Knockin mouse definuje zvířecí model, ve kterém je genová sekvence zájmu změněna substitucí jeden za jednoho transgenem nebo přidáním genových sekvencí, které se nenacházejí v lokusu.
vložení transgenu se obvykle provádí v konkrétních lokusech. Tento“ cílený “ přístup způsobuje méně poruch transkripčně aktivního genetického prostředí.
Knockinové myši jsou vhodné pro širokou škálu aplikací, od studia regulačních prvků, jako jsou promotory, až po produkci terapeuticky užitečných humanizovaných protilátek.
naše Knockin myší model řešení
kromě konvenčních Knockinů, kde je genová sekvence zájmu přidána do endogenního lokusu, nabízíme sadu běžně používaných řešení:
- Quick Knockin™ (Rosa26 a Hprt)
Plná kontrola vaší genové exprese zaměřením na nejlépe studované permisivní lokusy Rosa26 a Hprt.
- bodová mutace Knockin mouse
ovlivňuje funkci daného proteinu (zisk nebo ztráta funkce) jedním nebo více mutovanými nukleotidy
- Reporter mouse
monitoruje genetické události, funkci bílkovin, lokalizaci a obchodování s buňkami
- humanizované modely myší
nahrazují sekvenci genu myši lidským protějškem
podmíněná aktivace inzerce nebo substitucí genů
všechny návrhy Knockinů mohou nést podmínky, které umožňují aktivaci nebo substituci genu: A) ve specifických typech buněk v určité tkáni, zatímco jiné typy buněk a tkáně vykazují nemodifikovanou, funkční genovou expresi a / nebo B) dočasně v daném časovém bodě u embryonálních, postnatálních nebo dospělých zvířat.
obvykle se používají dva běžné přístupy:
lox-STOP-lox
rekombináza Cre rozpoznává lokusy rekombinačního loxP, které způsobují deleci STOP sekvence mezi dvěma loxp místy, což umožňuje transkripci vašeho mutačního genu, který vás zajímá.
FLEx
loxP i lox511 jsou rozpoznávány rekombinázou Cre, ale lox511 weby mohou rekombinovat pouze s jinými lox511 weby, nikoli s loxp weby.
když je sekvence DNA lemována lox místy v protichůdných orientacích, Cre převrátí sekvenci mezi místy. Pokud je sekvence DNA lemována loxovými místy ve stejné orientaci, Cre tuto sekvenci vyřízne.
kombinací typu lox stránek, počtu a orientace lox stránek, které obklopují vaše geny zájmu, lze vytvořit výkonný nástroj FLEx pro vaše specifické vědecké potřeby.
pokud jde o přístup lox-STOP-lox, exprimace rekombinázy Cre ve specifickém buněčném typu nebo tkáni vede k tkáňové specifické mutované genové expresi a použití induktorem aktivované CRE rekombinázy vede k časově mutované genové expresi v přítomnosti induktoru, jako je tamoxifen.
