), pedig cefoxitin (CFO, LABORCLIN, Brazília, 30 µg).

Antibiotic Amount on disc µg Zone of inhibition (mm)
MS
Amoxicillin and clavulanic acid 30 ≤18 19-20 ≥21
Amikacin 30 ≤15 16-17 ≥18
Amoxicillin 10 ≤13 14–16 ≥17
Azithromycin 15 ≤2 4 ≥8
Cefalotin 30 ≤14 15–17 ≥18
Cefotaxime 30 ≤14 15–22 ≥23
Cefoxitin 30 ≤14 15–17 ≥18
Ciprofloxacin 5 ≤13 14–18 ≥19
Clindamycin 2 ≤8 9–11 ≥12
Chloramphenicol 30 ≤13 14–17 ≥18
Cotrimoxazole 25 ≤10 11–15 ≥16
Erythromycin 15 ≤13 14–17 ≥18
Streptomycin 10 ≤11 12–14 ≥15
Gentamicin 10 ≤12 ≥13
Imipenem 10 ≤13 14-15 ≥16
Norfloxacin 10 ≤13 14–18 ≥19
Penicillin G 10 ≤19 20–27 ≥28
Sulfonamides 300 ≤12 13–16 ≥17
Tetracycline 30 ≤14 15–18 ≥19
Vancomycin 30 ≤14 15-16 ≥17
az egyes antibiotikumokra fogékonynak (), mérsékelten fogékonynak (MS) vagy rezisztensnek () tekintett baktériumok által mutatott gátlási átmérők tartományai láthatók .
1. táblázat
a specifikus antibiotikumok gátlási zónáinak értelmezésére vonatkozó szabványok.

2.7. Statisztikai elemzések

az átlagok és a szórások számítását, a varianciaanalízist, a Tukey többszörös összehasonlító tesztjeit és az összes statisztikai elemzést a GraphPad ++ Prism 5.0 szoftver segítségével végeztük. Az összes grafikont a GraphPad Prism 5.0 program segítségével is előállítottuk.

3. Eredmények

3.1. A pH hatása az L. fermentum TCUESC01 növekedésére és életképességére

az L. fermentum TCUESC01 képes volt 5, 6 és 7 pH-értékű táptalajon növekedni (1.ábra). Ezen a pH-tartományon kívül azonban nem figyeltek meg növekedést (1.ábra).

(a)
(a)
(b)
(b)
(c)
(c)
(d)
(d)
(ban ben)
(ban ben)
(f)
(f)
(g)
(hu)
(h)
(Ó)
(i)
(és)

(a)
(a)(b)
(b)(c)
(c)(d)
(d)(e)
(e)(f)
(f)(g)
(g)(h)
(h)(i)
(i)

1. ábra
a Lactobacillus fermentum TCUESC01 növekedése a tenyészetek 0 és 10 óra közötti időszakában 37cc-n különböző pH-n: a) az MRS növekedése a pH módosítása nélkül (pH 6,52); b) az MRS növekedése pH-val 2; c) az MRS növekedése pH-val 3; d) az MRS növekedése pH-val 4; e) az MRS növekedése pH-val 5; f) az MRS növekedése pH-val 6; g) az MRS növekedése 7 pH-val; h) az MRS növekedése 8 pH-val; i) az MRS növekedése 9 pH-val. A grafika minden pontja három kísérlet átlagát és szórását mutatja.

3.2. Az L. fermentum TCUESC01 toleranciája a gastrointestinalis állapotokkal szemben In Vitro

az L. fermentum TCUESC01 toleranciáját a gastrointestinalis átjárhatósággal szemben az emberi gyomor-bél traktus utánzására tervezett körülmények között értékeltük (2.ábra). A baktériumoldatot 8,7 608 cfu·mL-1 koncentrációra növesztettük 10% – os tejoldatban. Miután a baktériumokat 2,5 pH−n 1,5 órán át pepszint tartalmazó oldatba juttattuk a gyomornedv szimulálása céljából, a baktériumkoncentráció statisztikailag szignifikáns csökkenését () figyeltük meg 1,23 608 cfu·mL-1-re. Sóoldattal történő mosás után a baktériumokat 1% sertés epe oldatának vetettük alá 8,0 pH-n 45 percig, hogy szimuláljuk a bél környezetét. Ezt a kezelést követően körülbelül 1 log csökkenését figyeltük meg a baktériumszámban (3,6 607 cfu·mL−1). A baktériumok számának csökkenése a szimulált béllében történő inkubálás során statisztikailag nem volt jelentéktelen.

2. ábra
a Lactobacillus fermentum TCUESC01 túlélése a szimulált gyomor-bél traktuson való áthaladás során. “Erjesztett tej” a tej erjedése után; “szimulált gyomornedv” a sóoldatban való áthaladás után pH 2,5 + pepszin; “szimulált béllé” az ökör epében való áthaladás után 1%. A grafikon minden pontja három kísérlet átlagos és standard deviánsát mutatja. Statisztikailag szignifikáns csökkenés () az “erjesztett tejhez képest.”

