口腔内単純ヘルペスウイルス1型感染症の頻度の高い患者における補体C4欠乏症およびHLAホモ接合性

要約

単純ヘルペスウイルス感染症のまれな合併症である口腔内単純ヘルペスウイルス1型再発の頻度の高い患者における補体c4欠乏症およびhlaホモ接合性は、aまたはHlaのいずれかの総欠損を有することが判明した。Bは補体成分C4のアイソタイプであり、かつ、Bは補体成分C4のアイソタイプである 調査されたHLAの抗原のためのhomozygous。 ウイルスのペプチドの損なわれたT細胞の認識をもたらすかもしれないHLAのhomozygosityの組合せおよびウイルスの中和を妥協できる古典的な補足物の細

単純ヘルペスウイルス1型（HSV-1）感染による罹患率は、主にHSV-1が定期的に再活性化する能力に起因する。 再発性口唇ヘルペスは、血清陽性者の15％〜40％で起こる。 免疫担当者はまれに口腔内病変を有する。 そうする人のうち、52％が再発エピソードを経験し、一般的にアフタ性口内炎または多形性紅斑と誤診される。 病変は主に硬口蓋および歯肉に発生し、長期間の抗ウイルス予防で効果的に治療することができる。

クリアHSV-1に対する早期免疫応答の効率は大きく異なります。 ＩＦＮ-γと特異的抗体産生の違い，マクロファージまたはＮＫ細胞機能の異常は，再発率と侵襲性の違いを説明すると考えられている。 HSV-1は、補体回避分子を有し、代替補体経路および末端複合体活性化を局所的にほぼ完全に遮断する。 宿主によるウイルス中和はおそらく古典的経路の抗体誘導活性化に依存する。 それでも、HSV感染症における補体欠乏症の役割はほとんど注目されていない。

1年以内に、明らかな免疫不全を伴わない例外的に活性な口腔内ヘルペスのために、非血族結婚から3人の無関係な患者が私たちに紹介されました。 我々は、この小さな白人患者群における補体機能と補体因子C4とHLA遺伝子を研究した。 結果は活動的なintraoral HSV-1伝染にし向けるかもしれない免疫学的特徴を指摘します。

これらの3人の女性患者は、口腔内HSV-1感染を有し、毎年>10回の再発があり、主に硬口蓋および歯肉に再発するヘルペス性水疱があった。 再発率は一定のままであったか、または経時的に増加していた（表1）。

血液は、ヘパリン、EDTA（10mM）、または抗凝固剤を含まないチューブに引き込まれた。 患者が無症候性である間にサンプルを採取した。ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２に対する血清抗体を市販のＥｉａｓ（ＨＳＶ−１Ｅｌｉｓａ ＩｇｇおよびＨＳＶ−２ＥＬＩＳＡ Ｉｇｇ；ＭＲＬ診断）により測定した。 ＨＳＶ ＰＣＲ，抗原検出および単離のためのサンプルを新たに穿刺した口腔内小胞の塩基から採取した。 ＨＳＶ単離およびタイプ特異的ＰＣＲ分析を行った。 ＨＳＶ抗原検出のための試料を綿棒から細胞遠心分離により調製した。 スライドをポリクローナルＨ ＳＶ抗ウサギＩｇｇ、続いてフルオレセインイソチオシアネート標識抗ウサギＩｇｇ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で染色した。 パラフィン包埋組織試料も同様に染色した。 Ｉｇｇ，ＩｇａおよびＩｇｍのレベルおよびＩｇｇサブクラスの濃度をＢｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ由来のポリクローナル抗体を用いたネフェロメトリーによって定量した。ＨＬＡ−Ａ、−Ｂ、−Ｃ、および−ＤＲについて、ＤＮＡサンプルを、低〜中間の対立遺伝子分解能を有するＰｅｌ−ＦＲＥＥＺ（ＰＦ−ＡＢＣ−ＳＳＰ）、１つのラムダ（ＳＳＰ ＡＢＤＲ）、またはＩＮＮＯ−Ｌｉｐａ（Ｌｉｐａ ＨＬＡ−ＤＲＢ１）の市販キットを用いて 補体C4アロタイプを電気泳動的に決定した。 アイソタイプの欠如は、C4AおよびC4B遺伝子のアイソタイプ特異的PCR増幅によって確認された。

