komplement C4 hiány és HLA Homozigozitás gyakori intraorális Herpes Simplex vírus 1-es típusú fertőzésben szenvedő betegeknél

absztrakt

három egymást követő, nyilvánvaló immunhiányos betegnél, akiknél gyakori intraorális herpes simplex 1-es típusú kiújulás volt, amely a herpes simplex vírusfertőzés ritka szövődménye, az A vagy B a C4 KOMPLEMENT komponens izotípusa és a Be homozigóta a vizsgált HLA antigénekre. A HLA homozigozitás kombinációja, amely a víruspeptidek T-sejt-felismerésének károsodásához vezethet, és a klasszikus KOMPLEMENT útvonal hiánya, amely veszélyeztetheti a vírus semlegesítését, súlyos és gyakori herpes simplex vírusfertőzésekre hajlamosíthat.

az 1.típusú herpes simplex vírus (HSV-1) fertőzés morbiditása elsősorban a HSV-1 periodikus reaktiválódásának képességéből fakad. A visszatérő herpes labialis a szeropozitív személyek 15-40% – ában fordul elő . Az immunkompetens személyeknek ritkán vannak intraorális elváltozásai. Azok közül, akik ezt teszik, 52% – uk visszatérő epizódokat tapasztal, amelyeket általában tévesen diagnosztizálnak aphthous stomatitis vagy erythema multiforme . A léziók elsősorban a kemény szájpadláson és az ínyen fordulnak elő, és hosszú távú antivirális profilaxissal hatékonyan kezelhetők.

a korai immunválasz hatékonysága a tiszta HSV-1-re nagymértékben változik . Úgy gondolják, hogy a kiújulási arányokban és az invazivitásban mutatkozó különbségek magyarázzák az IFN-xhamsterben és a specifikus antitesttermelésben mutatkozó eltéréseket, valamint a makrofágok vagy az NK-sejtek működésében mutatkozó eltéréseket. A HSV-1 komplementelkerülő molekulával rendelkezik, amely szinte teljesen blokkolja az alternatív KOMPLEMENT útvonalat és a terminális komplex aktivációt lokálisan . A vírus semlegesítése a gazdaszervezet által valószínűleg a klasszikus út antitest által kiváltott aktiválódásától függ. Ennek ellenére a komplement hiányok szerepe a HSV-fertőzésekben kevés figyelmet kapott .

1 éven belül 3 nem rokon, nem vérző házasságból származó beteget utaltak hozzánk kivételesen aktív intraorális herpesz miatt, nyilvánvaló immunhiány nélkül. Komplementfunkciókat és komplement faktor C4 és HLA géneket vizsgáltunk ebben a kis kaukázusi betegcsoportban. Az eredmények rámutatnak immunológiai jellemzők, amelyek hajlamosíthatnak az aktív intraorális HSV – 1 fertőzésre.

módszerek. Ennek a 3 nőbetegnek intraorális HSV-1 fertőzése volt, évente >10 ismétlődéssel, visszatérő herpeszes hólyagokkal, elsősorban a kemény szájpadlásban és az ínyben. A kiújulási arány állandó maradt vagy nőtt az idő múlásával (1.táblázat).

a vért heparint, EDTA-t (10 mM) tartalmazó csövekbe vagy antikoaguláns nélkül vették fel. A mintákat akkor vettük, amikor a betegek tünetmentesek voltak.

a HSV-1 és a HSV-2 elleni szérum antitesteket kereskedelmi EIA-kkal mértük (HSV-1 Elisa IgG és HSV-2 ELISA IgG; MRL diagnosztika). A HSV PCR, antigén kimutatására és izolálására szolgáló mintákat az újonnan lyukasztott intraorális vezikulumok bázisaiból vettük. HSV izolálást és típus – specifikus PCR analízist végeztünk . A HSV antigén kimutatására szolgáló mintákat a tamponokból citocentrifugációval állítottuk elő . A diákat poliklonális HSV nyúlellenes IgG-vel festettük, majd fluoreszcein izotiocianáttal jelölt nyúlellenes IgG—vel (Jackson ImmunoResearch Laboratories). A paraffinba ágyazott szövetmintákat hasonlóan festettük. Az IgG, IgA és IgM szinteket, valamint az IgG alosztályok koncentrációját nephelometriával, behringwerke poliklonális antitestekkel határozták meg.

a DNS-mintákat a pel-Freez (PF-ABC-SSP), egy Lambda (SSP ABDR) vagy INNO-Lipa (LiPA HLA-DRB1) kis és közepes allélfelbontású kereskedelmi készleteivel genotipizálták HLA-A,-B,-C és-DR-re. A komplement C4 allotípusokat elektroforetikusan határoztuk meg . Az izotípus hiányát a C4A és C4B gének izotípus-specifikus PCR-amplifikációjával igazolták .