3.3. Az L. fermentum TCUESC01 túlélése kereskedelmi tárolási körülmények között

a tárolás közbeni túlélésük értékeléséhez az L. fermentum baktériumokat hűtőben hűtöttük 4 kb 28 napig egy egyébként steril, 10% – os zsírmentes tejben, amelyet tejsavval 4,5 pH-ra savanyítottunk (3.ábra). A baktériumtörzs kezdetben 3,6 609 cfu·mL-1 koncentrációban volt, de 7 napos tárolás után statisztikailag szignifikáns, körülbelül 1 log csökkenést figyeltünk meg a baktériumok számában. A 7. naptól a 21.napig nem várt növekedés volt tapasztalható 4,3 608 CFU·mL−1−ről 9,0 608 CFU·mL-1-re. A 28. napra a baktériumkoncentráció 2,83 608 cfu·mL−1-re csökkent.

3. ábra
a Lactobacillus fermentum TCUESC01 túlélése erjesztett tejben 0 és 28 nap között, 4 C. a pontok három kísérlet átlagát és szórását jelentik. “a”: statisztikailag szignifikáns különbség a nulla Naphoz viszonyítva (); “b”: statisztikailag szignifikáns különbség a 14. Naphoz viszonyítva; “c”: statisztikailag szignifikáns különbség a 21. naphoz képest.

3.4. Az L. fermentum tcuesc01 autoaggregációja

a baktériumok egyre inkább aggregálódtak az in vitro tenyésztés ötödik órájáig, ekkor legfeljebb 70,19 6,78% aggregációt figyeltek meg (4.ábra). A százalékos aggregáció óránkénti növekedése azonban csak statisztikailag szignifikáns volt a kísérlet harmadik órájáig ().

4. ábra
a Lactobacillus fermentum tcuesc01 autoaggregációjának százalékos aránya a termesztés 1-5. órájában MRS húslevesben 37 C. A.”: statisztikailag szignifikáns különbség az aggregáció 1. órájához viszonyítva; “b”: statisztikailag szignifikáns különbség az aggregáció 2 .órájához viszonyítva,. Minden pont 3 kísérlet átlagát és szórását jelenti.

3.5. Az L. fermentum TCUESC01 érzékenysége antibiotikumokra

ez az L törzs. fermentum showed susceptibility to the majority of antibiotics tested (Table 2). The few exceptions were the fluoroquinolones norfloxacin and ciprofloxacin, the nucleic acid synthesis inhibitors sulfonamide and cotrimoxazole (sulfamethoxazole and trimethoprim), the cell wall synthesis inhibiting glycopeptide antibiotic vancomycin, and the cell wall synthesis inhibiting β-lactam cefoxitin. L. a fermentum TCUESC01 érzékeny volt az amoxicillinre, az amoxicillinre és a klavulánsavra, a penicillin G-re, a cefotaximra és a cefalotinra, az amikacin és a gentamicin aminoglikozidokra, a linkozamid klindamicinre, a karbapenem imipenemre, az azitromicin és az eritromicin makrolidokra, a fenikol klóramfenikolra és a tetraciklinre. A törzs mérsékelten érzékeny volt a sztreptomicinre is.

Antibiotic Zone of inhibition (mm) Characterization
Amikacin 19
Amoxicillin 47
Amoxicillin and clavulanic acid 43
Azithromycin 30
Cefalotin 23
Cefotaxime 35
Cefoxitin 12
Ciprofloxacin 0
Clindamycin 14
Chloramphenicol 30
Cotrimoxazole 0
Erythromycin 33
Streptomycin 13 MS
Gentamicin 15
Imipenem 57
Norfloxacin 0
Penicillin G 30
szulfonamidok 0
tetraciklin 20
Vancomycin 0
az átmérők jelennek meg. Az 1. táblázatban bemutatott szabványok alapján az L. fermentum TCUES01 mindegyik vizsgált antibiotikumra érzékeny (), Közepesen érzékeny (MS) vagy rezisztens ().
2. táblázat
az L. fermentum TCUESC01 antibiotikumokkal szembeni érzékenysége.

