deficitul complementului C4 și homozigozitatea HLA la pacienții cu infecții frecvente cu virusul Herpes simplex Intraoral de tip 1

rezumat

trei pacienți consecutivi fără imunodeficiență aparentă care au avut recurențe frecvente cu herpes simplex intraoral de tip 1, o complicație rară a infecției cu virusul herpes simplex, s-au B Izotipul componentei complementului C4 și a fi homozigot pentru antigenii HLA studiați. O combinație de homozigozitate HLA, care poate duce la afectarea recunoașterii celulelor T a peptidelor virale și deficiență în calea complementului clasic, care poate compromite neutralizarea virusului, poate predispune la infecții severe și frecvente cu virusul herpes simplex.

morbiditatea cauzată de infecția cu virusul herpes simplex de tip 1 (HSV-1) provine în principal din capacitatea HSV-1 de a se reactiva periodic. Herpesul labial recurent apare la 15% -40% dintre persoanele seropozitive . Persoanele imunocompetente au rareori leziuni intraorale. Dintre cei care o fac, 52% prezintă episoade recurente, frecvent diagnosticate greșit ca stomatită aftoasă sau eritem multiform . Leziunile apar predominant pe palatul dur și gingia și pot fi tratate eficient cu profilaxie antivirală pe termen lung.

eficiența răspunsului imun timpuriu la HSV-1 clar variază foarte mult . Se consideră că diferențele în ceea ce privește producția de anticorpi specifici și IFN-uri și anomaliile în funcția macrofagelor sau a celulelor NK sunt responsabile pentru diferențele dintre ratele de recurență și invazivitate. HSV – 1 are o moleculă de evaziune a complementului care blochează aproape complet calea complementului alternativ și activarea complexului terminal local . Neutralizarea virusului de către gazdă depinde probabil de activarea indusă de anticorpi a căii clasice. Totuși, rolul deficiențelor complementului în infecțiile cu HSV a primit puțină atenție .

în decurs de 1 an, 3 pacienți independenți din căsătorii neconsanguine au fost referiți la noi din cauza herpesului intraoral extrem de activ, fără imunodeficiență aparentă. Am studiat funcțiile complementului și genele factorului complementar C4 și HLA la acest mic grup de pacienți caucazieni. Rezultatele evidențiază caracteristici imunologice care pot predispune la infecția activă intraorală HSV-1.

metode. Aceste 3 paciente au prezentat infecție intraorală cu HSV-1 cu >10 recurențe anual, cu vezicule herpetice recurente predominant în palatul dur și gingie. Rata de recurență a rămas constantă sau a crescut în timp (Tabelul 1).

sângele a fost extras în tuburi care conțin heparină, EDTA (10 mM) sau fără anticoagulant. Probele au fost prelevate în timp ce pacienții erau asimptomatici.

anticorpii serici la HSV-1 și HSV-2 au fost măsurați prin EIA comerciale (HSV-1 Elisa IgG și HSV-2 Elisa IgG; diagnosticarea LMR). Probele pentru PCR HSV, detectarea antigenului și izolarea au fost prelevate din bazele veziculelor intraorale nou perforate. Izolarea HSV și analizele PCR specifice tipului au fost efectuate . Probele pentru detectarea antigenului HSV au fost preparate din tampoane prin citocentrifugare . Diapozitivele au fost colorate cu IgG anti-iepure HSV policlonal urmat de IgG anti—iepure marcat cu izotiocianat de fluoresceină (laboratoarele Jackson ImmunoResearch). Probele de țesut încorporate în parafină au fost colorate în mod similar. Nivelurile de IgG, IgA și IgM și concentrațiile subclaselor IgG au fost cuantificate prin nefelometrie cu anticorpi policlonali de la Behringwerke.

probele de ADN au fost genotipate pentru HLA-A, -B, -C și-DR prin intermediul kiturilor Comerciale de Pel-Freez (PF-ABC-SSP), un Lambda (SSP ABDR) sau INNO-Lipa (LiPA HLA-DRB1) cu rezoluții alele mici până la intermediare. Alotipurile complementului C4 au fost determinate electroforetic . Absența unui izotip a fost confirmată prin amplificarea PCR specifică izotipului genelor C4A și C4B .

