1. 크라스 엑손 2(코돈 12/13)및 엑손 3(코돈 61)돌연변이 테스트:체외 진단 사용을위한 코바스 크라 스 돌연변이 테스트(로슈).
코바스 크라 스 돌연변이 테스트는 엑손 2(코돈 12/13)및 엑손 3(코돈 61)에서 체세포 돌연변이의 정성 검출을 위한 실시간 테스트입니다. 이 테스트는 19 개의 크라스 돌연변이를 감지 할 수 있습니다. 돌연변이의 존재는 적어도 99%의 분석 특이성과 야생형 게놈 유전자의 배경에서 적어도 5%의 돌연변이 수준의 검출 한계로 검출됩니다.
이 Cobas®KRAS 돌연변이시험에 기반을 두 가지 주요 프로세스:(1)수동 시편 준비를 얻 genomic DNA 에서 하나 또는 두 개의 5μm 두꺼운 섹션의 FFPE CRC 조직을 포함하는 10%이상 종양세포;(2)PCR 증폭 대상의 DNA 를 사용하여 보완적인 프라이머 쌍 두 올리고뉴클레오타이드 프로브 표시와 형광 염료로 물들인 것입니다. 사용 된 프라이머 쌍은 크라스 코돈 12 및 13 을 포함하는 엑손 2 에 대해 85 염기쌍 서열을 정의하고,인간 게놈에서 크라스 코돈 61 을 포함하는 엑손 3 에 대해 75 염기쌍 서열을 정의한다. 하나의 프로브는 엑손 2 에서 크라스 코돈 12/13 서열을 검출하도록 설계되고,다른 프로브는 크라스 유전자의 엑손 3 에서 크라스 코돈 61 서열을 검출하도록 설계된다. 돌연변이 검출은 코바스 480 분석기(1)에 의한 용융 곡선 분석에 의해 달성된다.
2. 2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 이 테스트는 28 개의 고유 한 돌연변이를 감지하도록 설계되었습니다. 돌연변이의 존재는 적어도 99%의 분석 특이성과 야생형 게놈 유전자의 배경에서 적어도 1%의 돌연변이 수준의 검출 한계로 검출됩니다.본 발명의 실시예에 따르면,표적성질환은 표적성질환과 표적성질환의 유사성질환에 의해 결정된다.각각의 표적화된 돌연변이에 대해 특정 염기쌍 서열을 정의하는 프라이머를 사용한다. 증폭은 프라이머 사이의 크라스 유전자의 영역에서만 발생;전체 유전자는 증폭되지 않는다. 대상 크라스 시퀀스는 79-114 염기쌍 범위. 변이 검출은 코바스 480 분석기를 사용한 자장가 분석을 통해 이루어집니다. (1)
3. 2013 년 11 월 15 일,2013 년 11 월 15 일,2013 년 11 월 15 일,2013 년 11 월 15 일,2013 년 11 월 15 일,2013 년 11 월 15 일,2013 년 11 월 15 일,2013 년 11 월 15 일,2013 년 11 월 15 일,2013 년 11 월 15 일,2013 년 11 월 15 일,2013 년 11 월 15 일,2013 년 11 월 15 일,2013 년 11 월 15 일,2013 년.
이 테스트는 36 개의 독특한 돌연변이를 검출하도록 설계되었습니다. 돌연변이의 존재는 적어도 99%의 분석 특이성과 야생형 게놈 유전자의 배경에서 적어도 5%의 돌연변이 수준의 검출 한계로 검출됩니다.(2)상보 프라이머 쌍 및 형광 염료로 표지 된 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여 표적 유전자의 증폭 및 검출.각각의 표적화된 돌연변이에 대해 특정 염기쌍 서열을 정의하는 프라이머를 사용한다. 증폭은 뇌관 사이의 브라프 또는 뇌관 유전자의 영역에서만 발생하며 전체 유전자는 증폭되지 않습니다. 브라프 서열은 101-120 염기쌍 범위이다. 염기쌍은 94-121 의 염기쌍이다. 변이 검출은 코바스 480 분석기를 사용한 자장가 분석을 통해 이루어집니다. 코돈 12,13(엑손 2),코돈 61(엑손 3)및 코돈 146(엑손 4)에서 두 유전자의 돌연변이는 구아노신 트리 포스페이트 결합 라스 단백질의 증가 된 수준을 초래한다. 지나친 라스 신호 전달은 종양 발생을 촉진합니다. 대장 암종(대장 암종)에서,이들 코돈의 크라 스 및 크라 스 돌연변이는 최대 50%의 사례에서 발견되며 항-에그 레프 치료에 대한 반응 부족을 예측합니다. 대부분의 라스 돌연변이는 크라스 엑손 2(코돈 12 또는 13;약 40%)에서 발생하는 점 돌연변이입니다. 다른 라스 돌연변이는 크라 스 엑손 3 과 4 및 크라 스 엑손 2 와 3(3)에서 발생하는 가장 흔한 돌연변이에서 덜 빈번합니다.
