Allosteriske effektorer som interagerer med hemoglobin binder seg til hemoglobinmolekylene, og regulerer dermed oksygenopptak og frigjøring. Terapeutiske legemidler som ulovlig denne responsen bære betydelig misbruk potensial, siden økt oksygenering av vev forbedrer atletisk ytelse. Den nye allosteriske effektor myo-inositol trispyrophosphate (ITPP) er for tiden i fase 1 kliniske studier for kronisk hjertesvikt og kreftapplikasjoner (under betegnelsen OXY111A). Denne forbindelsen har allerede blitt brukt til ytelsesforbedring i hesteveddeløpsbransjen og er lett tilgjengelig online i form av orale kosttilskudd og til og med injiserbare løsninger. ITPP er inkludert På World Anti-Doping Agency ‘ s forbudte liste over stoffer for menneskelige idrettsutøvere; det finnes imidlertid ingen metode for å oppdage dette stoffet i human urin.
Av denne grunn, Gö Et al. (2014) satt ut for å utvikle en enkel, robust screening og bekreftelsesprotokoll for ITPP i human urin.1 fordi forbindelsen er svært polar i naturen og derfor uegnet for omvendt fase væskekromatografi, vendte teamet seg til hydrofil interaksjon væskekromatografi (HILISK) og tandem massespektrometri (MS/MS) for analyse av human urin spiked MED ITPP og intern STANDARD ITPP-d6. Forskerne brukte En Accela 1250 kvaternær pumpe, pal autosampler og Q Exactive hybrid quadrupole-Orbitrap massespektrometer (all Thermo Scientific) for å oppdage forløperioner for BÅDE ITPP og den interne standarden (m/z 301.9065 og 304.9253, henholdsvis), så vel som de diagnostiske produktioner (m/z 78.9580, 158.9243 og 524.8550). De utviklet også en bekreftelsesprotokoll for mistenkelige urinprøver, ved hjelp av en svak anionutvekslingsmetode (WAX-SPE).
teamet bestemte at deres metode er spesifikk for både screening og bekreftelse, med god presisjon over et konsentrasjonsområde på henholdsvis 50-500 ng/mL og 5-125 ng/mL for screening og bekreftelse. De estimerte at de nedre grensene for deteksjon var henholdsvis 15 ng/mL og 1 ng/mL for screening og bekreftelse. DE rapporterer heller ingen signifikant reduksjon I ITPP-konsentrasjonen i urinmatrisen etter tre måneders lagring, i samsvar med den obligatoriske dopingkontrollperioden.
Gö et al. presentere sin metode som en sensitiv, pålitelig protokoll for screening og bekreftelse av tilstedeværelsen AV ITPP i human urin. DE merker AT HILISK separasjon gjør screeningsmetoden rask og tidseffektiv, med nesten ingen prøvepreparering. Det ekstra alternativet for bekreftelse via fastfaseutvinning øker følsomheten og allsidigheten til den totale protokollen. Teamet hevder videre at den fleksible karakteren av deres tilnærming kan gjøre den egnet for andre screeningsapplikasjoner, spesielt de med svært polare analytter.
Referanse
1. Gö, C., et al. (2014, juli) «Screening og bekreftelse av myo-inositol trispyrophosphate (ITPP) i human urin ved hydrofil interaksjon væskekromatografi høy oppløsning / høy nøyaktighet massespektrometri for doping kontroll formål,» Drug Testing Og Analyse, doi: 10.1002/dta.1700.
Innlegg Forfatter: Melissa J. Mayer. Melissa er frilansskribent som spesialiserer seg på vitenskapsjournalistikk. Hun har lidenskap for og erfaring innen proteomikk,cellulær / molekylærbiologi, mikrobiologi, biokjemi og immunologi. Melissa er også tospråklig (spansk) og har et undervisningssertifikat med en biologi påtegning.