nivelurile serice de C3 și C4 au fost cuantificate prin nefelometrie cu utilizarea anticorpilor policlonali și a probelor de referință de la Behringwerke. Activitățile clasice și alternative ale complementului hemolitic de cale au fost determinate prin teste standardizate de hemoliză în gel de la locul de legare.

activitățile celulelor mononucleare din sângele periferic (PBMC) au fost măsurate prin încorporarea timidinei după stimularea PBMC cu fitohemaglutinină, concanavalină A și mitogen pokeweed și s-au dovedit a fi normale (datele nu au fost prezentate) .

rezultate. Toți pacienții au prezentat > 10 recurențe HSV-1 anuale (tabelul 1) care au durat 5-10 zile, dar au fost complet suprimate cu terapie orală pe termen lung cu valaciclovir. Ameliorarea simptomatică a început în < 24 h. pacienții au prezentat multiple vezicule mici (cu diametrul de 1-3 mm) la locurile tipice pentru infecția intraorală cu HSV (tabelul 1), dar atipice pentru eritemul multiform intraoral sau stomatita aftoasă. Pacienții 1 și 3 au manifestat frecvent herpes labial tipic concomitent (tabelul 1). Infecția cu HSV-1 a devenit mai frecventă în timpul sarcinii la pacienta 1 și la pubertate la pacienta 3. Ambele au avut, de asemenea, semne de iritație meningeală cu rigiditate nucală și mialgie, fotofobie și cefalee incapacitantă în același timp cu leziunile herpetice. Nu au fost detectate niveluri crescute de proteine sau pleocitoză în LCR, iar testul PCR pentru HSV în LCR a fost negativ pentru pacientul 1. Pacienții 1 și 3 au prezentat infecții frecvente ale tractului respirator superior, iar pacientul 1 a prezentat sinuzită recurentă.

pacienții nu au prezentat citopenii sau anticorpi împotriva virusului HIV sau hepatitei B sau hepatitei C. Rezultatele examinărilor virologice și imunologice sunt prezentate în tabelele 1 și 2. Toți pacienții au fost seropozitivi pentru HSV-1. Diagnosticul histologic pentru pacientul 2 s-a bazat pe morfologia tipică a blisterului HSV și a fost confirmat prin imunostimularea specifică HSV. Toți au avut infecții intraorale HSV-1 în curs de desfășurare (tabelul 1) și au redus activitățile hemolitice ale căii clasice a complementului și nivelurile serice C4 (tabelul 1). Fenotiparea C4 a arătat o lipsă completă a proteinei C4A (1 pacient) sau a proteinei C4B (2 pacienți). Pacienții au fost homozigoți pentru alelele HLA clasa I și II (tabelul 2). Pacientul 2, care a fost homozigot pentru A1,B8, DR3, a avut un nivel scăzut de IgA seric (0,47 g/L).

discuție. În grupul nostru selectat de 3 pacienți, toți au avut infecții intraorale HSV-1 excepțional de active, au fost homozigoți pentru haplotipurile lor majore de complex de histocompatibilitate (MHC) și au avut o lipsă totală a proteinei C4A sau C4B din calea complementului clasic (tabelul 2) . Pacienții au astfel o combinație de tulburări subtile în proteinele MHC care pot compromite apărarea imună împotriva exacerbărilor HSV-1 în orofaringe.

se consideră că celulele T CD8+ t restricționate din clasa I sunt responsabile pentru curățarea HSV. Ratele variabile de vărsare și recurență și variația eficacității răspunsului imun timpuriu sunt rezultatul net al unei interacțiuni complexe între moleculele de evaziune imună ale HSV și răspunsul imun al pacientului . Este probabil ca, pe lângă celulele T, brațele care acționează rapid ale răspunsului imun să contribuie la acest stadiu incipient de apărare.