흑색 종의 약 50%는 브라프에서 돌연변이를 활성화시킨다. 브라프 돌연변이의 90%이상이 뉴클레오티드 1799 티>위치 600 에서 발린-글루탐산 치환으로 이어지는 변화. 돌연변이 과도 한 세포 성장 및 증식을 선도 하는 맵크 통로의 제어 되지 않는 신호를 발생 합니다. 활성화 된 돌연변이 브라프(브라프-억제제)를 표적으로하는 약제는이 돌연변이를 품고있는 전이성 흑색 종 환자에서 성공적인 것으로 입증되었습니다(1-3).
흑색 종에서의 예측 값 외에도,대장 암 및 폐암에서 예후 값을 갖는다(4,5,7). 이 돌연변이는 전이성 대장 암종의 약 10%에서 발견되며 미세 위성 불안정성의 존재와 관련이 있습니다(6). 전반적으로,브라프 돌연변이 크로노그래프 환자는 기존의 치료법과 불리한 예후에 대한 반응률이 낮습니다. 이 유형의 흑색 종 중 가장 흔한 것은 흑색 종 중 가장 흔한 흑색 종입니다. 대장 암에서 대장 암의 활성화는 대장 암이 일반적으로 브라프 억제제에 대한 반응이 낮은 이유를 설명 할 수 있습니다. 따라서,이 병용 요법을 시작하는 것이 좋습니다.
모든 폐암의 3-5%에서도 발견된다(7). 2015 년 12 월 15 일(목),2015 년 12 월 15 일(목),2015 년 12 월 15 일(목),2015 년 12 월 15 일(목),2015 년 12 월 15 일(목),2015 년 12 월 15 일(목),2015 년 12 월 15 일(목),2015 년 12 월 15 일(목),2015 년 12 월 15 일(목),2015 년 12 월 15 일(목),2015 년 12 월 15 일(목),2015 년 12 월 15 일(목),2015 년 12 월 15 일(목),2015 년 12 월 15 일(목),2015 년
표본 요구 사항
분석에 허용되는 표본은 6-48 시간의 고정 시간을 가진 포르말린 고정 파라핀 내장 대장 암종 조직 표본입니다.
부피
1 대표적인 파라핀 블록이 바람직하다. 또는 절제 표본을 위해 최소 5 개의 염색되지 않은 조직 섹션(5 개의 두께)이 필요합니다(전체 라스 테스트).
보관 및 선적 지침
주변 온도에서 시편을 유지하고 발송하십시오.
제한
불충분 한 종양 함량은 크라 스/핵/브라프 돌연변이의 검출을 허용하지 않을 수 있습니다:종양 세포의 10%가 필요합니다. 종양 함량은 분석 전에 평가되고 매크로 해석이 수행됩니다. 포르말린 또는 연장 된 고정 시간 이외의 고정제는 부적절한 결과를 초래할 수 있습니다.
특별 요구 사항
없음.
턴어라운드 시간
각각 슬라이드 및 파라핀 블록에 대해 5~7 영업일.
- 리 외. 폐,대장 및 췌장암의 조직 및 혈장에서 크라 스 돌연변이 검출에 대한 고도로 검증 된 분석. 아치 파홀 연구소 의대. 2019 2 월;143:183-9
- 패튼 등. 36 개의 브라프 돌연변이와 라스 돌연변이의 동시 검출을위한 민감하고 정확한 테스트. 임상 종양학 저널 2018 36:15
- 두일라드 제이 외. 결장 직장암에서 파니 투 무맙-폴 폭스 4 치료 및 라스 돌연변이. 2018 년 2013 년 9 월 12 일;369(11):1023-34.
2019 년 12 월 03 일 업데이트
