allosterische effecten die interageren met hemoglobine binden zich aan de hemoglobinemoleculen, waardoor de opname en afgifte van zuurstof wordt gereguleerd. Therapeutische geneesmiddelen die illegale deze reactie dragen aanzienlijk misbruik potentieel, omdat verhoogde oxygenatie van de weefsels verbetert atletische prestaties. De nieuwe allosterische effector myo – inositol trispyrofosfaat (ITPP) bevindt zich momenteel in Fase 1 klinische studies voor chronisch hartfalen en kanker toepassingen (onder de benaming OXY111A). Deze verbinding is al gebruikt voor prestatieverbetering in de paardenrace-Industrie en is direct online beschikbaar in de vorm van orale voedingssupplementen en zelfs injecteerbare oplossingen. ITPP is opgenomen op de verboden lijst van stoffen van het Wereld Anti-Doping Agentschap voor menselijke atleten; er bestaat echter nog geen methode om deze stof in menselijke urine op te sporen.
om deze reden, Görgens et al. (2014) zette zich in om een eenvoudige, robuuste screening en bevestiging protocol voor ITPP in menselijke urine te ontwikkelen.1 omdat de verbinding zeer polair van aard is en daarom ongeschikt voor reversed-phase vloeistofchromatografie, wendde het team zich tot hydrofiele interactie vloeistofchromatografie (HILIC) en tandem massaspectrometrie (MS/MS) voor de analyse van menselijke urine verrijkt met ITPP en interne standaard ITPP-d6. De onderzoekers gebruikten een Accela 1250 quaternaire pomp, pal autosampler en Q Exactive hybrid quadrupole-Orbitrap massaspectrometer (alle Thermo Wetenschappelijke) om de precursor ionen voor zowel ITPP en de interne standaard (m/z 301.9065 en 304.9253, respectievelijk), evenals de kenmerkende productionen (m/z 78.9580, 158.9243, en 524.8550). Zij ontwikkelden ook een bevestigingsprotocol voor verdachte urinemonsters, gebruikend een zwakke anionuitwisselings vaste-fase extractiemethode (WAX-SPE).
het team stelde vast dat hun methode specifiek is voor zowel screening als bevestiging, met een goede precisie over een concentratiebereik van respectievelijk 50-500 ng/mL en 5-125 ng/mL voor screening en bevestiging. Zij schatten de onderste detectielimieten op respectievelijk 15 ng/mL en 1 ng/mL voor screening en bevestiging. Ze melden ook geen significante afname van de itpp-concentratie in de urinematrix na drie maanden opslag, in overeenstemming met de verplichte dopingcontrole opslagperiode.
Görgens et al. presenteer hun methode als een gevoelig, betrouwbaar protocol voor screening en bevestiging van de aanwezigheid van ITPP in menselijke urine. Zij merken op dat HILIC scheiding maakt hun screening methode snel en tijd-effectief, met vrijwel geen monstervoorbereiding. De extra optie van bevestiging via vaste-fase extractie verhoogt de gevoeligheid en veelzijdigheid van het totale protocol. Het team stelt verder dat het flexibele karakter van hun aanpak het geschikt kan maken voor andere screeningstoepassingen, met name die met zeer polaire analyten.
referentie
1. Görgens, C., et al. (2014, juli) “Screening and confirmation of myo-inositol trispyrophosphate (ITPP) in human urine by hydrofilic interaction liquid chromatography high resolution / high accuracy mass spectrometry for doping control purposes,” Drug Testing and Analysis, doi: 10.1002/dta.1700.
Auteur: Melissa J. Mayer. Melissa is een freelance schrijfster die gespecialiseerd is in wetenschapsjournalistiek. Ze heeft passie voor en ervaring op het gebied van proteomica, cellulaire/moleculaire biologie, microbiologie, biochemie en immunologie. Melissa is ook tweetalig (Spaans) en heeft een onderwijscertificaat met een biologie goedkeuring.
