ogólnoustrojowa aktywność awermektyn przeciwko pchłom kotów (Siphonaptera: Pulicidae)

Streszczenie

Iwermektyna ma silną aktywność ogólnoustrojową przeciwko licznym gatunkom nicieni i stawonogów, ale w tych dwóch grupach są pewne ważne gatunki, takie jak pchła kota, Ctenocephalides felis (bouché), który wydaje się być dla niego oporny. W celu ustalenia, czy brak aktywności systemowej przeciwko C. felis jest specyficzny dla iwermektyny, lub jeśli jest to zjawisko w całej klasie, zbadano 20 pochodnych awermektyny w sztucznym systemie karmienia pcheł błonowych w stężeniach 20, 10 i 1 µg/ml. Wyniki wykazały, że Iwermektyna miała wartości lc90 i LC50 wobec pcheł odpowiednio 19,1 i 9,9 µg / ml. Tylko cztery z pozostałych 19 ocenianych związków posiadały zarówno wartości LC90, jak i LC50 silniejsze niż Iwermektyna, a nawet wtedy zaleta była skromna. Wśród tych czterech związków był dwukrotny wzrost siły działania w stosunku do iwermektyny, gdy rozważano wartości LC90 (zakres, 9,2–10.3 µg/ml) i 2 – do 8-krotnego zwiększenia wartości LC50 (zakres 1, 23–5, 26 µg/ml). Ani posiadanie, ani Liczba cukrów oleandrozylowych w kręgosłupie makrocyklicznym nie były istotne dla dodatkowej aktywności pcheł, ponieważ wśród tych czterech związków były dwa disacharydy, monosacharyd i aglikonu. Ponadto, dyspozycja wiązań między C-22 i 23 nie przyczyniła się do zwiększenia aktywności, ponieważ cząsteczki te składają się z członów o wiązaniach pojedynczych lub podwójnych. Jeden z tych analogów awermektyny został skalowany i testowany podskórnie u psa w dawce > 100 razy większej od komercyjnej dawki iwermektyny i zaobserwowano zerową skuteczność przeciwko pchłom. Wnioskujemy, że nawet najlepsza awermektyna in vitro nie ma potencjału in vivo, aby stać się komercyjnym doustnym lub podskórnym leczeniem pcheł dla zwierząt towarzyszących.

Klasa endektocydów awermektyny ma silną aktywność układową przeciwko licznym gatunkom nicieni i stawonogów (Egerton et al. 1979, 1980). Szczególnie uderzające, na przykład, są bliskie bezwzględnej skuteczności przeciwko robaczycom, takim jak niedojrzały robaczyca serca, Dirofilaria immitis, u psów w dawce 6,0 µg/kg (Campbell 1989) i przeciwko owadom, takim jak larwy wspólnego żarcia bydła, Hypoderma lineatum (Villers), u bydła w dawce 0,2 µg/kg (Drummond 1984). Jednak pomimo tej ogromnej siły działania, istnieją inne organizmy w tych grupach, które wydają się być oporne na iwermektynę. Klinicznie istotnym przykładem jest pchła kota, Ctenocephalides felis (Bouché). Iwermektynę podawano doustnie raz w tygodniu w dawce 0,5 mg/kg lub codziennie w 0.05 mg / kg i zaobserwowano nieaktywność wobec tego pasożyta u psów (Blair et al. 1984). Banks i in. (2000) oraz Shoop et al. (2001) potwierdził niezależnie te wyniki, wykazując, że Iwermektyna ma słabą aktywność układową przeciwko pchłom kota w testach karmienia Sztuczną błoną pcheł.

w celu ustalenia, czy brak ogólnoustrojowej aktywności przeciwko pchłom jest specyficzny dla iwermektyny, lub czy jest to zjawisko w całej klasie, zbadano 20 awermektyn w sztucznym systemie karmienia pcheł błonowych. Strategicznie dobrana seria badanych awermektyn zawierała przedstawicieli większości chemicznie dostępnych miejsc, które zostały wykorzystane wokół makrocyklu. Grupa obejmuje wszystkie naturalnie występujące awermektyny, a także półsyntetyczne elementy biologicznie ważnych serii aglikonów, monosacharydów i disacharydów. Do skomercjalizowanych związków włączono również abamektynę, iwermektynę, milbemycynę D i selamektynę. W tym artykule przedstawiamy względną moc tych członków rodziny awermektyny przeciwko pchłom poprzez testowanie w sztucznym systemie membranowym i pokazujemy wyniki skuteczności in vivo od psa podawanego podskórnie jedną z najsilniejszych badanych awermektyn.

materiały i metody

Greyhound.

zastosowany przez nas sztuczny system podawania pcheł membranowych jest modyfikacją „sztucznego psa” wyprodukowanego przez Jay R. Georgi (FleaData, Freeville, NY). Ten sztuczny system membranowy został zaprojektowany do zwalczania pcheł, ale zasugerowano również, że może testować działanie ogólnoustrojowych środków owadobójczych (Wade and Georgi 1988 i Pullen and Meola 1996) i został wykorzystany do odkrycia nowego indolu terpenu, kwasu nodulisporowego a (Shoop et al. 2001). We współpracy z Jayem R. Georgim zmodyfikowaliśmy sztucznego psa. Ten nowy system (rys. 1) otrzymał oznaczenie „Greyhound”, ponieważ został zaprojektowany tak, aby był bardziej wydajny, łatwiejszy w konfiguracji i umożliwiał jednoczesne testowanie większej liczby związków. W przeciwieństwie do sztucznego psa, który zawiera tylko 25, 5-cm klatek zawieszonych pojedynczo pod ogrzewaną obudową z pleksiglasu, nowy system zawiera wyjmowany kolektor 59 na 38 cm mieszczący 104, 2,5 cm klatki. Zastąpiliśmy również aluminiowe, niedysponowane tuleje podające plastikowymi tulejami CVC (Costar, Cambridge, MA). Plastikowe rękawy były usuwane po każdym użyciu, aby zminimalizować prawdopodobieństwo zanieczyszczenia lekami.

Hodowla Pcheł.

nasza Kolonia pcheł była utrzymywana na kotach trzymanych zgodnie z naszym instytucjonalnym Komitetem ds. Jaja zebrane od kotów inkubowano w temperaturze 28°C i 85% WILGOTNOŚCI WZGLĘDNEJ w pożywce składającej się z ośmiu części piasku i jednej części liofilizowanej krwi bydlęcej (California Spray Dry Company, Stockton, CA). Pchły stosowane w tym badaniu wyłoniły się z ich puparii w ciągu 48 godzin.

preparat złożony.

awermektyny badano w stężeniach 20, 10 i 1 µg/ml. Dwie replikacje każdego związku na każdym poziomie zostały przetestowane w porównaniu obok siebie przy użyciu dwóch naszych systemów podawania. Zastosowanym pojazdem był glikol polietylenowy 400 i sulfotlenek dimetylu (2:1). Użyto dziesięciu mikrolitrów pojazdu na mililitr heparynizowanej krwi bydlęcej. Wszystkie związki były fermentowane lub modyfikowane syntetycznie przez chemików Merck, z wyjątkiem selamektyny.

wstępne oczyszczanie selamektyny przebiegało następująco. Sześć ampułek rewolucji (240 mg każda) rozcieńczono w minimalnych objętościach CH2Cl2 i załadowano na podkładkę z żelu krzemionkowego (4 cale wysokości). Elucja gradientowa,

.

,

.