allosteriska effektorer som interagerar med hemoglobin binder till hemoglobinmolekylerna och reglerar därmed syreupptag och frisättning. Terapeutiska läkemedel som olagligt detta svar har betydande missbrukspotential, eftersom ökad syresättning av vävnaderna förbättrar atletisk prestanda. Den nya allosteriska effektorn myo – inositol trispyrofosfat (ITPP) är för närvarande i fas 1 kliniska prövningar för kronisk hjärtsvikt och cancerapplikationer (under beteckningen OXY111A). Denna förening har redan använts för prestationsförbättring i hästkapplöpningsindustrin och är lätt tillgänglig online i form av orala näringstillskott och till och med injicerbara lösningar. ITPP ingår i World Anti-Doping Agencys förbjudna lista över ämnen för mänskliga idrottare; det finns dock ingen metod för att upptäcka detta ämne i mänsklig urin.
av denna anledning, g oc-Rrgens et al. (2014) bestämde sig för att utveckla ett enkelt, robust screening-och bekräftelseprotokoll för ITPP i mänsklig urin.1 eftersom föreningen är mycket polär i naturen och därför olämplig för omvänd fas vätskekromatografi, vände sig laget till hydrofil interaktion vätskekromatografi (HILIC) och tandemmasspektrometri (MS/MS) för analys av human urin spikad med ITPP och intern standard ITPP-d6. Forskarna använde en Accela 1250 quaternary pump, PAL autosampler och Q Exactive hybrid quadrupol-Orbitrap masspektrometer (all Thermo Scientific) för att detektera prekursorjonerna för både ITPP och den interna standarden (m/z 301.9065 och 304.9253, respektive), såväl som de diagnostiska produktjonerna (m/z 78.9580, 158.9243 och 524.8550). De utvecklade också ett bekräftelseprotokoll för misstänkta urinprover, med användning av en svag anjonbyte fastfas extraktionsmetod (WAX-SPE).
teamet bestämde att deras metod är specifik för både screening och bekräftelse, med god precision över ett koncentrationsområde på 50-500 ng/mL respektive 5-125 ng/mL för screening respektive bekräftelse. De uppskattade de lägre detektionsgränserna till 15 ng/mL respektive 1 ng / mL för screening och bekräftelse. De rapporterar inte heller någon signifikant minskning av ITPP-koncentrationen i urinmatrisen efter tre månaders lagring, i överensstämmelse med den obligatoriska dopingkontrollens lagringsperiod.
g. presentera deras metod som ett känsligt, pålitligt protokoll för screening och bekräftelse av närvaron av ITPP i human urin. De noterar att HILIC separation gör deras screeningmetod snabb och tidseffektiv, med praktiskt taget ingen provberedning. Det extra alternativet för bekräftelse via extraktion i fast fas ökar känsligheten och mångsidigheten i totalprotokollet. Teamet hävdar vidare att den flexibla karaktären av deras tillvägagångssätt kan göra den lämplig för andra screeningapplikationer, särskilt de med mycket polära analyter.
referens
1. C., et al. (2014, juli)” Screening och bekräftelse av myo-inositol trispyrofosfat (ITPP) i human urin genom hydrofil interaktion vätskekromatografi hög upplösning / hög noggrannhet masspektrometri för dopingkontrolländamål, ” drogtestning och analys, doi: 10.1002/dta.1700.
Inlägg Författare: Melissa J. Mayer. Melissa är en frilansskribent som specialiserat sig på vetenskapsjournalistik. Hon har passion för och erfarenhet inom områdena proteomik, cellulär/molekylärbiologi, mikrobiologi, biokemi och immunologi. Melissa är också tvåspråkig (spanska) och har ett undervisningsbevis med biologigodkännande.
