KinExA technológia-Sapidyne

(Megjegyzés: A következő leírásban a vizsgálat formátuma a ligandum immobilizálása a mintában lévő szabad receptor mérésére. Ezzel szemben a receptor immobilizálható a mintában lévő szabad ligandum mérésére, a felhasznált anyagoktól függően.)
a szabad receptor mérését úgy végezzük, hogy a mintakeveréket rövid ideig egy szilárd fázisnak tesszük ki, amelyen a ligandum immobilizálódik. Az expozíciós idő kritikus, mert a minta kölcsönhatási idejének a szilárd fázishoz való elég rövid tartása olyan helyzetet eredményez,amikor az egyetlen jelentős kötődés a szilárd fázishoz a szabad receptor. A kinetikus kizárási vizsgálat ellentétben áll egy versenyvizsgálattal, amelyben az egyensúlyban lévő oldat elég hosszú ideig érintkezik a szilárd fázissal ahhoz, hogy a szilárd fázisú ligandum versenyezzen az oldatreceptorért.
a KinExA előnye, hogy a befogott receptorból származó jel csak az oldatban szabad koncentrációt képviseli. A receptor egyensúlyi koncentrációjának ismerete lehetővé teszi a kötési állandók meghatározását a reverzibilis kötési oldalon leírtak szerint.
a kereskedelmi forgalomban kapható kinexa-vizsgálatok elvégzésére szolgáló műszerek (Sapidyne KinExA 4000, 3200 és 3100) egy kis részecskeoszlopot használnak, amelyen keresztül a mintát és más reagenseket átvezetik. A minta bármely részének a szilárd fázissal való érintkezési ideje ekkor az oszlopon áthaladó tranzitidő, amelyet a választott áramlási sebességgel lehet szabályozni (körülbelül 50 milliszekundumtól körülbelül egy másodpercig).

nM tartományú kötőanyagokkal vagy szorosabbakkal rendelkező rendszerek kinetikus kizárási vizsgálati módban lesznek (KinExA mód). A gyengébb kötőanyagok továbbra is mérhetők, de különös gondosságot igényelhetnek a minta perturbációjának elkerülése érdekében a mérésből. A KinExA különösen alkalmas az affinitás és a kinetika mérésére, és továbbfejlesztett immunoassay platformként is működik. A KinExA mérések részletesebb magyarázata az alábbiakban található.

Vélemény, hozzászólás?

Az e-mail-címet nem tesszük közzé.