(Nota: Nella seguente descrizione il formato del test è quello di immobilizzare il ligando per misurare il recettore libero nel campione. Al contrario, il recettore può essere immobilizzato per misurare il ligando libero nel campione, a seconda dei materiali utilizzati.)
La misurazione del recettore libero viene eseguita esponendo brevemente la miscela del campione a una fase solida su cui il ligando è immobilizzato. Il tempo di esposizione è fondamentale perché mantenere il tempo di interazione del campione alla fase solida piuttosto breve si traduce in una situazione in cui l’unico legame significativo alla fase solida proviene dal recettore libero. Il test di esclusione cinetica è in contrasto con un test di concorrenza in cui la soluzione equilibrata è in contatto con la fase solida abbastanza a lungo perché il ligando in fase solida possa competere per il recettore della soluzione.
Il vantaggio di KinExA è che il segnale dal recettore catturato rappresenta solo la concentrazione che è libera nella soluzione. Conoscere la concentrazione di equilibrio del recettore consente la determinazione delle costanti di legame come descritto nella pagina di legame reversibile.
Gli strumenti disponibili in commercio per l’esecuzione dei saggi di KinExA (KinExA 4000, 3200 e 3100 di Sapidyne) utilizzano una piccola colonna di particelle attraverso la quale vengono fatti passare il campione e altri reagenti. Il tempo di contatto di qualsiasi porzione del campione con la fase solida è quindi il tempo di transito attraverso la colonna e può essere controllato dalla portata scelta (da circa 50 millisecondi a circa un secondo).
I sistemi con leganti gamma nM o più stretti saranno in modalità di dosaggio di esclusione cinetica (modalità KinExA). I leganti più deboli possono ancora essere misurati ma possono richiedere la cura supplementare per evitare la perturbazione del campione dalla misura. KinExA è particolarmente adatto per misurare l’affinità e la cinetica e funziona anche come una piattaforma di dosaggio immunologico migliorata. Una spiegazione più dettagliata delle misurazioni di KinExA è inclusa di seguito.
