efectorii alosterici care interacționează cu hemoglobina se leagă de moleculele de hemoglobină, reglând astfel absorbția și eliberarea oxigenului. Medicamentele terapeutice care ilicesc acest răspuns au un potențial semnificativ de abuz, deoarece oxigenarea crescută a țesuturilor îmbunătățește performanța atletică. Noul efector alosteric mio-inozitol trispyrofosfat (ITPP) se află în prezent în studii clinice de fază 1 pentru insuficiență cardiacă cronică și aplicații pentru cancer (sub denumirea de OXY111A). Acest compus a fost deja utilizat pentru îmbunătățirea performanței în industria curselor de cai și este ușor disponibil online sub formă de suplimente nutritive orale și chiar soluții injectabile. ITPP este inclus pe lista de substanțe interzise a Agenției Mondiale antidoping pentru sportivii umani; cu toate acestea, nu există încă nicio metodă de detectare a acestei substanțe în urina umană.
din acest motiv, G Inkrgens și colab. (2014) și-a propus să dezvolte un protocol simplu, robust de screening și confirmare pentru ITPP în urina umană.1 deoarece compusul are o natură foarte polară și, prin urmare, nu este potrivit pentru cromatografia lichidă în fază inversă, echipa a apelat la cromatografia lichidă cu interacțiune hidrofilă (HILIC) și spectrometria de masă tandem (MS/MS) pentru analiza urinei umane cu itpp și standardul intern ITPP-d6. Cercetătorii au folosit o pompă cuaternară Accela 1250, un Autosampler PAL și un spectrometru de masă Q Exactiv hibrid quadrupole-Orbitrap (all Thermo Scientific) pentru a detecta ionii precursori atât pentru ITPP, cât și pentru standardul intern (m/z 301.9065 și 304.9253, respectiv), precum și ionii produsului de diagnosticare (m/z 78.9580, 158.9243 și 524.8550). De asemenea, au dezvoltat un protocol de confirmare pentru probele de urină suspecte, folosind o metodă slabă de extracție în fază solidă cu schimb de anioni (WAX-SPE).
echipa a stabilit că metoda lor este specifică atât pentru screening, cât și pentru confirmare, cu o precizie bună pe un interval de concentrație de 50-500 ng/mL și, respectiv, 5-125 ng/mL pentru screening și confirmare. Ei au estimat că limitele inferioare de detecție sunt de 15 ng/mL și, respectiv, 1 ng/mL pentru screening și confirmare. De asemenea, nu raportează o scădere semnificativă a concentrației ITPP în matricea de urină după trei luni de depozitare, în concordanță cu perioada obligatorie de depozitare a controlului doping.
G Inkrgens și colab. prezentați metoda lor ca un protocol sensibil și fiabil pentru screening și confirmarea prezenței ITPP în urina umană. Ei observă că separarea HILIC face ca metoda lor de screening să fie rapidă și eficientă în timp, practic fără pregătirea probelor. Opțiunea suplimentară de confirmare prin extracție în fază solidă crește sensibilitatea și versatilitatea protocolului total. Echipa susține în continuare că natura flexibilă a abordării lor o poate face potrivită pentru alte aplicații de screening, în special pentru cele cu analiți extrem de polari.
referință
1. G inkrgens, C., și colab. (2014, iulie) „screeningul și confirmarea trispirofosfatului de Mio-inozitol (ITPP) în urina umană prin cromatografie lichidă cu interacțiune hidrofilă de înaltă rezoluție / spectrometrie de masă de înaltă precizie pentru controlul dopajului”, testarea și analiza medicamentelor, doi: 10.1002/dta.1700.
Autor Mesaj: Melissa J. Mayer. Melissa este o scriitoare independentă specializată în jurnalismul științific. Are pasiune și experiență în domeniile proteomicii, biologiei celulare/moleculare, microbiologiei, biochimiei și imunologiei. Melissa este, de asemenea, bilingvă (spaniolă) și deține un certificat de predare cu o aprobare de biologie.
