o método de Knott modificado é usado para a concentração e identificação de microfilárias, especificamente a Dirofilaria immitis Dirofilaria. Deve ser diferenciado da microfilaria não patogênica do Dipetalonema reconditum (“Dipet” para abreviar).
um esfregaço de sangue direto pode ser feito ao mesmo tempo. É um teste rápido, não-concentração para microfilaria. Dirofilaria e Dipet são diferenciados por seu padrão de motilidade.
esses testes devem sempre ser feitos sempre que um paciente testa antígeno de dirofilariose positivo, ou há qualquer motivo para suspeitar que o cão atualmente tem ou teve doença de dirofilariose no passado. A presença de Dirofilaria afetará o curso e / ou a escolha do tratamento.
o teste de Knott pode ser feito sem fazer um esfregaço direto, mas nunca faça um esfregaço direto sem fazer um teste de Knott. O Knott’s é um teste mais sensível porque concentra a microfilaria para que eles sejam menos propensos a serem perdidos durante o exame microscópico.
procedimento para esfregaço direto:
simples. Coloque uma gota de sangue, de preferência de um tubo EDTA ou seringa heparinizada, no centro de uma lâmina. Deixe cair um deslizamento da tampa sobre a parte superior e examine sob o microscópio no poder 10x. A Dirofilaria terá um movimento estacionário e contorcido; o Dipetalonema exibirá um movimento mais rápido e direcional e muitas vezes disparará direto do campo.
procedimento para a técnica de Knott modificada:
certifique-se de usar luvas para proteção. Usando um tubo de centrífuga de 15ml, adicione aproximadamente 10ml de formalina a 2% (isso pode ser comprado comercialmente) a 1 ml de sangue anticoagulado. Coloque o polegar sobre a parte superior do tubo tampado e inverta várias vezes para misturar bem. Centrífuga por 5 minutos a 1000 a 1500 rpms.
você deve ser capaz de visualizar um plugue esbranquiçado na parte inferior do tubo após girar. Descarte o sobrenadante no recipiente de resíduos perigosos adequado.
Usando um longo de vidro ou de plástico pipeta, adicionar uma gota de novo azul de metileno mancha
Use a pipeta para misturar a tinta com o sedimento
Adicionar uma gota da mistura para o centro de um slide. Solte um deslizamento de cobertura por cima. Examine no microscópio sob 10x de potência.
ao contrário do esfregaço direto, a microfilaria se apresentará como estacionária. Dirofilaria deve ser distinguida do Dipetalonema com base no tamanho e na forma. Use a tabela a seguir para ajudar você a diferenciar:
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Parâmetro |
D. immitus |
D. reconditum |
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Comprimento (mícrons) |
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Largura (mícrons) |
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Forma (extremidade anterior) |
Cônico |
blunt |
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Forma (corpo) |
em linha Reta |
curvo |
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Forma (cauda) |
Em linha reta |
Botão de gancho |
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o Número de presentes |
Poucos para muitos |
alguns |
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Movimento |
Estacionário |
Move-se através de slides |
(Cornell University)
Outra legal teste para microfilaria
Preencher um microhematocrit tubo e spin para baixo, como se fazer um pv.
coloque o tubo em um slide e coloque-o no estágio do microscópio. Concentre – se no casaco buffy em 10x power-se um cão é heartworm positivo e tem microfilaria circulante, você pode ver a microfilaria se contorcendo no casaco buffy!
