Fluorescência de tecnologias tem sido o método preferido para a detecção analíticos de detecção, diagnóstico médico, biotecnologia, tratamento de imagens e a expressão do gene por muitos anos. A fluorescência torna-se essencial para estudar processos moleculares com alta especificidade e sensibilidade através de uma variedade de processos biológicos. Um problema significativo para aplicações práticas de fluorescência é a aparente não linearidade da intensidade de fluorescência resultante de efeitos de filtro interno, espalhamento de amostras e absorção de componentes intrínsecos de amostras biológicas. A absorção da amostra pode conduzir ao efeito interno preliminar do filtro (tipo I efeito interno do filtro) e é o primeiro fator que deve ser considerado. Este é um fator relativamente simples a ser controlado em qualquer experimento de fluorescência. No entanto, muitas abordagens anteriores deram apenas métodos experimentais aproximados para corrigir o desvio dos resultados esperados. Nesta parte, estamos discutindo a origem do efeito primário do filtro interno e apresentando uma abordagem universal para corrigir o sinal de intensidade de fluorescência na faixa de absorção total. É importante ressaltar que apresentamos resultados experimentais diretos de como a correção funciona. Considera-se problemas emergentes de absorção variável em todo o seu espectro de absorção para todos os fluoróforos. Usamos rodamina 800 e demonstramos como corrigir adequadamente os espectros de excitação em uma ampla faixa de comprimento de onda. O segundo é o efeito de um absorvedor inerte que atenua a intensidade do feixe de excitação à medida que viaja através da cubeta, o que leva a um desvio significativo dos resultados observados. Como exemplo, estamos apresentando a extinção por fluorescência de um análogo de triptofano, NATA, por acrilamida e mostramos como os resultados corretamente corrigidos se comparam aos resultados errôneos iniciais. O procedimento é genérico e se aplica a muitas outras aplicações, como determinação de rendimento quântico, absorção de tecido/sangue ou absorção de aceitador em experimentos de traste.
