a hemoglobinnal kölcsönhatásba lépő alloszterikus effektorok kötődnek a hemoglobin molekulákhoz, ezáltal szabályozzák az oxigén felvételét és felszabadulását. Terápiás gyógyszerek, amelyek tiltják ezt a választ, jelentős visszaélési potenciállal rendelkeznek, mivel a szövetek fokozott oxigénellátása javítja az atlétikai teljesítményt. Az új alloszterikus effektor, a myo-inozitol-triszpirofoszfát (ITPP) jelenleg az 1.fázisú klinikai vizsgálatokban vesz részt krónikus szívelégtelenség és rák esetén (OXY111A néven). Ez a vegyület már használják a teljesítmény növelése a lóverseny ipar és könnyen elérhető online formájában orális táplálék-kiegészítők és még injekciós megoldásokat. Az ITPP szerepel a Doppingellenes Világügynökség ‘ s tiltott anyagok listája az emberi sportolók számára; ennek az anyagnak az emberi vizeletben történő kimutatására azonban még nem létezik módszer.
ebből az okból, G Enterprgens et al. (2014) egy egyszerű, robusztus szűrési és megerősítő protokoll kidolgozását tűzte ki célul az ITPP számára az emberi vizeletben.1 Mivel a vegyület erősen poláros jellegű, és ezért nem alkalmas fordított fázisú folyadékkromatográfiára, a csapat hidrofil interakciós folyadékkromatográfiát (HILIC) és tandem tömegspektrometriát (MS/MS) alkalmazott az ITPP-vel és a belső itpp-d6 standarddal tüskés emberi vizelet elemzésére. A kutatók egy Accela 1250 kvaterner szivattyút, PAL autosamplert és Q Exactive hybrid quadrupole-Orbitrap tömegspektrométert (all Thermo Scientific) használtak az itpp és a belső standard (m/z 301.9065 és 304) prekurzor ionjainak kimutatására.9253, illetve), valamint a diagnosztikai termék ionok (m/z 78,9580, 158,9243, illetve 524,8550). Kidolgoztak egy megerősítő protokollt a gyanús vizeletmintákra is, gyenge anioncserélő szilárd fázisú extrakciós módszerrel (WAX-SPE).
a csapat megállapította, hogy módszerük mind a szűrésre, mind a megerősítésre specifikus, jó pontossággal az 50-500 ng/mL, illetve az 5-125 ng/mL koncentrációtartományban a szűrésre, illetve a megerősítésre. A kimutatás alsó határát 15 ng/mL-re, illetve 1 ng/mL-re becsülték a szűréshez és a megerősítéshez. Arról is beszámolnak, hogy az ITPP koncentrációja nem csökkent jelentősen a vizeletmátrixban három hónapos tárolás után, összhangban a kötelező doppingellenőrzési tárolási idővel.
G Enterprgens et al. mutassák be módszerüket érzékeny, megbízható protokollként a szűréshez és az ITPP jelenlétének megerősítéséhez az emberi vizeletben. Megjegyzik, hogy a HILIKUS elválasztás gyors és időhatékonyvá teszi szűrési módszerüket, gyakorlatilag nincs minta-előkészítés. A szilárd fázisú extrakcióval történő megerősítés további lehetősége növeli a teljes protokoll érzékenységét és sokoldalúságát. A csapat továbbá azt állítja, hogy megközelítésük rugalmas jellege alkalmassá teheti más szűrési alkalmazásokhoz, különösen az erősen poláros analitokkal rendelkezők számára.
hivatkozás
1. C. és mtsai. (2014, július)” myo-inozitol-triszpirofoszfát (ITPP) szűrése és megerősítése az emberi vizeletben hidrofil interakcióval folyadékkromatográfia nagy felbontású / nagy pontosságú tömegspektrometria doppingellenőrzési célokra ” Drug Testing and Analysis, doi: 10.1002/dta.1700.
Hozzászólás Szerzője: Melissa J. Mayer. Melissa szabadúszó író, aki a tudományos újságírásra szakosodott. Szenvedélye és tapasztalata van a proteomika, a sejt – /molekuláris biológia, a mikrobiológia, a biokémia és az immunológia területén. Melissa szintén kétnyelvű (spanyol), és biológiai jóváhagyással rendelkezik.
