Modified Knott’ s Technique and Direct Blood Smear

de modified Knott ‘ s method wordt gebruikt voor de concentratie en identificatie van microfilariae, in het bijzonder de hartworm Dirofilaria immitis. Het moet worden onderscheiden van de niet-pathogene microfilaria van Dipetalonema reconditum (kortweg”Dipet”).

een direct bloeduitstrijkje kan tegelijkertijd worden gedaan. Het is een snelle, niet-concentratie test voor microfilaria. Dirofilaria en Dipet onderscheiden zich door hun motiliteitspatroon.

deze tests moeten altijd worden uitgevoerd wanneer een patiënt hartwormantigeen positief test, of wanneer er een reden is om te vermoeden dat de hond een hartwormziekte heeft of heeft gehad in het verleden. De aanwezigheid van Dirofilaria zal invloed hebben op het verloop en/of de keuze van de behandeling.

de Knott-test kan worden uitgevoerd zonder een directe uitstrijkje te doen, maar nooit een directe uitstrijkje te doen zonder een Knott-test te doen. De Knott ‘ s is een gevoeliger test omdat het de microfilaria concentreert zodat ze minder waarschijnlijk worden gemist tijdens microscopisch onderzoek.

Procedure voor direct uitstrijkje:

eenvoudig. Plaats een druppel bloed, bij voorkeur uit een EDTA tube of heparinized spuit, in het midden van een glaasje. Drop een deksel slip over top en onderzoek onder de microscoop op 10x macht. Dirofilaria zal een stationaire, kronkelende beweging hebben; Dipetalonema zal een snellere, directionele beweging vertonen en zal vaak direct van het veld schieten.

Procedure voor de gewijzigde Knott ‘ s techniek:

zorg ervoor dat u handschoenen draagt ter bescherming. Voeg met behulp van een 15 ml centrifugebuis ongeveer 10 ml 2% formaline (dit kan commercieel worden gekocht) toe aan 1 ml anticoagulerend bloed. Plaats uw duim over de bovenkant van de afgesloten buis en keer meerdere keren om om grondig te mengen. Centrifugeer gedurende 5 minuten bij 1000 tot 1500 rpm.

u zou een witachtige stekker aan de onderkant van de buis moeten kunnen zien na het spinnen. Gooi het supernatant weg in de juiste container voor gevaarlijk afval.

voeg met behulp van een lange glazen of plastic pipet een druppel nieuwe methyleenblauwe vlek

gebruik de pipet om de vlek te mengen met het sediment

voeg een druppel van dit mengsel toe aan het midden van een dia. Gooi een deksel slip op de top. Onderzoek op de microscoop onder 10x vermogen.

in tegenstelling tot de directe uitstrijkje, zal de microfilaria aanwezig zijn als stationair. Dirofilaria moet worden onderscheiden van Dipetalonema op basis van grootte en vorm. Gebruik de volgende tabel om u te helpen onderscheid te maken:

(Cornell University)

Nog een leuke test voor microfilaria

Vul een microhematocrit buis en spin down als het doen van een pcv.

leg de tube op een dia en leg deze op het microscoopstadium. Focus op de buffy coat op 10x power – als een hond hartworm positief is en circulerende microfilaria heeft, kun je de microfilaria zien kronkelen in de buffy coat!