血清C3およびC4レベルは、ポリクローナル抗体およびBehringwerkeからの参照サンプルを用いたネフェロメトリーによって定量した。 古典的および代替経路溶血補体活性は、結合部位からの標準化された溶血ゲル中アッセイによって決定された。

末梢血単核細胞（PBMC）の活性は、PHYTOHEMAGGLUTININ、concanavalin A、およびpokeweed mitogenによるPBMCの刺激後のチミジンの取り込みによって測定され、正常であることが判明した（データ示さ

すべての患者は>10年間HSV-1再発を有していた（表1）5-10日間続いたが、長期経口バラシクロビル療法で完全に抑制された。 患者は、口腔内HSV感染（表1）に典型的な部位で複数の小さな（直径1-3mm）小胞を有していたが、口腔内多形性紅斑またはアフタ性口内炎には非定型であった。 患者1および3は、しばしば同時に典型的な口唇ヘルペスを明らかにした（表1）。 HSV-1感染は、患者1の妊娠中および患者3の思春期により頻繁になっていた。 いずれも髄膜刺激の徴候を有し，髄膜硬直性および筋肉痛，光恐怖症，およびヘルペス病変と同時に無力化頭痛を有した。 CSFにおけるタンパク質レベルまたはpleocytosisの増加は検出されず、CSFにおけるHSVのPCR試験は患者1に対して陰性であった。 患者1および3は頻繁な上気道感染症を有し、患者1は再発性副鼻腔炎を有していた。

患者は、HIVまたはB型肝炎またはC型肝炎ウイルスに対する細胞減少症または抗体を有していなかった。 ウイルス学的および免疫学的検査の結果を表1および2に示す。 すべての患者はHSV-1に対して血清陽性であった。 患者2の組織学的診断は、典型的なHSV水疱の形態に基づいており、HSV特異的免疫染色によって確認された。 全てが進行中の口腔内Ｈ ＳＶ−１感染を有し（表１）、古典的補体経路の溶血活性および血清Ｃ４のレベルが低下した（表１）。 C4表現型は、C4A（1患者）またはC4B（2患者）タンパク質の完全な欠如を示した。 患者は、ＨＬＡクラスｉおよびＩＩ対立遺伝子についてホモ接合性であった（表２）。 患者2は、A1、B8、DR3のホモ接合体であり、血清IgAレベル（0.47g/L）が低かった。

議論。 3人の患者の我々の選択したグループでは、すべての例外的にアクティブな口腔内HSV-1感染を持っていた、彼らの主要な組織適合遺伝子複合体（MHC）ハプロタ したがって、患者は、口腔咽頭におけるHSV-1の悪化に対する免疫防御を損なう可能性のあるMHCタンパク質の微妙な障害の組み合わせを有する。

クラスI制限型CD8+T細胞がHSVの除去に関与していると考えられている。 放出および再発の変動率および早期免疫応答の有効性の変化は、HSVの免疫回避分子と患者の免疫応答との間の複雑な相互作用の最終結果である。 Ｔ細胞に加えて、免疫応答の迅速に作用するアームが、この防御の初期段階に寄与する可能性が高い。

