(Merk: i den følgende beskrivelsen er formatet av analysen å immobilisere liganden for å måle fri reseptor i prøven. Omvendt kan reseptoren bli immobilisert for å måle fri ligand i prøven, avhengig av materialene som brukes.)
Måling av den frie reseptoren oppnås ved kort utsette prøveblandingen til en fast fase på hvilken ligand er immobilisert. Eksponeringstiden er kritisk fordi det å holde samspillstiden til prøven til den faste fasen ganske kort resulterer i en situasjon der den eneste signifikante bindingen til den faste fasen er fra den frie reseptoren. Kinetic Exclusion Assay er i kontrast til en konkurranse assay der likevekt løsningen er i kontakt med den faste fase lenge nok for den faste fase ligand å konkurrere om løsningsreseptoren.
fordelen Med KinExA er at signalet fra den fangede reseptoren bare representerer konsentrasjonen som er fri i løsningen. Å vite likevektskonsentrasjonen av reseptoren tillater bestemmelse av bindingskonstantene som beskrevet På Reversibel Bindende side.
de kommersielt tilgjengelige instrumentene for å utføre KinExA-analyser (Sapidyne ‘ S KinExA 4000, 3200 og 3100) bruker en liten kolonne partikler gjennom hvilken prøven og andre reagenser passeres. Kontakttiden for en hvilken som helst del av prøven med den faste fasen er da transittiden gjennom kolonnen og kan styres av den valgte strømningshastigheten (fra rundt 50 millisekunder til omtrent et sekund).
Systemer med nM-områdebindere eller strammere vil være i kinetic exclusion assay-modus (KinExA-modus). Svakere bindemidler kan fortsatt måles, men kan kreve ekstra forsiktighet for å unngå forstyrrelse av prøven fra målingen. KinExA er spesielt godt egnet for måling av affinitet og kinetikk og fungerer også som en forbedret immunanalyseplattform. En mer detaljert forklaring Av KinExA-målingene er inkludert nedenfor.
