Fluorescens teknologier har vært den foretrukne metoden for deteksjon, analytisk sensing, medisinsk diagnostikk, bioteknologi, bildebehandling, og genuttrykk i mange år. Fluorescens blir viktig for å studere molekylære prosesser med høy spesifisitet og følsomhet gjennom en rekke biologiske prosesser. Et betydelig problem for praktiske fluorescensapplikasjoner er den tilsynelatende ikke-lineariteten av fluorescensintensiteten som følge av indre filtereffekter, prøvespredning og absorpsjon av iboende komponenter i biologiske prøver. Prøveabsorpsjon kan føre til den primære indre filtereffekten (type i indre filtereffekt) og er den første faktoren som bør vurderes. Dette er en relativt enkel faktor som skal kontrolleres i et fluorescensforsøk. Mange tidligere tilnærminger har imidlertid bare gitt omtrentlige eksperimentelle metoder for å korrigere avviket fra forventede resultater. I denne delen diskuterer vi opprinnelsen til den primære indre filtereffekten og presenterer en universell tilnærming for å korrigere fluorescensintensitetssignalet i hele absorpsjonsområdet. Det er viktig at vi presenterer direkte eksperimentelle resultater av hvordan korreksjonen fungerer. Man vurderer problemer som kommer fra varierende absorpsjon over sitt absorpsjonsspekter for alle fluoroforer. Vi bruker Rhodamin 800 og demonstrerer hvordan du korrekt korrigerer eksitasjonsspektrene i et bredt bølgelengdeområde. For det andre er effekten av en inert absorber som demper intensiteten av eksitasjonsstrålen når den beveger seg gjennom kuvetten, noe som fører til en signifikant avvik av observerte resultater. Som et eksempel presenterer vi fluorescensslokking av EN tryptofananalog, NATA, av akrylamid, og vi viser hvordan riktig korrigerte resultater sammenligner med de første feilaktige resultatene. Prosedyren er generisk og gjelder for mange andre applikasjoner som kvanteutbyttebestemmelse, vev/blodabsorpsjon eller akseptorabsorpsjon i FRETEKSPERIMENTER.
