토론
관찰된 생산의 높은 수준의 단백질 분해효소 활동하는 동안 지속적인 문화의 K. 인슐린 사슬,인간 캘러스 및 처리되지 않은 캘러스에서 추출한 케라틴‐세덴 타 리우스는 아조 카세인에 대해 활성 인 두 가지 프로테아제 인 피 1 과 피 2 의 정화를 촉진했습니다. 프로테아제 억제제에 기질 범위,최선 온도 및 산도 및 감도를 포함하여 이 효소의 일반적인 특성은 생화확적으로 유사하 알칼리성 세린 프로테아제 가족에 속하기 위하여 확률이 높다는 것을 건의합니다. 이러한 프로테아제는 다양한 미생물에 의해 생성되며 엔도 펩티다아제(라오 외. 1998).
그러나 효소가 케라티나제로도 분류될 수 있는지 여부는 여전히 논쟁의 여지가 있다. 정의에 따르면 케라티나제는 순수한 천연 각질을 가수 분해 할 수 있어야합니다. 그러나 케라틴의 추출은 비 케라틴 단백질과 분리하기 위해 변성제를 사용한 사전 처리에 의해서만 달성 될 수 있습니다. 볼 밀링과 같은 기계적 처리는 이황화 결합의 절단을 초래하며,이는 케라티나제로 분류되지 않는 트립신 및 단백질 분해 효소와 같은 프로테아제에 의한 단백질 분해 소화에 단백질을 더 취약하게 만든다(노발 및 니커 슨 1959). 유사하게,케라티나제 분석실험에 있는 열 살균한 기질의 사용은 또한 가열이 각질 변성을 일으키는 원인이 되기 수 있기 때문에 강평되었습니다.
본 연구에서 미세하게 분쇄 된 캘러스를 효소 기질로 사용했지만,배양 상청 액은 손상되지 않은 캘러스 조각에 대해 활성이었다. 따라서 두 프로테아제가 엄격하게 케라티나제가 아니더라도 시험관 내에서 인간 캘러스를 저하시키고 이것이 생체 내에서 또한 발생한다는 몇 가지 증거가 있습니다(노드스트롬 외. 1987).
프로테아제는 또한 환원된 케라틴에서의 활성의 결과로서 케라티나제로 분류되어 왔으며,이 경우 환원제는 효소 분석 혼합물에 첨가되거나 케라틴 추출 중에 사용되었다. 다양한 피부 박테리아의 각질 용해 활성이 기질로’네이티브’케라틴을 사용하여 연구되었지만,환원제 인 디티오트레이톨이 분석 혼합물에 포함되었습니다. 예를 들어,포도상구균 표피부종으로부터 명백한 케라티나제 활성을 연구했을 때,어떠한 활성도 검출되지 않았다(미큭스 및 드종 1987). 이와 유사하게,칸디다 알비칸스로부터의 세린 프로테아제‐분해된 케라틴은 트리스−에이치엘 및 메르 캅토 에탄올(핫토리 외)에서 8 몰 엘‐1 우레아를 가진 인간 발바닥의 각질층으로부터 추출되었다. 1984). 본 연구에서,피 1 과 피 2 요소 및 제 2‐메르 캅토 에탄올로 인간의 발 굳은 살에서 추출 된 가수 분해 케라틴 그러나,중요한 것은,또한 치료되지 않은 굳은 살을 분해 할 수 있었다.
각질층과 인간 캘러스는 각질이 주요 성분인 복잡하고 안정한 구조이다. 각질에 대한 30 개의 인간 유전자가 있으며 그 중 18 개가 피부에 발현됩니다(푹스 1995). 케라틴 데이터베이스의 요약은 모든 케라틴이 프로테아제에 대한 잠재적 인 절단 부위를 가지고 있으며,가장 일반적인 것으로 나타났습니다. 케라틴 필라멘트가 처음에 이러한 위치에서 파손되는 경우,이러한 작은 단위의 점진적인 분해가 2 차 절단 부위에서 발생하여 인간 캘러스에서 추출한 케라틴에 대한 프로테아제 공격의 분석에 의해 나타난 바와 같이 펩타이드 단편의 크기 범위를 생성 할 수 있습니다. 도 1 에 제시된 결과. 3 비 캘러스 저하 활동에 대한 두 가지 산도 옵티마를 나타냅니다 피 2. 한 가지 가능한 설명은 샘플에 두 개의 효소가 있다는 것입니다. 이는 사용 된 효소 샘플이 고도로 정제 되었기 때문에 은색 염색 페이지(그림 1 참조)로 표시된 것 같지 않습니다. 1,레인 6). 페이지에 매우 유사한 이동성을 가진 정제 된 피 2 샘플에서 두 개의 캘러스 분해 효소의 가능성을 배제 할 수 없습니다. 그러나,동일한 샘플을 아조카제인 분석과 함께 동일한 버퍼를 사용하여 시험하였고,오직 하나의 산도 최적만이 산도 10·2 에서 검출되었다. 다른 설명은 다른 산도에서 복잡 한 굳은 기질/효소 상호 작용 효소 활성 및 이중 산도 옵티마 리드 기판의 미묘한 구조적 변화의 균형 이다.