a szérum C3 és C4 szinteket nephelometriával határozták meg poliklonális antitestek és behringwerke referenciaminták alkalmazásával. A klasszikus és az alternatív útvonal hemolitikus KOMPLEMENT aktivitását standardizált hemolízissel határoztuk meg a kötési helyről.

a perifériás vér mononukleáris sejtjeinek (pbmc) aktivitását timidin beépülésével mérték, miután a pbmc-t fitohemagglutininnel, concanavalin A-val és pokeweed mitogénnel stimulálták, és normálisnak találták (az adatok nem láthatók) .

eredmények. Minden betegnél >10 éves HSV-1 kiújulás volt (1.táblázat), amely 5-10 napig tartott, de hosszú távú orális valaciklovir-terápiával teljesen elnyomták. A tüneti enyhülés <24 h. a betegeknek több kicsi (1-3 mm átmérőjű) vezikulumuk volt az intraorális HSV fertőzésre jellemző helyeken (1.táblázat), de atipikus az intraorális erythema multiforme vagy aphthous stomatitis esetén. Az 1-es és 3-as betegeknél gyakran jelentkezett egyidejű tipikus herpes labialis (1. táblázat). A HSV-1 fertőzés gyakoribbá vált a terhesség alatt az 1.betegnél és a pubertás idején a 3. betegnél. Mindkettőnek a meningealis irritáció jelei voltak a nuchalis merevséggel és myalgiával, fotofóbiával és cselekvőképtelen fejfájással a herpeszes elváltozásokkal egyidejűleg. A CSF-ben nem észleltek megnövekedett fehérjeszintet vagy pleocytosist, és a HSV PCR-tesztje a CSF-ben negatív volt az 1.beteg esetében. Az 1.és 3. betegnél gyakori felső légúti fertőzések, az 1. betegnél pedig visszatérő sinusitis fordult elő.

a betegek nem rendelkeztek cytopeniával vagy HIV, hepatitis B vagy hepatitis C vírus elleni antitestekkel. A virológiai és immunológiai vizsgálatok eredményeit az 1.és 2. táblázat mutatja. Minden beteg szeropozitív volt a HSV-1-re. A 2. beteg szövettani diagnózisa tipikus HSV buborékfólia morfológián alapult, és HSV-specifikus immunfestéssel igazolták. Mindegyiküknek folyamatos intraorális HSV-1 fertőzése volt (1.táblázat), és csökkent a klasszikus KOMPLEMENT útvonal hemolitikus aktivitása és a szérum C4 szintje (1. táblázat). A C4 fenotipizálás a C4A (1 beteg) vagy a C4B (2 beteg) fehérje teljes hiányát mutatta. A betegek homozigóták voltak a HLA I. és II. osztályú allélokra (2.táblázat). A 2. betegnél, aki homozigóta volt az A1,B8,DR3 szempontjából, alacsony volt a szérum IgA szintje (0,47 g/L).

Vita. A 3 betegből álló kiválasztott csoportunkban mindegyik kivételesen aktív intraorális HSV-1 fertőzéssel rendelkezett, homozigóta volt a fő hisztokompatibilitási komplex (MHC) haplotípusuk szempontjából, és a klasszikus komplementút C4A vagy C4B fehérje teljes hiánya volt (2 .táblázat). A betegek tehát az MHC fehérjéiben finom zavarok kombinációjával rendelkeznek, amelyek veszélyeztethetik az immunvédelmet a HSV-1 súlyosbodása ellen az oropharynxben.

I. osztály—a korlátozott CD8+ T sejtek felelősek a HSV tisztításáért. A vedlés és a kiújulás változó aránya, valamint a korai immunválasz hatékonyságának változása a HSV immunelkerülő molekulái és a beteg immunválaszának komplex kölcsönhatásának eredménye . Valószínű, hogy a T-sejtek mellett az immunválasz gyorsan ható karjai hozzájárulnak a védelem e korai szakaszához.

