zmodyfikowana metoda Knotta jest stosowana do koncentracji i identyfikacji mikrofilariów, w szczególności Dirofilaria immitis. Należy go odróżnić od niepatogennej mikrofilarii Dipetalonema reconditum (w skrócie” Dipet”).
bezpośredni rozmaz krwi można wykonać w tym samym czasie. Jest to szybki, nieskoncentrowany test na mikrofilarię. Dirofilaria i Dipet są zróżnicowane według ich wzoru ruchliwości.
te testy powinny być zawsze wykonywane, gdy pacjent testuje antygen dirofilarioza dodatni, lub istnieje jakikolwiek powód, aby podejrzewać psa obecnie ma lub miał dirofilarioza w przeszłości. Obecność dirofilarii wpłynie na przebieg i / lub wybór leczenia.
Test Knotta można wykonać bez bezpośredniego rozmazu, ale nigdy nie rób bezpośredniego rozmazu bez wykonania testu Knotta. Knott ’ s jest bardziej czułym testem, ponieważ koncentruje mikrofilarię, dzięki czemu są mniej prawdopodobne, że zostaną pominięte podczas badania mikroskopowego.
procedura bezpośredniego rozmazu:
proste. Umieść kroplę krwi, najlepiej z rurki EDTA lub strzykawki z heparyną, na środku szkiełka. Upuść pokrywę poślizgu na górze i zbadać pod mikroskopem na 10x mocy. Dirofilaria będzie miała nieruchomy, wijący się ruch; Dipetalonema będzie wykazywać szybszy, Kierunkowy ruch i często będzie strzelać prosto z pola.
procedura dla zmodyfikowanej techniki Knotta:
upewnij się, że masz rękawice ochronne. Używając probówki wirówki o pojemności 15 ml, dodaj około 10 ml 2% formaliny (można ją kupić komercyjnie) do 1 ml krwi przeciwzakrzepowej. Umieść kciuk na górze zamkniętej rurki i odwróć kilka razy, aby dokładnie wymieszać. Odwirować przez 5 minut przy 1000 do 1500 obr. / min.
powinieneś być w stanie wizualizować białawą wtyczkę na dole rury po wirowaniu. Supernatant należy wyrzucić do odpowiedniego pojemnika na odpady niebezpieczne.
za pomocą długiej szklanej lub plastikowej pipety dodać kroplę nowej bejcy z błękitu metylenowego
użyj pipety, aby wymieszać bejcę z osadem
dodaj kroplę tej mieszanki do środka szkiełka. Upuść okładkę na górze. Zbadaj na mikroskopie pod mocą 10x.
w przeciwieństwie do rozmazu bezpośredniego mikrofilaria występuje jako nieruchoma. Dirofilaria należy odróżnić od Dipetalonema na podstawie wielkości i kształtu. Skorzystaj z poniższej tabeli, aby pomóc ci rozróżnić:
|
parametr |
D. immitus |
D. reconditum |
|
Długość (mikrony) |
||
|
Szerokość (mikrony) |
||
|
kształt (przedni koniec) |
stożkowe |
blunt |
|
kształt (ciało) |
prosto |
zakrzywione |
|
kształt (ogon) |
prosto |
Hak na guziki |
|
liczba obecnych |
kilka do wielu |
kilka |
|
ruch |
stacjonarne |
przesuwa się po slajdzie |
(Cornell University)
kolejny fajny test na mikrofilarię
napełnij probówkę mikrohematokrytu i Zakręć w dół, jakby robił pcv.
połóż rurkę na szkiełku i połóż ją na etapie mikroskopu. Skup się na płaszczu buffy na mocy 10x-jeśli pies ma robaczycę serca i ma mikrofilarię krążącą, możesz zobaczyć mikrofilarię wijącą się w płaszczu buffy!