이 조사는 케이. 그들의 상대 분자 크기,그들의 피스에 대한 기본 정보가 결정되었습니다. 그러나,기존의 효소 운동 연구 수 없습니다 해결 하기 때문에 이러한 체 외 실험에 사용 되는 자연 기판 물에는 불용 성 고분자의 복잡 한 혼합물 이었다. 1-1 염의 존재 하에서 증가 된 효소 활성은 사람의 피부에서의 미생물의 생존과 관련이있을 수 있으며,이는 사람의 운동 속도 및 환경 온도에 의해 결정되는 에크 린 샘 활성에 따라 변화하는 염 농도를 갖는다. 염화나트륨 효과에 관여하는 메커니즘은 다루어지지 않았다. 그것은 제안 잠정적으로 염화 나트륨 효소 및 기판,또는 둘 다,기판의 특정 분열 사이트에 효소 활성 사이트의 액세스를 개선 하기 위해 3 차 구조에 영향을 미칠 수 있습니다.
관찰된 결과에 대한 가장 간단한 설명은 케이. 그것은 가능하다 케이. 세덴 타 리우스는 하나의 유전자에 의해 암호화 된 하나의 프로테아제를 생성하고자가 촉매 또는 다른 프로테아제 활성은 분자량이 다른 두 개의 효소를 생성합니다. 또는 두 개의 독립적이고 밀접하게 관련된 효소를 코딩하는 두 개의 유전자가 있습니다. 후자의 가설은 이전 연구에 의해 뒷받침된다(네덜란드 외. 1992). 페이지에 분석 된 다른 희석 속도로 정상 상태에서 세덴 타 리우스의 연속 배양에서 샘플,카제인과 중첩,두 개의 효소를 보여 주었다,하나 구성 및 낮은 희석 속도로 높은 농도에서 검출 된 다른. 중요한 것은,근처에 희석 속도에서최대 그것은 검출되지 않았다. 폴리펩티드는 이들이 완전히 다른 것으로 나타났다. 이 결과,지속적인 문화 실험에서 정보 함께 찍은 효소는 독립적으로 인코딩된 것이 좋습니다.
이 조사의 결과는 케세덴타리우스의 특정 프로테아제가 움푹 패인 각질 용해의 캘러스 특성의 분해를 설명 할 수 있다는 가설을 강화시켰다. 현재까지 증거는 또한 2 개의 프로테아제가 연루된다는 것을 건의하고 피부 위치의 산도에 활동적이다는 것을,산도 6·3-6·9 (마샬 외. 1988). 생체 조건 환경에 체 외 실험에서 얻은 결과의 해석은 인간의 굳은 살을 기판으로 사용 했다 비록 의문을 제기 수 있습니다. 이상적으로,인간적인 피부 생검은 정상 적이고 움푹 들어가게 한 피부의 지역을 포함하여 가지고 가야 합니다. 프로테아제의 존재 및 위치 또는 부재는 프로테아제 및 케이에 대한 프로브로서 단일 클론 항체를 사용하는 조직 학적 기술에 의해 결정될 수있다. 그러나,윤리적인 승인은 필수 위치,사람들의 대표 수에게서 발의 짐 방위 위치에서 생검을 위해,주어지지 않을 것입니다. 케라틴을 분해하는 프로테아제의 생산 메커니즘에 의한 움푹 패인 각화증에서의 세덴타리우스의 관여는 공식적으로 입증되지 않았다. 그러나 가설을 반박하는 증거는 없으며 여기에 제시된 결과에 의해 그 신뢰성이 강화되었습니다. 세덴타리우스와 그 세포 외 캘러스 분해 효소가 움푹 패인 각질 용해 상태에 있다는 강력한 시험관 내 증거가 제시되었습니다. 정상 피부 산도 및 표면 수화에서 이러한 효소의 생산과 활성은 낮을 것이며,피 1 이 더 활동적입니다. 폐색의 환경 조건 및 열악한 위생 조건 하에서,피부 산도는 중립성 이상으로 약간 이동합니다. 이러한 조건은 2 를 선호합니다. 두 효소 모두 효소를 청소할 가능성이 가장 높기 때문에 케이 세덴 타 리우스는 상주하고 불용성 복합 중합체 인 케라틴에 잠긴 탄소 및 질소 공급원,작은 펩타이드를 얻을 수 있습니다. 현재 이 효소의 생산의 규칙은 피부경결 강직에 그들의 관계되는 기여금이 생체 조건이다 것과 같이,불명합니다. 각질분해성 프로테아제는 임상적 함의에 더하여,가금류 및 가죽 산업에서 케라틴‐폐기물의 분해를 포함하는 다수의 산업 공정에서 유용하기 때문에 상업 부문에 상당한 가치를 갖는다(1993;오니페이드 외. 1998). 의 높은 각질 용해 활성 케이. 다른 많은 프로테아제에 비해 상대적으로 낮은 온도와 산도에서 세덴 타 리우스 프로테아제는 생명 공학 산업에서 이러한 효소의 잠재적 응용을 제시합니다.