4. Vita

a FAO és a WHO által létrehozott iránymutatások megerősítik a baktériumok funkcionális tulajdonságainak és biztonságának elemzését, mielőtt javaslatot tesznek az élelmiszer-mátrixban való felhasználására . Kezdetben azt vizsgáltuk, hogy ez a Lactobacillus faj képes-e különböző pH-n növekedni és túlélni, és bár csak a pH 5-től a pH 7-ig terjedő tartományban növekedett, életképes maradt a 10 órás inkubációk során minden értékelt pH-szinten, a pH 2 kivételével. A vizsgálatok kimutatták a gyomor pH-jának széles variabilitását, amikor a gyomor üres, az átlagértékek alacsonyabbak, mint a pH 4 . A bél környezete stabilabb, és pH 6 és pH 8 között változik, az értékelt bélrégiótól függően . Ezért annak ellenére, hogy ez a Tejsavbaktérium nem mutatott szaporodási vagy túlélési képességet a pH 2,5 alatt, életképes marad a bél pH-tartományában, ezért képes lehet működni ebben a környezetben. Adatainkkal összhangban a Lactobacillus plantarum (ST194BZ, ST414BZ és ST664BZ), a Lactobacillus rhamnosus (ST461BZ, ST462BZ) és a Lactobacillus paracasei (ST242BZ, ST284BZ) a Balkán-félszigetről származó, gyakran fogyasztott erjesztett italból (Boza) izolálva jó növekedési rátát mutatott 10 óra inkubáció alatt a pH 5 és pH 7 között . L plantarum 423 cirokitalból izolálva, L. plantarum 241 sertés ileumból, L. curvatus df38 szalámiból és Lactococcus lactis ssp-ből izolálva. az emberi hüvelyváladékból izolált lactis HV219 hasonló kísérletekben pH 5 és pH 6,5 közötti növekedést mutatott . Összességében eredményeink azt mutatják, hogy az L. fermentum TCUESC01 növekedési és pH-rezisztenciája hasonló a többi potenciális extraintesztinális probiotikus baktériumhoz. Ezenkívül a törzs érzékenysége a 2,5-nél alacsonyabb pH-szintre leküzdhető a baktériumokat védő módszerek, például mikrokapszuláció alkalmazásával . Eredményeink alátámasztják ennek a törzsnek a probiotikus adalékanyagként való alkalmazását kifejezetten savas tulajdonságokkal rendelkező élelmiszerekben, például sajtokban, gyümölcslevekben és erjesztett tejben.

a gasztrointesztinális környezet számos baktérium számára ellenséges lehet; a különböző stresszorok, mint például a savasság, az emésztőenzimek és az epesók negatívan befolyásolhatják túlélésüket a bélbe való átjutás során . A Lactobacillus ebben a vizsgálatban diszkrét mennyiségi csökkenést mutatott, de életképes maradt gyomor-és bélrendszeri körülmények között, és ellenállt az epe koncentrációjának háromszor, mint az emberi bélben (0,3%) . Hasonló az adatainkhoz, Kaushik et al. megfigyelték, hogy a Lactobacillus plantarum Lp9 körülbelül 0,5 log-kal csökkent a kezdeti koncentrációjához képest, amikor a gyomrot utánzó állapotoknak (pH 2), és 1 log-nak voltak kitéve, amikor a beleket utánzó állapotoknak voltak kitéve. Egy másik tanulmányban, L. sajtból izolált rhamnosus VT1 / 1 alacsony pH-érték mellett (pH 3) körülbelül 2 log-koncentráció csökkenést mutatott, és 1 log-koncentráció csökkenést mutatott, ha pH-értéken 7-en inkubáltuk 2% epesó jelenlétében . Eredményeink azt sugallják, hogy az L. fermentum átjuthat a gyomor−bélrendszeren, és 107 CFU·g−1 (vagy CFU·mL-1) feletti koncentrációban képes túlélni, ami korábbi tanulmányok szerint elegendő lenne a gazdaszervezet környezetének kölcsönhatásához és/vagy megzavarásához .

az élelmiszer-mátrix szintén befolyásoló tényező a mikroorganizmusok életképességében tárolásuk során . Az L. fermentum TCUESC01 savanyított tejben való hosszú távú túlélésének tesztelése során megfigyeltük a baktériumok számának kezdeti csökkenését, amelyet enyhe növekedés követett a 7.naptól a 21. napig. Ez a növekedés a tejsavoldatban a baktériumok folyamatos anyagcseréjével magyarázható, bár az alacsony hőmérséklet miatt csökkentett sebességgel. Donkor et al. a probiotikus baktériumok mennyiségi variációját is megfigyelték a tárolás során 4CC, különösen a Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus Lb1466, amely 1 napló növekedését mutatta a hűtőház 7.napjától a 14. napig. Egy másik tanulmányban, az erjesztett tejben tárolt L. plantarum jelentősen csökkentette sejtkoncentrációját 1 log körülbelül 28 napos tárolás alatt 4 6CC . Bár az L. fermentum a tárolás utolsó napjáig 1 log csökkenést mutatott a kezdeti koncentrációjától, koncentrációja átlag felett volt a tejsavoldat lejárati idején . Hasonlóképpen, a Nemzeti Egészségügyi Felügyeleti ügynökség (ANVISA) ajánlásai alapján, L. a fermentum TCUESC01 az erjesztett tejhez hasonló élelmiszer-mátrixokba vezethető be, és megfelelő koncentrációban fennmaradhat a termék lejárati idejéig .

