efektory allosteryczne, które oddziałują z hemoglobiną, wiążą się z cząsteczkami hemoglobiny, regulując w ten sposób Pobór i uwalnianie tlenu. Leki terapeutyczne, które nielegalnie tę odpowiedź niosą znaczny potencjał nadużywania, ponieważ zwiększone natlenienie tkanek poprawia wyniki sportowe. Nowy allosteryczny efektor mio-inozytolu trispirofosforan (ITPP) jest obecnie w fazie 1 badań klinicznych dotyczących przewlekłej niewydolności serca i zastosowań nowotworowych (pod oznaczeniem OXY111A). Związek ten został już wykorzystany do poprawy wydajności w branży wyścigów konnych i jest łatwo dostępny online w postaci doustnych suplementów diety, a nawet roztworów do wstrzykiwania. ITPP znajduje się na liście substancji zakazanych przez Światową Agencję Antydopingową dla sportowców; jednak nie istnieje jeszcze metoda wykrywania tej substancji w ludzkim moczu.
z tego powodu Görgens et al. (2014) określone w celu opracowania prostego, solidnego badania przesiewowego i protokołu potwierdzenia dla itp w moczu człowieka.1 ponieważ związek ma charakter wysoce polarny i dlatego nie nadaje się do chromatografii cieczowej z odwróconą fazą, zespół zwrócił się do hydrofilowej chromatografii interakcji cieczowej (HILIC) i tandemowej spektrometrii masowej (MS/MS) do analizy moczu ludzkiego z dodatkiem ITPP i wewnętrznego wzorca ITPP-d6. Naukowcy wykorzystali pompę czwartorzędową Accela 1250, autosampler PAL i Hybrydowy spektrometr masowy Q Exactive quadrupole-Orbitrap (all Thermo Scientific) do wykrywania jonów prekursorowych zarówno dla ITPP, jak i wewnętrznego standardu (m/z 301.9065 i 304.9253), a także jony produktu diagnostycznego (m/z 78,9580, 158,9243 i 524,8550). Opracowali również protokół potwierdzający podejrzane próbki moczu, przy użyciu metody ekstrakcji w fazie stałej o słabym anionowymiennym (WAX-SPE).
zespół ustalił, że ich metoda jest specyficzna zarówno dla przesiewania, jak i potwierdzania, z dobrą precyzją w zakresie stężeń 50-500 ng/mL i 5-125 ng/mL odpowiednio dla przesiewania i potwierdzania. Oszacowano, że dolne granice wykrywalności wynoszą odpowiednio 15 ng / mL i 1 ng/mL dla celów badań przesiewowych i potwierdzenia. Nie stwierdzono również istotnego zmniejszenia stężenia ITPP w matrycy moczu po trzech miesiącach przechowywania, zgodnie z obowiązkowym okresem przechowywania kontrolnego dopingu.
Görgens et al. przedstaw swoją metodę jako wrażliwy, wiarygodny protokół badań przesiewowych i potwierdzający obecność ITPP w ludzkim moczu. Zauważają, że separacja HILOWA sprawia, że ich metoda przesiewania jest szybka i efektywna w czasie, praktycznie bez przygotowania próbki. Dodatkowa opcja potwierdzenia poprzez ekstrakcję w fazie stałej zwiększa czułość i wszechstronność całego protokołu. Zespół zakłada ponadto, że elastyczny charakter ich podejścia może sprawić, że będzie on odpowiedni do innych zastosowań przesiewowych, szczególnie tych z wysoce polarnymi analitami.
Referencja
1. Görgens, C., et al. (2014, lipiec) „Screening and confirmation of Myo-Inositol trispirophosphate (ITPP) in human urine by hydrophilic interaction liquid chromatography high resolution / high accuracy mass spectrometry for doping control purposes,” Drug Testing and Analysis, doi: 10.1002/dta.1700.
Autor Postu: Melissa J. Mayer. Melissa jest niezależną pisarką, która specjalizuje się w dziennikarstwie naukowym. Posiada pasję i doświadczenie w dziedzinie proteomiki, biologii komórkowej/molekularnej, mikrobiologii, biochemii i Immunologii. Melissa jest również dwujęzyczna (hiszpański) i posiada certyfikat nauczania z potwierdzeniem biologii.
