1. ＫＲＡＳエクソン２（コドン１ ２／１ ３）およびエクソン３（コドン６ １）突然変異試験：Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｋｒａｓ突然変異試験（Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｕｓｅ）（Ｒｏｃｈｅ）。
Cobas®KRAS変異試験は、100ngのDNA入力を用いて、KRAS遺伝子のエクソン2（コドン12/13）およびエクソン3（コドン61）の体細胞変異を定性的に検出するためのリアルタ テストは19のKRASの突然変異を検出できます。 変異の存在は、野生型ゲノムDNAのバックグラウンドで少なくとも99％の分析特異性および少なくとも5％の変異レベルの検出限界で検出される。
Cobas®KRAS変異試験は、(1)少なくとも10%の腫瘍細胞を含むFFPE CRC組織の厚さ5μ mのセクションからゲノムDNAを得るための手動標本調製、(2)相補的なプライマー対 使用されるプライマー対は、krasコドン12および13を含むエクソン2のための85塩基対配列、およびヒトゲノムDNA中のKRASコドン61を含むエクソン3のための75塩基対配列を定義する。 一方のプローブはエクソン2のKRASコドン12/13配列を検出するように設計され、他方のプローブはKRAS遺伝子のエクソン3のKRASコドン61配列を検出するように設計されている。 突然変異の検出はCobas z480の検光子（1）による溶けるカーブの分析によって達成される。
2. KRAS変異テストv2(LSR)
KRAS変異テストv2(LSR)は、ホルマリン固定、パラフィン包埋組織(FFPET)からV-Ki-ras2Kirstenラット肉腫ウイルス癌遺伝子ホモログ(KRAS)遺伝子のエクソン2、3、およ テストは28の独特な突然変異を検出するように設計されています。 変異の存在は、野生型ゲノムDNAのバックグラウンドで少なくとも99％の分析特異性および少なくとも1％の変異レベルの検出限界で検出される。
KRAS Mutation Test v2(LSR)は、(1)FFPETからゲノムDNAを得るための手動サンプル調製、および(2)相補的なプライマー対および蛍光色素で標識されたオリゴヌクレオチドプローブを用いた標的DNAのPCR増幅および検出という二つのプロセスに基づいている。
KRAS突然変異試験v2(LSR)は、標的とされた突然変異のそれぞれに特異的な塩基対配列を定義するプライマーを使用します。 増幅は、プライマー間のＫＲＡＳ遺伝子の領域でのみ起こり、遺伝子全体は増幅されない。 標的とされたKRAS配列は79–114塩基対の範囲である。 突然変異の検出はCobas z480の検光子とのPCRの分析によって達成される。 (1)
3. BRAF/NRAS変異試験（LSR）
BRAF/NRAS変異試験（LSR）は、ホルマリン固定、パラフィン包埋組織（FFPET）由来の神経芽細胞腫RASウイルス癌遺伝子ホモログ（NRAS）遺伝子のエキソン11および15…..
