Fluorescensteknologier har varit den föredragna metoden för detektion, analytisk avkänning, medicinsk diagnostik, bioteknik, bildbehandling och genuttryck i många år. Fluorescens blir avgörande för att studera molekylära processer med hög specificitet och känslighet genom en mängd olika biologiska processer. Ett signifikant problem för praktiska fluorescensapplikationer är den uppenbara icke-linjäriteten hos fluorescensintensiteten som härrör från inre filtereffekter, provspridning och absorption av inneboende komponenter i biologiska prover. Provabsorption kan leda till den primära inre filtereffekten (typ i inre filtereffekt) och är den första faktorn som bör beaktas. Detta är en relativt enkel faktor som ska kontrolleras i något fluorescensexperiment. Många tidigare tillvägagångssätt har emellertid endast gett ungefärliga experimentella metoder för att korrigera avvikelsen från förväntade resultat. I denna del diskuterar vi ursprunget till den primära inre filtereffekten och presenterar ett universellt tillvägagångssätt för att korrigera fluorescensintensitetssignalen i hela absorptionsområdet. Viktigt är att vi presenterar direkta experimentella resultat av hur korrigeringen fungerar. Man betraktar problem som uppstår från varierande absorption över dess absorptionsspektrum för alla fluoroforer. Vi använder Rhodamine 800 och visar hur man korrekt korrigerar excitationsspektra i ett brett våglängdsområde. För det andra är effekten av en inert absorberare som dämpar intensiteten hos exciteringsstrålen när den färdas genom kyvetten, vilket leder till en signifikant avvikelse från observerade resultat. Som ett exempel presenterar vi fluorescenssläckning av en tryptofananalog, NATA, av akrylamid och vi visar hur korrekt korrigerade resultat jämför med de initiala felaktiga resultaten. Förfarandet är generiskt och gäller för många andra applikationer som bestämning av kvantutbyte, vävnad/blodabsorption eller acceptorabsorption i FRET-experiment.
