Kastle Meyer e Hemastix reagenti sono presuntiva test comunemente usati forensi per la rilevazione di sangue, e la loro idoneità è stata rivista in numerose pubblicazioni. Tuttavia, gli studi fino ad oggi si sono concentrati sulla convalida di questi test sul solo sangue umano e nessun lavoro pubblicato ha esaminato la sensibilità, la specificità e l’effetto sull’analisi del DNA quando si utilizzano questi reagenti per testare presumibilmente il sangue animale. Lo scopo di questo studio era quello di convalidare i due reagenti per l’uso con sangue animale e confrontare le loro prestazioni al fine di scegliere il miglior test in base alle circostanze nelle indagini sulla criminalità della fauna selvatica.
La sensibilità, la specificità, la stabilità e la robustezza dei metodi sono stati valutati da esperimenti con diluizioni di sangue animale (da 1:4 a 1:65536) utilizzando test diretti e indiretti (rub), potenziali sostanze interferenti, fonti di sangue di diverse specie e sangue invecchiato. Sono stati studiati anche gli effetti dei due reagenti sulle successive analisi del DNA.
Durante i test diretti, Kastle Meyer ha mostrato una sensibilità più elevata, rilevando il sangue fino a una diluizione di 1:16.384, un ordine di grandezza inferiore a Hemastix. Tuttavia, durante il test del rub, Hemastix ha mostrato una sensibilità più elevata, rilevando sangue fino a una diluizione di 1:64 su materiali porosi, mentre Kastle Meyer è risultato positivo solo fino a una diluizione di 1:16. Inoltre, quando si utilizza lo stesso tampone per il test presuntivo e l’estrazione del DNA, il test Hemastix ha permesso l’amplificazione di una quantità sufficiente di DNA per l’identificazione delle specie al suo limite di sensibilità su materiali porosi (1:64) mentre Kastle Meyer ha inibito la maggior parte dell’amplificazione del DNA al suo limite meno sensibile di diluizione 1:16. D’altra parte, Hemastix ha mostrato una specificità molto più bassa, producendo risultati falsi positivi quando esposti a pomodoro, patata, ruggine, acido urico aviario, candeggina e marciume del lavandino, mentre Kastle Meyer ha prodotto solo una debole reazione positiva dalla patata. Entrambi i test hanno eseguito ugualmente bene rilevando sangue fresco di diverse specie animali. Il test di stabilità ha dato risultati comparabili tra i test ad eccezione delle macchie di sangue di pesce invecchiato, dove il test di Kastle Meyer ha funzionato male.
Grazie alla sua facilità d’uso, maggiore sensibilità e mancanza di interferenza con l’analisi del DNA a valle, e nonostante la sua ridotta specificità rispetto a Kastle Meyer, il metodo Hemastix è più appropriato per l’uso nelle indagini sulla criminalità della fauna selvatica. I risultati positivi sarebbero sempre confermati con l’analisi del DNA e la bassa interferenza del reagente consentirà l’uso di un singolo tampone per test presuntivi e campionamento del DNA.