このテストは36個のユニークな突然変異を検出するように設計されています。 変異の存在は、野生型ゲノムDNAのバックグラウンドで少なくとも99％の分析特異性および少なくとも5％の変異レベルの検出限界で検出される。
BRAF/NRAS突然変異試験（LSR）は、（1）FFPETからゲノムDNAを得るための手動サンプル調製、および（2）相補的なプライマー対および蛍光色素で標識されたオリゴヌクレオチドプローブを用いた標的DNAのPCR増幅および検出という二つの主要なプロセスに基づいている。
BRAF/NRAS突然変異試験(LSR)では、標的とされた突然変異のそれぞれに特異的な塩基対配列を定義するプライマーを使用します。 増幅は、プライマー間のBRAFまたはNRAS遺伝子の領域でのみ起こり、遺伝子全体は増幅されない。 ＢＲＡＦ配列は、１ ０ １〜１ ２ ０塩基対の範囲である。 ＮＲＡＳ配列は、９ ４〜１ ２ １塩基対の範囲である。 突然変異の検出はCobas z480の検光子とのPCRの分析によって達成される。 (2)
臨床的意味
KRASとNRASは密接に関連しているRAS癌遺伝子ファミリーメンバーであり、コドン12、13（エクソン2）、コドン61（エクソン3）、コドン146（エクソン4）のいずれかの遺伝子の変異は、グアノシン三リン酸結合RASタンパク質のレベルを増加させる。 過剰活性RASシグナル伝達は、発癌を促進する。 大腸癌（CRC）では、これらのコドンのKRASおよびNRASの突然変異はケースの50%までにあり、反EGFR療法への応答の欠乏を予測します。 ほとんどのRAS変異は、KRASエクソン2（コドン12または13;約40％）で発生する点変異である。 他のRAS変異は、KRASエクソン3と4とNRASエクソン2と3で発生する最も一般的な変異とあまり頻繁ではありません（3）。
黒色腫の約50％がBRAFに活性化突然変異を有する。 BRAF変異の90％以上がヌクレオチド1799T>の変化をもたらし、位置600（V600E）でバリンからグルタミン酸への置換をもたらす。 BRAF V600Eの突然変異により余分な細胞の成長および拡散の原因となるMAPKの細道の制御されていないシグナリングを引き起こします。 活性化された突然変異体BRAF（BRAF阻害剤）を標的とする薬剤は、この突然変異を有する転移性黒色腫の患者において成功することが証明されている（1-3）。
黒色腫におけるその予測値とは別に、BRAF V600E変異は結腸直腸癌および肺癌（NSCLC）においても予後値を有する（4,5,7）。 BRAF V600E変異は、転移性結腸直腸癌の約10％に見出され、マイクロサテライト不安定性の存在と関連している（6）。 全体的に、BRAF変異CRCを有する患者は、従来の治療法および予後不良に対する低い応答率を有する。 BRAF V600変異メラノーマはBRAF阻害剤に感受性であるが、BRAF V600変異Crcはそれほど感受性ではない可能性がある。 結腸直腸癌におけるＥＧＦＲの活性化は、結腸直腸癌が一般的にＢＲＡＦ阻害剤に対するより低い応答を有する理由を説明することができる。 したがって、EGFR阻害剤およびBRAF阻害剤との併用療法を開始することが推奨される。＜3223＞＜8321＞BRAF V600E変異は、すべての肺癌の3〜5％にも見られる（7）。 BRAF阻害剤はV600E変異陽性nsclc患者で成功していることが証明されているが、FDAは、局所的に確認されたBRAF V600E変異陽性転移性nsclc患者を対象とした国際的、多施設、3コホート、非ランダム化、非比較、オープンラベル試験の結果に基づいて、V600E変異を有するNSCLC患者に対するBRAF阻害剤およびMEK阻害剤との併用療法の使用を承認した。
試料の要件
アッセイに許容される試料は、ホルマリン固定、パラフィン埋め込まれた結腸直腸癌組織標本であり、固定時間は6-48時間である。＜3223＞＜8321＞体積＜3223＞＜8321＞1代表的なパラフィンブロックが好ましい。 また、切除の標本のために最低5つのunstainedティッシュセクション（厚い5µ m）は要求されます（完全なRASのテスト）。
保管および出荷手順
試料を周囲温度で維持および出荷します。
制限
不十分な腫瘍含有量は、KRAS/NRAS/BRAF変異の検出を可能にしない可能性があります：腫瘍細胞の10％が必要です。 腫瘍含量は、分析の前に評価され、マクロディセクションが行われる。 ホルマリン以外の固定剤や固定時間の延長は、不十分な結果を引き起こす可能性があります。
特別な要件
なし。
ターンアラウンドタイム
それぞれスライドとパラフィンブロックの5-7営業日。
- Li et al. 肺、結腸直腸、および膵臓癌の組織および血漿中のKRAS変異検出のための高度に検証されたアッセイ。 アーチパトルラボMed. 2019年Feb;143:183-9
- Patten et al. 36のBRAFおよびNRASの突然変異の同時検出のための敏感で、正確なテスト。 臨床腫瘍学ジャーナル2018 36:15
- ドゥイヤール-JYら。 結腸直腸癌におけるパニツムマブ-FOLFOX4治療およびRAS変異。 N Engl J Med. 2013Sep12;369(11):1023-34.
2019年12月03日更新