初期のHSV病変には、nk、単核細胞、CD4+T細胞、免疫グロブリン、補体因子、主にTh1型サイトカインが見られる。 HSV病変に移行する最初のリンパ球は、CD4+T細胞およびNK細胞であり、局所的に増加したサイトカイン産生を担う。 ＭＨＣクラスｉ ｈｌａ−Ａ遺伝子座および−Ｂ遺伝子座の産物は、細胞傷害性ＴおよびＮＫ Ｔ細胞に対するペプチドおよびＣＤ４＋Ｔ細胞に対するクラスＩＩ遺伝子座 ＨＳＶ−１は、クラスｉおよびＩＩのｍｈｃ分子による抗原提示を妨害し、ＣＤ８＋およびＣＤ４＋ｔ細胞認識に影響を及ぼすことができる。 他のウイルス感染で示唆されているように、再発の早期に細胞傷害性CD8+T細胞へのウイルスペプチドの発現は、おそらく粘膜上皮細胞上の、例えば、患者のhla抗原レパートリーの変動性の低下を介して、HLAホモ接合性によって妨げられる可能性がある。 最終的に、サイトカイン産生の効果は、ＨＳＶによるＨＬＡクラスｉ発現の阻害を克服し、ＣＤ８＋Ｔ細胞がウイルス感染細胞を除去することを可能にする。 MHCホモ接合性は、ウイルス感染の加速された疾患の進行にリンクされています。 これは、我々の知る限りでは、HLAホモ接合性と症候性HSV再発との関連を報告する最初の研究である。

B8、DR3およびB35、Cw4を含むMHCハプロタイプは両方とも再燃性HSV疾患に関与しており、包膜ウイルスによって引き起こされる攻撃的な疾患につ 抗原A3、B35、A1、B8、およびB15を含むハプロタイプは、それぞれ周波数0.8％、0.3％、および2％でフィンランドの集団でホモ接合体の形で発生します。 患者のハプロタイプに共通するのは、C4欠失である。

C4タンパク質は2つのアイソタイプ、C4AおよびC4Bを有し、その遺伝子はMHCクラスIII領域にコードされている。 それらの内部チオレスター結合の破壊の後、C4AおよびC4Bタンパク質は、標的分子上のアミノまたはヒドロキシル基に共有結合し、古典的な経路C3コンバーターゼ、C4B2Aのサブユニットとして作用する。C4は、>40タンパク質アロタイプが認識された複雑な構造多型を有する。 C4欠乏症は、分節欠失、重複、遺伝子変換、または「ヌル」（Q0）対立遺伝子を生じる点突然変異によって引き起こされる。 これらは高周波で発生します。 すべての人種の人の約35％は、4つのC4AまたはC4B対立遺伝子のうち1つを欠いている。 総C4AおよびC4B欠損、すなわち、それぞれのC4AまたはC4B遺伝子座における2つのヌル対立遺伝子は、フィンランドの集団の3％および8％

口腔内ヘルペスの有病率は不明である。 私たちは保守的に<0.5％と推定しています。 フィンランドの人口では、9つの最も一般的なハプロタイプのHLAホモ接合性の有病率は3％であり、総C4AまたはC4B欠乏症は11％である。 したがって、これらすべての組み合わせの有病率は1になります。65人あたり100,000人が、HLAハプロタイプとC4欠乏症は、リンクされている間独立していません。 口腔内ヘルペスを有する3人の連続した患者がこれらを組み合わせた可能性は最小限である。 例として、10,000人の連続した入院患者のうち、ポアソンの分布によれば、3人の一致する患者を見つける確率は0.00064になります。

特異的抗体および補体は、HSVを直接中和およびオプソニン化し、抗体依存性細胞傷害性を増強するために協調して作用する。 免疫のこれらの急速に作用する腕を回避するために、HSV-1は、特定のタンパク質をコードしています。 最初に、IgFc結合蛋白質はIgGの活動を禁じ、ウイルスおよび感染させた細胞が抗体の攻撃を脱出することを可能にします。 第二に、HSV-1膜貫通糖タンパク質gC-1は、それによって局所的な広がりを促進し、補体中和からビリオンとHSV感染細胞を保護します。 ウイルスは代替補体経路に対処することができると思われるが、宿主抵抗性は古典的経路に依存するようである。 それの欠陥、またはそれを活性化する抗体の欠陥は、HSV-1の局所的な広がりおよび再発率に大きな影響を及ぼす可能性がある。

結論として、我々の研究は、2つのC4タンパク質のいずれかの欠乏が慢性的に活性なHSV-1疾患に対する感受性を定義する上で重要である可能性があることを示唆している。 さらに，ＨＬＡホモ接合性も感受性因子であると考えられる。 例外的に厳しいウイルス感染への感受性は免疫組織の多数の腕の微妙な欠陥の組合せによってこうして定められるかもしれません。