nk, mononukleáris és CD4+ T sejtek, immunglobulinok, KOMPLEMENT faktorok és túlnyomórészt Th1 típusú citokinek találhatók a korai HSV elváltozásokban. Az első limfociták, amelyek HSV elváltozásokba vándorolnak, a CD4+ T-sejtek és az NK-sejtek, amelyek felelősek a lokálisan megnövekedett citokintermelésért. Az MHC I. osztályú HLA-A és-B lókuszok termékei peptideket tartalmaznak a citotoxikus T és NK T sejtekhez, a II.osztályú lókuszok termékei pedig a CD4+ T sejtekhez. A HSV-1 befolyásolhatja az antigén I. és II .osztályú MHC molekulák általi megjelenítését, és befolyásolhatja a CD8+ és CD4+ T-sejtek felismerését. Amint azt más vírusfertőzések is sugallják, a vírusos peptidek citotoxikus CD8+ T-sejtekké történő expresszióját a kiújulás korai szakaszában akadályozhatja a HLA homozigozitás, esetleg a betegek HLA antigén repertoárjának csökkent variabilitása révén, például a nyálkahártya hámsejtjein. Végül a citokintermelés hatásai leküzdik a HLA I. osztályú expresszió gátlását a HSV által, lehetővé téve a CD8+ T-sejtek számára a vírussal fertőzött sejtek tisztítását . Az MHC homozigozitást a betegség felgyorsult progressziójához kapcsolták vírusfertőzések . Tudomásunk szerint ez az első tanulmány, amely a HLA homozigozitás és a tüneti HSV kiújulások közötti összefüggésről számol be.

mind a B8, DR3 – és B35,Cw4-tartalmú MHC haplotípusok szerepet játszanak a rekrudeszcens HSV-betegségben, és azt sugallják, hogy a burkolt vírusok által okozott agresszív betegséghez vezetnek . Az A3,B35, A1,B8 és B15 antigéneket tartalmazó haplotípusok homozigóta formában fordulnak elő a finn populációban 0,8%, 0,3% és 2% gyakorisággal . A betegek haplotípusaiban közös a C4 deléció.

a C4 proteinnek 2 izotípusa van, C4A és C4B, amelyek génjei az MHC III. osztályú régióban vannak kódolva. Belső tiolészterkötéseik megszakadása után a C4A és a C4B fehérjék kovalensen kötődnek a célmolekulák amino-vagy hidroxilcsoportjaihoz, és alegységként működnek a klasszikus útvonal C3 konvertázában, a C4b2a – ban.a C4 komplex szerkezeti polimorfizmusa >40 fehérje allotípust ismer fel. A C4-hiányt szegmentális deléciók, duplikációk, génkonverziók vagy pontmutációk okozzák, amelyek “null” (Q0) allélokat eredményeznek. Ezek nagy gyakorisággal fordulnak elő. Az összes fajból származó személyek körülbelül 35% – ának hiányzik 1 A 4 C4A vagy C4B allélból . Az összes C4A és C4B hiány, azaz 2 null allél a megfelelő c4a vagy C4B génlókuszban a finn populáció 3% – ában, illetve 8% – ában fordul elő .

az intraorális herpesz prevalenciája nem ismert. Konzervatív becslésünk szerint < 0,5%. A finn populációban a HLA homozigozitás prevalenciája a 9 leggyakoribb haplotípus esetében 3%, az összes C4A vagy C4B hiány esetében pedig 11%. Mindezek együttes előfordulása tehát az lenne 1.65/100 000 fő, de a HLA haplotípusok és a C4 hiányosságok nem függetlenek, miközben kapcsolódnak egymáshoz. Annak valószínűsége, hogy 3 egymást követő intraorális herpeszes betegnél ezek kombinálódnak, minimális. Például 10 000 egymást követő kórházi beteg között poisson eloszlása szerint 3 egyező beteg megtalálásának valószínűsége 0,00064 lenne.

a specifikus antitestek és komplementerek együttesen hatnak a HSV közvetlen semlegesítésére és opszonizálására, valamint az antitest-függő celluláris citotoxicitás fokozására. Az immunitás ezen gyorsan ható karjainak elkerülése érdekében a HSV-1 specifikus fehérjéket kódol. Először is, az IgFc-kötő fehérjék gátolják az IgG aktivitást, és lehetővé teszik a vírus és a fertőzött sejtek számára, hogy elkerüljék az antitest támadást . Másodszor, a HSV-1 transzmembrán glikoprotein gC-1 védi a virionot és a HSV-fertőzött sejteket a komplement semlegesítéssel szemben, ezáltal elősegítve a helyi terjedést . Bár úgy tűnik, hogy a vírus képes megbirkózni az alternatív KOMPLEMENT útvonallal, úgy tűnik, hogy a gazdaszervezet rezisztenciája a klasszikus úttól függ. A HSV-1 lokális terjedésére és kiújulásának arányára jelentős hatást gyakorolhatnak a HSV-1 hiányosságai vagy az azt aktiváló antitestek.

összefoglalva, tanulmányunk azt sugallja, hogy a 2 C4 fehérje bármelyikének hiánya fontos lehet a krónikusan aktív HSV-1 betegségre való hajlam meghatározásában. Ezenkívül úgy tűnik, hogy a HLA homozigozitás is érzékenységi tényező. A kivételesen súlyos vírusfertőzésre való hajlamot tehát az immunrendszer több karjának finom hibáinak kombinációja szabhatja meg.