celulele T NK, mononucleare și CD4+, imunoglobulinele, factorii complementari și citokinele predominant de tip Th1 se găsesc în leziunile HSV timpurii. Primele limfocite care migrează în leziunile HSV sunt celulele T CD4+ și celulele NK, fiind responsabile pentru creșterea locală a producției de citokine. Produsele din clasa MHC I loci HLA-a și-B prezintă peptide la celulele T citotoxice T și NK T și cele din clasa II loci la celulele T CD4+. HSV – 1 poate interfera cu prezentarea antigenului de către moleculele MHC de clasa I și II și poate afecta recunoașterea celulelor T CD8+ și CD4+. Așa cum s-a sugerat în alte infecții virale, expresia peptidelor virale la celulele T CD8+ citotoxice precoce în timpul unei recurențe poate fi împiedicată de homozigozitatea HLA , posibil prin variabilitatea redusă a repertoriului antigenului HLA al pacienților, de exemplu, pe celulele epiteliale ale mucoasei. În cele din urmă, efectele producției de citokine vor depăși inhibarea expresiei HLA clasa I de către HSV, permițând celulelor T CD8+ să elimine celulele infectate cu virus . Homozigozitatea MHC a fost legată de o progresie accelerată a bolii în infecțiile virale . Acesta este, după cunoștințele noastre, primul studiu care a raportat o asociere între homozigozitatea HLA și recurențele simptomatice HSV.

atât haplotipurile MHC care conțin B8,DR3,cât și B35, CW4, au fost implicate în boala HSV recrudescentă și au sugerat că duc la o boală agresivă cauzată de viruși înveliți . Haplotipurile care includ antigenele A3, B35, A1, B8 și B15 apar sub formă de homozigot în populația finlandeză la frecvențe 0,8%, 0,3% și, respectiv, 2%. Frecvente pentru haplotipurile pacienților sunt ștergerile C4.

proteina C4 are 2 izotipuri, C4A și C4B, ale căror gene sunt codificate în regiunea MHC clasa III. După întreruperea legăturilor lor tiolesterice interne, proteinele C4A și C4B se leagă covalent de grupările amino sau hidroxil de pe moleculele țintă și acționează ca subunități în calea clasică C3 convertază, C4b2a. C4 are un polimorfism structural complex cu >40 alotipuri proteice recunoscute. Deficitul de C4 este cauzat de ștergeri segmentale, duplicări, conversii genetice sau mutații punctuale rezultând alele „nule” (Q0). Acestea apar cu frecvență înaltă. Aproximativ 35% dintre persoanele din toate rasele nu au 1 din cele 4 alele C4A sau C4B . Deficiențele totale de C4A și C4B, adică 2 alele nule în locii genei respective C4A sau C4B, apar la 3% și, respectiv, 8% din populația Finlandeză .

prevalența herpesului intraoral este necunoscută. Estimăm în mod conservator că este < 0,5%. În populația Finlandeză, prevalența homozigozității HLA pentru cele mai frecvente 9 haplotipuri este de 3%, iar pentru deficitul total de C4A sau C4B 11%. Prevalența tuturor acestor combinate ar fi astfel 1.65 la 100.000 de persoane, dar haplotipurile HLA și deficiențele C4 nu sunt independente în timp ce sunt legate. Probabilitatea ca 3 pacienți consecutivi cu herpes intraoral să le combine este minimă. De exemplu, printre 10.000 de pacienți spitalizați consecutivi, probabilitatea de a găsi 3 pacienți concordanți, conform distribuției lui Poisson, ar fi de 0,00064.

anticorpii specifici și complementul acționează în mod concertat pentru a neutraliza și opsoniza direct HSV și pentru a spori citotoxicitatea celulară dependentă de anticorpi. Pentru a evita aceste brațe de imunitate care acționează rapid, HSV-1 codifică proteine specifice. În primul rând, proteinele care leagă IgFc inhibă activitatea IgG și permit virusului și celulelor infectate să scape de atacul anticorpilor . În al doilea rând, glicoproteina transmembranară HSV-1 GC-1 protejează virionul și celulele infectate cu HSV împotriva neutralizării complementului, facilitând astfel răspândirea locală . Deși virusul pare să fie capabil să facă față căii alternative de completare, rezistența gazdei pare să depindă de calea clasică. Deficiențele în acesta sau în anticorpii care îl activează ar putea avea o influență profundă asupra răspândirii locale și a ratelor de recurență a HSV-1.

în concluzie, studiul nostru sugerează că o deficiență a oricăreia dintre cele 2 proteine C4 ar putea fi importantă în definirea susceptibilității la boala HSV-1 activă cronic. În plus, homozigozitatea HLA pare, de asemenea, un factor de susceptibilitate. Susceptibilitatea la o infecție virală extrem de severă poate fi astfel dictată de o combinație de defecte subtile în mai multe brațe ale sistemului imunitar.