Arthur Kornberg The Arthur Kornberg Papers

agora capaz de sintetizar todos os cinco nucleotídeos (um colega da Universidade de Washington encontrou uma enzima que fez o nucleotídeo timina), Kornberg se sentiu pronto para procurar as enzimas que montam nucleotídeos em RNA ou DNA. Por um curto período de tempo, o grupo de pesquisa trabalhou em ambos os ácidos nucléicos, mas em 1955 o laboratório de Severo Ochoa anunciou a descoberta de uma enzima que sintetizava RNA (embora fosse apenas uma cadeia semelhante a RNA); Kornberg então concentrou todos os esforços na síntese de DNA. Para encontrar a enzima crucial em extratos de células quebradas de bactérias E. coli, ele adicionou ATP, mais os nucleotídeos apropriados, marcados com isótopos radioativos para rastrear sua incorporação na cadeia de ácidos nucleicos e, em seguida, adicionou DNA como primer para a cadeia. Demorou muitos meses para alcançar um traço confiável da síntese com timidina radioativa, de modo que a atividade da enzima pudesse ser rastreada, mas isso foi realizado em 1956. Em seguida, Kornberg teve que isolar e purificar a enzima de montagem de DNA, que ele chamou de DNA polimerase, do extrato celular de bactérias, separando-a de todas as outras proteínas (incluindo muitas enzimas que interferem na síntese) usando uma ampla gama de procedimentos. Dentro de um ano, Kornberg foi capaz de sintetizar DNA de uma variedade de fontes com esta polimerase. Dois artigos descrevendo este trabalho foram submetidos ao Journal of Biological Chemistry em outubro de 1957. Os árbitros da JBC, no entanto, rejeitaram os artigos; alguns se opuseram a chamar o produto de “DNA”, preferindo o termo tecnicamente preciso, mas complicado, ” polideoxirribonucleotídeo.”Um insistiu que o produto deve ser mostrado para ter atividade genética para se qualificar como DNA (um critério atendido por muito poucos pesquisadores naquele momento). Enojado, Kornberg inicialmente retirou os artigos, mas eles foram publicados na edição de Maio de 1958 da JBC, depois que um novo editor assumiu seu cargo.

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