efetores alostéricos que interagem com a hemoglobina se ligam às moléculas de hemoglobina, regulando assim a captação e liberação de oxigênio. Drogas terapêuticas que ilícitas esta resposta carregam potencial de abuso significativo, uma vez que o aumento da oxigenação dos tecidos melhora o desempenho atlético. O novo efetor alostérico mioinositol trispirofosfato (ITPP) está atualmente em fase 1 ensaios clínicos para insuficiência cardíaca crônica e aplicações de câncer (sob a designação de OXY111A). Este composto já foi usado para melhorar o desempenho na indústria de corridas de cavalos e está prontamente disponível on-line na forma de suplementos nutricionais orais e até mesmo soluções injetáveis. O ITPP está incluído na lista proibida de substâncias da Agência Mundial Antidoping para atletas humanos; no entanto, ainda não existe um método para detectar essa substância na urina humana.
por esta razão, Görgens et al. (2014) se propôs a desenvolver um protocolo de triagem e confirmação simples e robusto para ITPP na urina humana.1 Porque o composto é altamente polar na natureza e, portanto, inadequado para inverteu-fase de cromatografia líquida, a equipe virou-se para hidrofílico interação cromatografia líquida (HILIC) e espectrometria de massa em tandem (MS/MS) para a análise da urina humana misturados com ITPP e padrão interno ITPP-d6. Os pesquisadores usaram uma bomba quaternária Accela 1250, um amostrador automático PAL e um espectrômetro de massa quadrupolo-Orbitrap híbrido exigente Q (todos termo científicos) para detectar os íons precursores tanto para ITPP quanto para o padrão interno (m/z 301.9065 e 304.9253, respectivamente), bem como os íons do produto de diagnóstico (m/z 78.9580, 158.9243 e 524.8550). Eles também desenvolveram um protocolo de confirmação para amostras de urina suspeitas, usando um método de extração de fase sólida de troca de ânion fraco (WAX-SPE).
a equipe determinou que seu método é específico para triagem e confirmação, com boa precisão em uma faixa de concentração de 50-500 ng/mL e 5-125 ng/mL para triagem e confirmação, respectivamente. Eles estimaram os limites inferiores de detecção em 15 ng/mL e 1 ng/mL, respectivamente, para triagem e confirmação. Eles também relatam nenhuma diminuição significativa na concentração de ITPP dentro da matriz de urina após três meses de armazenamento, consistente com o período de armazenamento de controle de doping obrigatório.
Görgens et al. apresente seu método como um protocolo sensível e confiável para triagem e confirmação da presença de ITPP na urina humana. Eles observam que a separação HILIC torna seu método de triagem rápido e eficaz no tempo, praticamente sem preparação de amostras. A opção adicional da confirmação através da extração da sólido-fase aumenta a sensibilidade e a versatilidade do protocolo total. A equipe postula ainda que a natureza flexível de sua abordagem pode torná-la adequada para outras aplicações de triagem, particularmente aquelas com analitos altamente polares.
Referência
1. Görgens, C., et al. (2014, julho) “triagem e confirmação de mioinositol trispirofosfato (ITPP) na urina humana por interação hidrofílica cromatografia líquida espectrometria de massa de alta resolução / alta precisão para fins de controle de doping”, teste e Análise de drogas, doi: 10.1002/dta.1700.
Autor Do Post: Melissa J. Mayer. Melissa é uma escritora freelance especializada em Jornalismo Científico. Possui paixão e experiência nas áreas de proteômica, biologia celular/molecular, Microbiologia, bioquímica e Imunologia. Melissa também é bilíngue (espanhol) e possui um certificado de ensino com um endosso de biologia.
