Gli effettori allosterici che interagiscono con l’emoglobina si legano alle molecole di emoglobina, regolando così l’assorbimento e il rilascio di ossigeno. I farmaci terapeutici che illecita questa risposta portano significativo potenziale di abuso, dal momento che una maggiore ossigenazione dei tessuti migliora le prestazioni atletiche. Il nuovo effettore allosterico myo-inositolo trispirofosfato (ITPP) è attualmente in studi clinici di fase 1 per applicazioni di insufficienza cardiaca cronica e cancro (sotto la designazione di OXY111A). Questo composto è già stato utilizzato per il miglioramento delle prestazioni nel settore delle corse di cavalli ed è facilmente disponibile online sotto forma di integratori alimentari orali e anche soluzioni iniettabili. ITPP è incluso nella lista proibita dell’Agenzia mondiale Antidoping di sostanze per atleti umani; tuttavia, non esiste ancora un metodo per rilevare questa sostanza nelle urine umane.
Per questo motivo, Görgens et al. (2014) ha deciso di sviluppare un protocollo di screening e conferma semplice e robusto per ITPP nelle urine umane.1 Poiché il composto è altamente polare in natura e quindi inadatto per la cromatografia liquida a fase inversa, il team si è rivolto alla cromatografia liquida a interazione idrofila (HILIC) e alla spettrometria di massa tandem (MS/MS) per l’analisi dell’urina umana a spillo con ITPP e ITPP-d6 standard interno. I ricercatori hanno utilizzato una pompa quaternaria Accela 1250, un autocampionatore PAL e uno spettrometro di massa quadrupolo-Orbitrap ibrido Q Exactive (all Thermo Scientific) per rilevare gli ioni precursori sia per ITPP che per lo standard interno (m/z 301.9065 e 304.9253, rispettivamente), così come gli ioni del prodotto diagnostico (m/z 78.9580, 158.9243 e 524.8550). Hanno anche sviluppato un protocollo di conferma per campioni di urina sospetti, utilizzando un metodo di estrazione in fase solida a scambio anionico debole (WAX-SPE).
Il team ha determinato che il loro metodo è specifico sia per lo screening che per la conferma, con una buona precisione su un intervallo di concentrazione di 50-500 ng/mL e 5-125 ng/mL per lo screening e la conferma, rispettivamente. Hanno stimato che i limiti inferiori di rilevazione sono 15 ng/mL e 1 ng / mL, rispettivamente, per lo screening e la conferma. Inoltre non riportano alcuna diminuzione significativa della concentrazione di ITPP all’interno della matrice urinaria dopo tre mesi di conservazione, in linea con il periodo di conservazione obbligatorio del controllo antidoping.
Görgens et al. presentano il loro metodo come un protocollo sensibile e affidabile per lo screening e la conferma della presenza di ITPP nelle urine umane. Notano che la separazione HILIC rende il loro metodo di screening veloce ed efficace nel tempo, praticamente senza preparazione del campione. L’opzione aggiuntiva di conferma tramite estrazione in fase solida aumenta la sensibilità e la versatilità del protocollo total. Il team ritiene inoltre che la natura flessibile del loro approccio possa renderlo adatto ad altre applicazioni di screening, in particolare quelle con analiti altamente polari.
Riferimento
1. Görgens, C., et al. (2014, luglio) “Screening e conferma di myo-inositolo trispirofosfato (ITPP) nell’urina umana mediante interazione idrofila cromatografia liquida spettrometria di massa ad alta risoluzione / alta precisione per scopi di controllo antidoping”, test e analisi antidroga, doi: 10.1002/dta.1700.
Autore del post: Melissa J. Mayer. Melissa è una scrittrice freelance specializzata in giornalismo scientifico. Possiede passione ed esperienza nei campi della proteomica, della biologia cellulare / molecolare, della microbiologia, della biochimica e dell’immunologia. Melissa è anche bilingue (spagnolo) e detiene un certificato di insegnamento con un avallo di biologia.