az autoaggregációra képes mikroorganizmusok hosszabb ideig maradnak a belekben, így jobb kölcsönhatásban vannak a hámsejtekkel és a gazdaszervezet immunrendszerével . Az L. fermentum TCUESC01 törzs megnövekedett autoaggregációs kapacitást mutatott 5-h kísérletünkben. Ez az eredmény magasabb, mint a Beganovi által jelentett. , aki bebizonyította, hogy az L. fermentum A8-nak 60,9 volt 3.91% autoaggregáció 5 óra inkubáció után,vagy a Bao et al. , aki 28%-nál kevesebb autoaggregációt mutatott 10 L. fermentum törzsnél 20 órás inkubáció után. Eredményeink alapján az L. fermentum jól aggregálódik, és ha lenyelik, valószínűleg hosszú ideig fennmaradhat az emberi bélkörnyezetben.

végül értékeltük a tcuesc01 érzékenységét különféle antibiotikumokra. Az antibiotikum-érzékenység ismerete rendkívül fontos, ha három fontos tényezőt veszünk figyelembe: a Lactobacillus fertőzés ritka lehetősége, a rezisztencia gének horizontális átvitelének kockázata a natív mikrobákra, valamint a probiotikus baktériumok és az antibiotikum-kezelés közötti kapcsolat. Az L. fermentum TCUESC01 érzékenységet mutatott az antibiotikumok többségére, kivéve a nukleinsavszintézis inhibitorokat (norfloxacin, ciprofloxacin, szulfonamid és kotrimoxazol) és két sejtfalszintézis inhibitort (vankomicin és cefoxin). Ezek az eredmények megerősítik a Kirtzalidou et al. a Lactobacillus ssp 74 törzsén. emberi ürülékből izolálva, ebből 94.A törzsek 5% – a rezisztens volt az amikacinra, mindegyik rezisztens volt a kanamicinre és a ciprofloxacinra, a törzsek 84,7% – a volt rezisztens a vankomicinre, 1,6% – a volt rezisztens a cefalotinra, és a törzsek 8,5% – a volt rezisztens a bacitracinra. Általában a laktobacillusok belső rezisztenciát mutatnak a kinolonokkal, a trimetoprimmel, a szulfonamidokkal, a vankomicinnel és a nukleinsav inhibitorok többségével szemben, miközben az aminoglikozidok kivételével érzékenyek a fehérjeszintézis inhibitorokra . Érdemes megjegyezni, hogy az itt megfigyelt antibiotikumokkal szembeni rezisztencia a nemzetségre jellemző, amint az a közzétett tanulmányokból kitűnik, ezért a horizontális géntranszfer nem gyakori. Összefoglalva, az L. fermentum tcuesc01 rezisztencia profilja támogatja a nukleinsavszintézis gátlásával működő antibiotikumokkal való együttes alkalmazás lehetőségét.

5. Következtetések

annak ellenére, hogy a kakaó erjedése során izolált extraintesztinális törzs, az L. fermentum TCUESC01 probiotikumként erős potenciált mutat az élelmiszerekben történő alkalmazásra. Széles pH-spektrumban életképes marad, ezért alkalmas a különböző típusú élelmiszerekbe való felvételre. Hűtött tejtermékben tárolva életképességét az elismert nemzeti és nemzetközi szervezetek által ajánlott szint felett tartja a termék lejárati idejéig. A gasztrointesztinális tranzitot utánzó körülmények között a probiotikus potenciál fenntartásához elegendő mennyiségben is fennmarad. A belekben megjósolt viselkedését tekintve az L. fermentum TCUESC01 erős hajlamot mutat az autoaggregációra. Végül ez a törzs antibiotikum-érzékenységet és rezisztencia-profilokat mutat, amelyek lehetővé teszik a gyógyszeres terápiák mellett történő alkalmazását. Ezek a jellemzők együttesen azt sugallják, hogy az L. fermentum TCUESC01 nagy potenciállal rendelkezik biztonságos probiotikus élelmiszer-adalékanyagként.

összeférhetetlenség

a szerzők kijelentik, hogy nincs összeférhetetlenségük.

Köszönetnyilvánítás

ezt a kutatást az Alapítvány (Fapesb) támogatásával támogatták. A Conselho de Desenvolvimento Cient (Cnpq) és a coordina (Aperfei) (coordina) de Aperfei (aperfei) de personnels de niveau superior (capes) produktivitást és diplomás ösztöndíjakat biztosított egyes szerzők számára.

Vélemény, hozzászólás?

Az e-mail-címet nem tesszük közzé.